Western Blot

L’immunotransfert est utilisé pour identifier la présence de protéines spécifiques dans des échantillons séparés par électrophorèse. Faisant suite à la séparation par une technique, connue sous le nom d’électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de sodium, ou SDS-PAGE, l’immunotransfert est utilisé pour déplacer les protéines depuis un gel polyacrylamide vers un morceau de membrane qui piège les protéines dans leur emplacement respectif. Ensuite, les membranes sont sondées avec des anticorps dans un processus appelé immunotransfert. L’immunotransfert utilise les liaisons anticorps-protéine et anticorps-anticorps à travers des sites spécifiques de reconnaissance, fournissant la haute précision nécessaire pour identifier une seule protéine. La détection d’anticorps se fait en utilisant des systèmes rapporteurs ce qui inclu l’utilisation d’enzymes. Les enzymes peuvent être attachés à la fin d’un anticorps et réagir avec le substrat pour produire des changements de couleur ou de lumière. Ces signaux peuvent alors être imagés et quantifiés en utilisant un processus appelé densitométrie.

Cette vidéo-article présente une vue d’ensemble de la technique d’immunotransfert en décrivant le transfert, l’utilisation de la détection d’anticorps et l’analyse d’image. Les étapes impliquées dans l’immunotransfert tel que l’assemblage du sandwich de transfert et les conditions de transfert sont discutés en détails, aussi bien que la théorie sous-jacente aux liaisons d’anticorps et à la détection de ces anticorps. La large utilisation de cette technique est décrite à travers plusieurs exemples incluant la détection d’interactions protéine-protéine et l’identification de protéines individuelles à l’intérieur de complexes protéiques.