平移血管复合同种异体移植（VCA）研究一种改进的异位猪后肢移植模型

Summary

血管化复合Allotransplantations（VCA）已成为临床现实。然而，VCA的广泛临床应用是由慢性多药免疫抑制的限制。作者提出一个可靠和可重复的大动物模型来翻译新型免疫调节策略，可以最大限度地减少或消除潜在的免疫抑制的VCA的需要。

Abstract

血管化复合同种异体移植（VCA），如手和脸移植手术代表了复杂的骨骼肌肉创伤和破坏性的组织损失一个可行的治疗选择。尽管有利和非常令人鼓舞的初，中级实用成果，甩一个VCA的高免疫原性的皮肤组件和慢性多药免疫抑制的潜在不利影响的继续妨碍VCA的广泛临床应用。因此，研究这本小说领域需要关注与VCA独特的免疫功能翻译研究和制定免疫调节和免疫耐受诱导下的VCA，而不需要长期免疫抑制的新型免疫调节策略。

本文介绍一个可靠和可重复的平移大型动物VCA的是被包括在MHC定义的猪后腿异位异体肢体移植的骨肌皮瓣模型。 BRIEFLY，良好的血管化皮桨确定了利用近红外激光血管造影大腿前内侧区。底层肌肉，膝关节，股骨远端和胫骨近端的收获上的股骨血管蒂。这种移植可以认为既是一个VCA和血管骨髓移植以其独特的免疫特权功能。移植物移植到腹部皮下口袋受体动物用形象化的背外侧区的免疫监测皮肤组件。

三种手术团队在充分协调的方式同时工作，以减少麻醉和缺血时间，从而提高了这种模式的效率，并减少实验协议潜在的混杂因素。该模型作为基础，为旨在减少和可能省去在VCA慢性多药物的免疫抑制将来的治疗策略。

Introduction

血管化复合同种异体移植（VCA），如手和脸移植手术是目前临床的现实与世界各地¹²进行了大量的手和脸移植手术。尽管早期和中间结果是有利的，高度鼓励^2，慢性免疫抑制多药的要求继续限制了它的广泛临床应用。在VCA的小鼠模型，包括超显微吻合和nonsuture袖口¹³技术的进步^，3铺平了道路，以更好地了解在VCA同种免疫反应。免疫调节无数的协议已经提出了基于我们更好地了解VCA免疫机制的临床应用，但他们需要在一个大动物模型，这将是合理预测其在人体中⁷的性能进行验证。基于人类和猪的器官系统之间的生理和免疫学的相似<sup> 6，猪VCA模型可以被认为是可靠和具有成本效益的替代品，以⁹犬和非人灵长类动物模型^1。

本文提供了在我们的MHC定义的猪异位后肢移植模型，它作为基础，为我们的目的是诱导免疫耐受的VCA，从而扩大其临床应用当前和未来的免疫策略所使用的方法的详细介绍。我们利用育成纯合性在猪白细胞抗原位点专门为他们在移植相关研究¹¹利用良好的特点近交系猪。我们提出基于股血管血管化骨肌皮瓣。皮瓣包含完整的血管骨髓在股骨远端和胫骨近端。前内侧大腿皮肤也被包括在接枝和被形象化到受体动物的免疫监视的最免疫原性组分邻背外侧方面F中的VCA。背外侧的定位有利于临床检查在站立和坐姿，并保持移植皮肤比较干净。

Ustener 等人介绍了VCA的第一个大型动物平移模型通过移植前肢桡骨肌皮瓣远交农场的猪只¹⁵之一。该小组利用这个模型来演示首次急性排斥反应的VCA其中包括高度免疫原性的皮肤组件可以被延迟，并与临床相关的治疗策略无显著药物特有的并发症和副作用。在这项研究中获得有利的结果随后内置在设计药物疗法为人类移植重建一个基本步骤。虽然这些早期的猪VCA模型是非常适合开发的协议，以防止排斥反应的皮肤，肌肉，骨骼，神经和它们缺乏专门的结构，例如关节cartilag船只e和关节滑膜。后续工作的重点包括数字内侧的动物，因此有必要全长铸安置，以防止移植物移位^14。虽然适当的调查拒绝肢体移植的所有主要组件，这种模式的主要限制之一是由于铸造安置移植后卧床困难。因此，异位猪异体肢体移植模型，包括胫骨，腓骨，膝关节，股骨下端，周围的肌肉和皮肤桨，创建了到主要研究VCA的免疫学方面的同时，允许动物自由术后用最少morbidit ⁸走动。

