En vivo y ex vivo para estudiar Cáncer de ovario metastásico colonización de Estructuras Vía lugar en Peritoneal adiposo
Summary
We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.
Abstract
Alto grado de cáncer de ovario seroso (HGSC), la causa de metástasis peritoneales generalizadas, sigue teniendo un muy mal pronóstico; menos del 30% de las mujeres están vivos 5 años después del diagnóstico. El epiplón es un sitio preferido de la formación de metástasis HGSC. A pesar de la importancia clínica de este microambiente, la contribución del tejido adiposo omental a la progresión del cáncer de ovario sigue siendo poco estudiada. Adiposo omental es inusual, ya que contiene estructuras conocidas como manchas lechosas, que se componen de B, T, y células NK, macrófagos, y células progenitoras que rodean nidos densos de vasculatura. Lechosas manchas juegan un papel clave en las funciones fisiológicas del epiplón, que son necesarios para la homeostasis peritoneal. Hemos demostrado que manchas lechosas también promueven el cáncer metastásico de ovario de la colonización adiposo peritoneal, un paso clave en el desarrollo de metástasis peritoneales. Aquí se describen los métodos que desarrollaron para evaluar y cuantificar manchas lechosas en poritoneal adiposo y estudiar su contribución funcional a célula de cáncer de ovario metastásico la colonización de los tejidos omental tanto in vivo como ex vivo. Estos enfoques son generalizables a modelos de ratón y líneas celulares adicional, permitiendo así que el estudio de la formación de metástasis de cáncer de ovario de localización inicial de las células a las estructuras mancha lechosa para el desarrollo de metástasis peritoneales generalizadas.
Introduction
A diferencia de la mayoría de los tumores sólidos, metástasis de cáncer de ovario seroso de alto grado (HGSC) se limitan a la cavidad peritoneal 1. Por lo tanto, las terapias peritoneales eficaces potencialmente podrían controlar o erradicar HGSC. Actualmente, una aproximación terapéutica estándar es de citorreducción quirúrgica combinada con quimioterapia 1.3. Desafortunadamente, la gran mayoría de los pacientes experimentan y sucumben a las complicaciones de la recurrencia de la enfermedad. Estas estadísticas deprimentes muestran la necesidad de mejorar la comprensión de la colonización metastásica, el proceso por el cual las células cancerosas para localizar, utilizar y proliferar dentro de los tejidos del huésped para formar metástasis 2.
El epiplón es un sitio preferido de principios HGSC metástasis 4-7. A diferencia de otros peritoneal adiposo, el tejido adiposo omental contiene estructuras inmunes inusuales conocidas como manchas lechosas, que contienen B, T y células NK y macrófagos, que desempeñan papeles clave en HomeOS peritonealesTasis 8,9. Además de sus funciones fisiológicas, encontramos que manchas lechosas desempeñan un papel activo en el cáncer de ovario colonización metastásica 4. En los ensayos de metástasis experimentales, SKOV3ip.1, CaOV3 y HeyA8 (humano) y ID8 (murino; C57BL / 6) células ováricas cancerosas rápidamente caseros para manchas lechosas, lo que sugiere que las células se están moviendo hacia un factor quimiotáctico secretada. Curiosamente, las células cancerosas no colonizan adiposo peritoneal que carecen de manchas lechosas (es decir, gonadales y grasa uterina) 4.
Con el fin de identificar los mecanismos que regulan la colonización mancha lechosa, hemos optimizado modelos de xenoinjerto que permiten la interrogación de eventos celulares y moleculares en el transcurso de tiempo de la colonización metastásica 4. Una ventaja específica de los métodos descritos en este documento es su énfasis en la arquitectura y la función del tejido, lo que permite a los usuarios probar hipótesis en integrarse plenamente en vivo y modelos ex vivo de m4,10 colonización etastatic. Al comparar la localización de células cancerosas y el crecimiento de los depósitos de grasa peritoneal que, o bien contienen o carecen de manchas lechosas, los investigadores pueden probar la contribución (s) relativa de los adipocitos y células dentro manchas lechosas a la presentación y el crecimiento progresivo de las células de cáncer de ovario en los tejidos fisiológicamente relevantes.
Protocol
Representative Results
Discussion
El desarrollo de terapias para dirigirse a las células diseminadas requiere una comprensión mecanicista de la colonización metastásica, el primer paso crítico en el desarrollo de la enfermedad peritoneal. Para abordar estas cuestiones que reportamos enfoques que se pueden utilizar para discernir cómo la composición del tejido único del epiplón y la arquitectura promueven la colonización metastásica del cáncer de ovario. Las características distintivas de nuestro enfoque son: 1) el enfoque …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Supported by grants from the Department of Defense (W81XWH-09-1-0127), the NIH (2-R01-CA089569), the Elsa U. Pardee Foundation, a Marsha Rivkin Center for Ovarian Cancer Research Pilot Study Award, and generous philanthropic support from Section of Urology and Section of Research in the Department of Surgery, University of Chicago.
Materials
| Dissection Tools | Fine Science Tools | NA | |
| Geimsa | Fluka/Sigma Aldrich | 48900 | |
| 5% Formalin | Sigma | HT501320 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CV | |
| Trypsin | Gibco | 25200-056 | |
| PBS | Corning | 21-040-CV | Without calcium and Magnesium |
| 26 gauge needle | BD | 329652 | |
| BSA | Sigma | A7906 | |
| Collagenase | Worthington | LS004196 | |
| Stomacher | Seward Labsystems | Stomacher 80 Biomaster | |
| Microstomacher bag | Stomacher Lab Systems | BA6040/Micro | |
| ACK Lysis Buffer | Gibco | A10492-01 | |
| Millicell culture plate insert | Millipore | PICM01250 | |
| Cell-Tak | BD | 354240 |
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