Noninvaziv M-mod ekokardiyografi ile Fare Kalp Puan utero Ölçümünde
Summary
Ultra yüksek frekans ultrason küçük hayvanlarda kalp anormallikleri incelemek için güçlü bir canlı görüntüleme aracıdır. Bu girişimsel embriyoların fizyolojik durumunu korumak sağlar. Burada, rahimde embriyo E18.5 kalp oranlarını ölçmek için M-modu ultrason kullanımını gösterir.
Abstract
Konjenital kalp hastalığı (KKH) doğumda ölüm en sık noninfeksiyöz nedenidir. KKH sıklığı 4 ila 50/1, 000 doğumda (Hastalık ve yaralanma bölgesel tahminler, Dünya Sağlık Örgütü, 2004) arasında değişmektedir. Genellikle yaşam kalitesini tehlikeye ameliyatları KKH nedenlerini bulma önemini bize hatırlatan, kalp kusurları düzeltmek için gereklidir. Mutant fare modelleri ve canlı görüntüleme teknolojisi bu hastalığın etyolojisi incelemek için gerekli araçları haline gelmiştir. Gelişmiş yöntemler embriyolar anormal kalplerin canlı görüntüleme izin rağmen, sonuncusunun fizyolojik ve hemodinamik durumları nedeniyle sık sık cerrahi ve / veya uzun prosedürler için tehlike vardır. Invaziv olmayan ultrason görüntüleme, ancak, cerrahi ve böylece bunların fizyolojisi muhafaza, embriyolar maruz kalmadan kullanılabilir. Bu yazıda, rahimde E18.5 embriyo kalp oranlarını değerlendirmek için basit M-mod ultrason kullanımı. Anormal kalp oranlarının tespiti gerçekten iyi bir göstergesi olduğunuBöylece kalbin disfonksiyon tor ve kalp yetmezliğine yol açabilir gelişimsel kusurları belirlenmesinde bir ilk adım teşkil etmektedir.
Introduction
CHD doğum 1 ölüm en yaygın bulaşıcı olmayan nedenidir. Birden ameliyatlar genellikle yaşam kalitesi 1 tehlikeye kalabilir konularda yapısal kusurları düzeltmek için gereklidir. KKH olan çocuklar sık sık gelişim 2,3 üzerinde utero sonuçlara önemli işaret, onlar ameliyat geçirmiş olsa bile nörolojik bozukluklar gelişir. Böyle hamilelik sırasında virüslere veya kimyasalların (alkol) maruz kalma, neden KKH olarak hem genetik hem de çevresel faktörler. Genetik katkıda incelenmesi erken aşamasında olduğu, ancak hızla büyüyen. Bu katkıda belirlemek ve bir basit ve güçlü bir araç ile mutant fareler fenotiplendirilmesi, kalp gelişimine rollerini anlamak için son derece yararlı olacaktır.
Fare gerçekten KKH incelemek için tercih edilen bir hayvan modeli ve insan vakalarının çoğunda farelerde 4,5 çoğaltılabilir. Sonuç olarak, fetal fare kalp fenotipleme inc haline gelmiştirreasingly önemli insan KKH etyolojisi araştırmak ve yeterli araçları gerektirir. Sabit örneklerde histolojik çalışmalar çok değerli olmasına rağmen, canlı hayvanların gerçek zamanlı görüntüleme kalbin fizyolojisini anlamak için çok önemlidir. Video mikroskopi canlı görüntüleme sunar. Ancak, böylece onların fizyolojik ve hemodinamik durumu ödün, embriyolar maruz laparotomi gerektirir. Son zamanlarda, ekokardiyografi klinikte yanı sıra farelerde kalp değerlendirmeler için standart görüntüleme tekniği haline gelmiştir.
Fare fetal ekokardiyografi standart klinik ultrason sistemlerinin yanı sıra ultra yüksek frekanslı ultrason sistemleri kullanılarak yapılır. İkincisi 30 MHz veya iki-boyutlu görüntüler oluşturmak ve erken embriyonik aşamalarında değerlendirilmesine izin yüksek frekans dönüştürücüler sağlamaktadır. Bu dönüştürücüler, ancak yeterli görüntüleme uçak elde edilir ve temel kalp pa belirlemek için yeterli olan bir nispeten zayıf bir penetrasyon derinliği (~ 13 mm) sahip, kalp hızı, diyastol ve sistol ve septum ve duvar kalınlığı, sol ve sağ ventrikül iç çapı, laparotomi yapmadan gibi parametlerini.
