Demonstração da Wound modelo de pele de rato Isquêmico
Summary
O rato, devido ao seu tamanho, disponibilidade e de comportamento e dócil, tem sido utilizada como um modelo de pesquisa durante muitos anos. O objetivo deste protocolo é para utilizar o rato como modelo isquêmico cura de feridas cutâneas de fornecer informações valiosas sobre a fisiopatologia das feridas crônicas.
Abstract
A propensão para feridas crônicas em humanos aumenta com a idade, condições de doenças como diabetes e função cardiovascular prejudicada e pressão unrelieved devido à imobilidade. Os modelos animais têm sido desenvolvidos que a tentativa para imitar estas condições para o propósito de promover a compreensão da complexidade de feridas crónicas. O modelo aqui descrito é um modelo de rato de isquemia aba de pele que permite uma redução prolongada do fluxo sanguíneo resultando em feridas que se tornam isquémica e se assemelham a um fenótipo ferida crónica (vascularização reduzida, aumento de inflamação e de encerramento de feridas retardada). Ele consiste de um retalho dorsal bipediculado com 2 feridas isquêmicas colocados centralmente e 2 feridas não-isquêmicas lateral à aba como controles. Uma nova adição a este modelo isquémico aba de pele é a colocação de uma folha de silicone sob a aba que funciona como uma barreira e uma tala para prevenir e reduzir a contração revascularização como as feridas cicatrizam. Apesar dodebate de usar ratos para estudos de cicatrização de feridas devido a suas diferenças anatômicas e fisiológicas bastante distintas em comparação com os seres humanos (ou seja, a presença de um músculo panniculus carnosus, curto tempo de vida, aumento do número de folículos pilosos, e sua capacidade de curar as feridas infectadas) as modificações empregadas neste modelo o tornam uma alternativa valiosa para modelos retalhos cutâneos isquêmicos anteriormente desenvolvidos.
Introduction
Desenvolvimento de medicamentos eficazes e outras terapêuticas de cura de feridas requerem adequada em modelos in vivo, apesar dos problemas conhecidos em traduzir achados em modelos animais para terapias humanas 1. O que se segue é uma descrição de um protocolo detalhado para a utilização de um modelo de rato da cicatrização de feridas isquémico para investigar os mecanismos que ainda mais a compreensão da cicatrização de feridas patológico. As espécies de rato, muitas vezes empregadas devido à sua ampla disponibilidade, tamanho e natureza dócil é usado para estudos de cicatrização de feridas, pois é grande o suficiente para fornecer uma área de pele adequada para ferir incisional e excisional, imagem e coleta de tecido 2. No entanto, deve ser tido em consideração que o cuidado da pele de um rato e um ser humano são anatomicamente diferente, com ratos a ser referido como animais de pele soltas. Esta característica distinta permite a contração da ferida, ao invés de epithelialization de contribuir significativamente para o encerramento da pele do rato wounds 2. Além disso, a presença de um músculo panículo carnoso subcutânea em ratos, contribui para a cura por ambos contracção e formação de colagénio 3,4. Estas distinções anatómicas muito importantes que foram considerados no desenvolvimento do modelo de ferida cutânea do rato isquémica e modificações específicas foram implementadas para diminuir contracção da ferida e reduzir a influência do panículo carnoso muscular 5.
Em úlceras de pé diabético, úlceras venosas e úlceras de pressão, a cura é atrasada e essas feridas são consideradas crônicas. As feridas são caracterizadas pela inflamação excessiva, o que impede a ferida de progredir para as próximas fases do reparo de feridas 6. Um dos principais factores no desenvolvimento de uma ferida crónica é localizada isquemia tecidual (fluxo sanguíneo reduzido) 5 contribui para a incapacidade para limpar a inflamação. No momento em que este modelo foi sendo desenvolvida e validada (em 2003-4), Não havia modelos animais padronizados que poderiam fornecer tecido suficiente para testar a indução de angiogênese no leito da ferida, um processo importante durante a cicatrização normal e a motivação para o desenvolvimento deste modelo 5. Dito isto, o modelo aqui apresentado é uma modificação do modelo de ferimento isquémico originalmente descrito por Schwartz et ai. 7 e posteriormente utilizado na forma modificada por Chen et al. 8
No modelo de ferida isquêmica modificado, as alterações foram feitas para contornar as características anatômicas mencionadas acima do rato que levam à cura pela contração ao invés de epithelialization: (1) duas feridas por excisão de espessura total são criadas dentro de uma aba e da pele dorsal bipediculado músculo panículo carnoso é removido do leito da ferida por meio de dissecção logo acima da fáscia muscular. (2) A aba em si tem dimensões mais estreitas, garantindo que o fornecimento de sangue é aleatório e as feridas localizadas no ponto central de tele aba são isquêmicos. (3) A folha de silicone é inserida abaixo da aba, impedindo readherence e reperfusão do retalho de tecido subjacente. Contração da ferida é limitada (não eliminados), ancorando ou suturar o retalho para a folha de silicone 5.
O modelo foi recentemente utilizada em estudos que vão desde efeitos oxigênio hiperbárico sobre ferida isquêmica cura 9,10 para a cicatrização de feridas isquêmica em jovem contra ratos com idade entre 11 e provou ser um modelo confiável de isquemia tecidual prolongada. As dimensões da aba bipediculado também foram adaptados para diferentes estirpes de ratos, incluindo Sprague Dawley (11 cm de comprimento por 2 cm de largura) e ratos F344 (10.5 cm por 3,0-3,5 cm de largura) e outras espécies, incluindo ratos e porcos 12 13,14. Este vídeo utiliza o F344 estirpe, ratos na manifestação do modelo de pele ferida isquêmica.
Aprovação para todos os procedimentos com animais apresentados a seguir foi obtered da Universidade do Comitê Animal Care do sul da Flórida (IACUC) e cumprir todas as exigências da Lei do Bem-Estar Animal e do Guia para Cuidados e Uso de Animais de Laboratório.
Protocol
Representative Results
Discussion
A cicatrização de feridas em ratos tem sido muitas vezes objecto de debate, devido à sua capacidade de curar feridas infectadas e alta taxa de variabilidade interanimal 5. Um dos objetivos originais do modelo durante o seu desenvolvimento foi para diminuir essa variação. Modificações na largura do retalho, reduzindo o número de feridas com posicionamento específico (centrada na aba com localização crânio-caudal consistente) e introdução de uma folha de silicone tem conseguido esse objetivo…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors would like to acknowledge funding support from the University of South Florida, Department of Surgery (Mack Wu, MD, PhD).
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Sil-Tec medical grade sheeting | Technical Products Inc. | 500-3 | nonreinforced, 0.01 inches in thickness |
| Mini Iris scissors, 8cm, curved, SS | World Precision Instruments | #503671 | |
| Ethilon Nylon Sutures | Ethicon | 1964G | black, size 4.0, PC-3 16mm needles (3/8 circle) |
| Laser Doppler Imager | Moor Instruments | moorLDI2-IR | Standard blood flow imager: http://us.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8 |
| ImageJ | NIH | free download | http://rsb.info.nih.gov/ij/ |
| Mastisol | Henry Schein | Cat # 7289210 | Fisher Scientific NC9774929 |
| Tegaderm | Medical Specialties | 3M1624W | Fisher Scientific NC9922128 |
Riferimenti
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