Summary

宫内遥测来衡量鼠标收缩压力<em>在体内</em

Published: April 06, 2015
doi:

Summary

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

Abstract

分子和电信号的复杂的集成是需要变换静止子宫成收缩的器官在怀孕的末端。尽管子宫收缩的关键调节剂的发现,这个过程还没有完全理解。转基因小鼠提供在学习分娩的理想模型。以前,以研究子宫收缩在小鼠的唯一方法是离体等长张力的录音,这是不理想的有几个原因。子宫必须从它的生理环境被除去,调查在有限的时间当然是可能的,并且小鼠必须牺牲。辐射遥测的最新发展已经允许纵向,实时体内小鼠宫腔压力的测量。在这里,宫内遥测植入到分娩的描述来测量从妊娠中期的小鼠子宫压力变化。在记者的差异比较野生型和转基因小鼠之间URES,感兴趣的基因的生理影响可以阐明。该技术应加快用于妊娠期间治疗子宫肌层病症的治疗剂,包括早产的发展。

Introduction

早产是围产儿发病率和死亡率在发达国家的主要原因;它负责50%围产期发病率及围产儿死亡率1,2 75%。早产是多方面的,可能是特发性。虽然许多研究已经出现在分子和电通路将来自一个静止组织肌层成收缩1,早产的确切病理生理学仍然难以捉摸。内分泌,炎性和基因调控都被链接到早产3,4。然而,伦理问题限制于早产在人体中的机制进行研究的能力。

鉴于这些限制,许多研究人员已经转向小鼠作为模型系统来研究分娩的生理学。小鼠具有短怀孕持续约3个星期,并且可以很容易地遗传操作。此外,多个基因小鼠模型被开发,以确定信号通路,这对于劳动5是必不可少的。尽管小鼠和人类分娩之间的关键差异,小鼠和人类有许多是必不可少的劳动相同的机制,包括宫内炎症和感染6。因此,老鼠作为一个宝贵的工具用于检查子宫活动。迄今为止,金标准测定小鼠子宫收缩已经离体等长张力的录音;然而,这被限制在每个实验1妊娠时间点,并且需要切除子宫从它的生理环境。另一个重要因素是需要大量的对这些研究的动物。最后,这种方法不允许进行纵向研究审查引产和早产病理生理学。

在用于研究动脉压辐射遥测设备取得的最新进展在老鼠和INT改变7大鼠8 rauterine压力乞求问题相同的技术是否可以用于怀孕期间,研究改变小鼠子宫内的压力。最初的故障排除后,已成功开发出一种方法来衡量引产和进展的鼠标。这种体内方法可以测量从静态子宫指示有力宫缩的高压状态的低压力状态的过渡。这种方法也已经能够检测到与受损分娩和野生型小鼠的转基因小鼠之间显著压力差,表明基因表达的9的生理影响。这个协议提供了一个实时的, 在体内方法来研究怀孕期间小鼠子宫的压力。

Protocol

注:符合动物提出了美国国立卫生研究院的维护和使用指南所有动物的程序。所有协议批准了动物研究委员会在圣路易斯华盛顿大学。 注:特殊材料和设备来获得本协议所列材料和设备表。 雌性大鼠1.定时育种品种两岁六个月的成年女性与男性有2小时的时间窗口。特定育种小时是不需要的,只要它们保持在实验的全部相一致。 通过交配插头的存在证实怀?…

Representative Results

实时体内宫内压力可通过使用遥测采集系统进行记录。搭配鼠标同步录像压取样来捕捉每个小狗的传递的准确时间和相关交货时间,母亲的子宫内的压力。所有的数据点就可以在整个记录作图以产生压力-时间曲线图( 图1A)。在妊娠期间这个图显示的各点时,宫内压力变化以及暗光周期之间的压力差。此外,宫内压力的移动平均可以绘制( 图1B)。这(分娩过程?…

Discussion

子宫肌层收缩的研究一直依靠肌肉紧张体外测量。这种方法可用于新开发的子宫收缩药物不能被施用给活的动物的早期检测是有用的。然而, 在体内的方法是必要的,以纵向理解劳动的进 ​​展。 体内测量一举数得。首先,它们使过怀孕期间变化子宫收缩图案的完整画面的捕获。其次,他们消除体外录音要求子宫组织的偏压被垂直或水平地安装,限制了我们的子宫的?…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

This work was supported by funding from the March of Dimes FY12-133 (S.K.E.) and the National Institutes of Health R01HD037831 (S.K.E.). We would like to thank Dr. Deborah Frank for critical review of the manuscript.