Bizim çalışmamızda, embriyonik gün E18.5 fare embriyoları kalp oranlarını değerlendirmek için ultra-yüksek frekanslı ultrason sistemi kullandık. Biz 12,7 mm odak uzaklığına sahip fetusların boyutu, verilen ideal 20 mm x 20 mm, bir alan görünümünü sağlayan bir 30 MHz transdüser seçti. Bununla birlikte, daha yüksek frekans dönüştürücü gelişim aşamaları daha önce analiz için seçilebilir. Seçilen M-mode 1,000 kare / sn yüksek temporal çözünürlük hareket sayesinde dokuların görselleştirme sağlar. Tam prosedürü basit ve fetusun fizyolojik ve hemodinamik devletlerin herhangi sarsımına önlemek için mümkün olduğunca çabuk yapılmalıdır. Yaklaşık 8 embriyo analizi, yaklaşık 1 saat gerektirir.
Protocol
Representative Results
Discussion
M-mod ekokardiyografi fare embriyoları utero kalp oranları ölçmek için etkili ve basit bir yöntemdir. Piyasada mevcut dönüştürücüler küçük atan kalpleri görselleştirmek için yeterli çözünürlüğü sağlar. Böylece, bu tür nabız ölçümü gibi diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında, son derece doğru bir kalp atış hızı ölçümü, izin ve yüksek çözünürlüklü video mikroskobu yerine kullanabilirsiniz. Ancak, mevcut araçları embriyoların her görselleştir…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Şekil 1 ve 2'de gösterilen fotoğraf çekmek için ekokardiyografi ve Ann Chamberland eğitimi için Manon Laprise teşekkür ederim. Bu çalışma Sağlık Araştırma hibe MOP 44363 Kanada Enstitüleri ve Kanada Başkanı 950-216684 tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Isoflurane | Pharmaceutical Partners of Canada Inc. | CP0406v2 | 1-chloro-2,2,2-trifluoroethyl difluoromethyl ether |
| Ultrasound gel | Parker Laboratories Inc. | Aquasonic Clear | |
| Electrode gel | Parker Laboratories Inc. | Spectra 360 | |
| Ophthalmic gel | Novartis | Tear-Gel | |
| Depilatory cream | Church & Dwight Co., Inc. | Nair | |
| Hair clipper | |||
| Gauze/cotton swap | Q-tips | ||
| Permanent marker | |||
| High-Resolution In vivo Ultrasound Imaging System | Visual Sonics | Vevo770 | |
| 30 MHz Transducer | Visual Sonics | RMV707B | |
| Imaging platform and physiology controller unit | Visual Sonics | ||
| Anesthetic System | Cyprane North America Inc. | 312462 | |
| Infrared heating lamp |
Riferimenti
- Hoffman, J. I., Kaplan, S. The incidence of congenital heart disease. J. Am. Coll. Cardiol. 39, 1890-1900 (2002).
- Miller, S. P., et al. Abnormal brain development in newborns with congenital heart disease. N. Engl. J. Med. 357, 1928-1938 (2007).
- Bruneau, B. G. The developmental genetics of congenital heart disease. Nature. 451, 943-948 (2008).
- Wessels, A., Sedmera, D. Developmental anatomy of the heart: a tale of mice and. 15, 165-176 (2003).
- Yu, Q., et al. ENU induced mutations causing congenital cardiovascular anomalies. Development. 131, 6211-6223 (2004).
- Seidah, N. G., Prat, A. The biology and therapeutic targeting of the proprotein convertases. Nat. Rev. Drug Discov. 11, 367-383 (2012).
- Roebroek, A. J., et al. Failure of ventral closure and axial rotation in embryos lacking the proprotein convertase Furin. Development. 125, 4863-4876 (1998).
- Roebroek, A. J., et al. Limited redundancy of the proprotein convertase furin in mouse liver. J. Biol. Chem. 279, 53442-53450 (2004).
- Kisanuki, Y. Y., et al. Tie2-Cre transgenic mice: a new model for endothelial cell-lineage analysis in vivo. Dev. Biol. 230, 230-242 (2001).
- Kim, W., et al. Loss of endothelial furin leads to cardiac malformation and early postnatal death. Mol. Cell Biol. 32, 3382-3391 (2012).