的良好表征的SLA定义的近交系猪通过戴维H萨克斯博士的开创性工作的发展带动了平移VCA研究的新时代。利用异位后肢移植模型中一个小的抗原不匹配的设置，垫HES 等 ¹⁰证实肌肉骨骼成分的无限期生存与环孢素治疗的短期课程。皮肤组件生存，但是，只有当相比，没有任何治疗的控制延长。移植物的皮肤成分的损失归因于一种分离和高度有力的免疫应答，特别是在表皮。同样，使用完全不匹配的猪T细胞耗竭，环孢素和诱导耐受只有肌肉骨骼成分与皮肤成分的细胞因子动员的供者外周血单核细胞中的短期课程仍然拒绝^5。这种现象，被称为“分裂宽容”，带来了VCA研究模式的转变与更加注重高免疫原性的皮肤组件，这也是广大迄今为止已进行重建移植的一个组成部分上。

在这个修改后的模型，我们利用端 – 端吻合者ligatin克收件人股动脉并旋转它头侧（ 图1）。这不仅降低了局部缺血时通过允许使用常规的连接装置，而且还降低吻合失败的几率。我们并没有观察到以下的股动脉在我们的收件人表明侧支循环是足以提供血管原生腿结扎任何缺血事件。另外，在该改性方法中，外在皮肤组件是基于底层穿支血管动员和被横向定位（ 图1）相反，在传统的模型¹⁰腹侧腹股沟位置。这使得移植物方便的可视化免疫监视在站立或动物的坐姿。

因此，可靠的和可重现的大型动物模型是必不可少的探讨耐受诱导策略对VCA的皮肤组分和开发新型Noninvasive免疫监视策略，更好地预测移植物存活的。

Protocol

在这个视频发布，所有动物的程序按照批准的约翰·霍普金斯大学实验动物管理和使用委员会（IACUC）动物的协议进行。 1。术前规划我们利用MHC-MGH定义在我们的翻译研究近交系小型猪（15-20公斤）为异体肢体移植，其中一名男性捐赠者提供了四肢两女受助人（ 图1）。手术前，供体和受体动物由兽医进行全面的临床评估。 为了尽量减少麻醉和缺血?…

Representative Results

二十四SLA定义的猪异位后肢移植是用我们的技术改良与78分钟（：62-94分钟范围），平均缺血时间进行。移植物插入和背外侧皮肤桨的定位是毫无困难地在所有动物中实现。近红外激光血管造影显示出优异的移植灌注在所有收件人。最初的12静脉吻合均采用传统的缝合技术进行，而最后12静脉吻合均使用血管耦合装置进行。一个动物与传统缝合技术需要再吻合时，静脉血栓后立即过程识别。无并发?…

Discussion

从历史上看，异位后肢移植协议包括一个皮肤桨向腹侧腹壁的外化和船只吻合的端 – 侧的方式（2004 Hettiarachty）。然而，在我们修改的方法，一个倒皮瓣insetting和终端到终端的吻合带给肌肤更桨侧向，从而促进免疫监测动物的站立姿势。腓肠动脉的近红外激光血管造影进一步的鉴定和最大灌注区改善皮肤桨的可靠性。

在我们的改装技术，进行端 – 端吻合股血管之间，以减少相…

Materials

Name of the Reagent	Company	Catalogue Number	Comments (optional)
			REAGENTS
HTK	Custodial	N/A
			EQUIPMENT
Electric Pen Drive	Synthes, Westchester PA	05.001.011	Reciprocating saw
Vascular Coupling device	Synovis, Newtown PA	21003B