Materials

Name of Material/ Equipment Company Catalog Number Comments/Description
Surgical Glue 3M Vetbond 1469SB Tissue Adhesive–stored in Drierite
Absorbable 6-0 Sutures Ethicon J212H Vicryl
Non-absorbable 6-0 Sutures Ethicon 8706H Prolene
Water Jacket Blanket + Heating Pad Gaymer T/Pump PN 11184-000 Blanket-66N111CC Specialized for rodents
Bead sterilizer Keller Z378577 Steri 250 Sterilizer
Disecting Microscope Nikon SMZ754 Fibre optic gooseneck external light source
Sterile Surgical Gloves–Latex  Cardinal Health Triflex 2D7253
PhysioTel PA-C10 Pressure Transmitter  Data Sciences International 270-0135-001 TA11PA-C10
Telemeter Reciever  Data Sciences International 272-6001-001 RPC-1
Dataquest ART 4.3.2 Analysis Platinum  Data Sciences International 271-0147-141 Analysis software
Diet Recovery Gel Clear H2O 72-01-5022 Purified Soft Diet for Rodents
Tergazyme Sigma-Aldrich Z273287 Enzyme detergent

Riferimenti

  1. Slattery, M. M., Morrison, J. J. Preterm delivery. Lancet. 360, 1489-1497 (2002).
  2. Goldenberg, R. L., Culhane, J. F., Iams, J. D., Romero, R. Epidemiology and causes of preterm birth. Lancet. 371, 75-84 (2008).
  3. Keelan, J. A. Pharmacological inhibition of inflammatory pathways for the prevention of preterm birth. Journal Of Reproductive Immunology. 88, 176-184 (2011).
  4. Voltolini, C., et al. Understanding spontaneous preterm birth: from underlying mechanisms to predictive and preventive interventions. Reproductive Sciences. 20, 1274-1292 (2013).
  5. Ratajczak, C. K., Muglia, L. J. Insights into parturition biology from genetically altered mice. Pediatric research. 64, 581-589 (2008).
  6. Rajakumar, A., et al. Placental HIF-1 alpha, HIF-2 alpha, membrane and soluble VEGF receptor-1 proteins are not increased in normotensive pregnancies complicated by late-onset intrauterine growth restriction. American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 293, (2007).
  7. Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D’Alecy, L. G. Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods. American journal of physiology. Heart And Circulatory Physiology. 286, H2408-H2415 (2004).
  8. Mackay, L. B., Shi, L. B., Maul, H. .., Maner, W. L., Garfield, R. E. The effect of bilateral pelvic neurectomy on cervical ripening in pregnant rats. Journal Of Perinatal Medicine. 37, 263-269 (2009).
  9. Pierce, S. L., Kutschke, W., Cabeza, R., England, S. K. In vivo measurement of intrauterine pressure by telemetry: a new approach for studying parturition in mouse models. Physiol Genomics. 42, 310-316 (2010).
  10. Imamura, T., Luedke, C. E., Vogt, S. K., Muglia, L. J. Oxytocin modulates the onset of murine parturition by competing ovarian and uterine effects. American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 279, R1061-R1067 (2000).
  11. McCloskey, C., et al. The inwardly rectifying K+ channel KIR7.1 controls uterine excitability throughout pregnancy. EMBO Mol Med. 6 (9), 1161-1174 (2014).
check_url/it/52541?article_type=t

Play Video

Citazione di questo articolo
Rada, C. C., Pierce, S. L., Grotegut, C. A., England, S. K. Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo. J. Vis. Exp. (98), e52541, doi:10.3791/52541 (2015).

View Video