정맥 당부 하 검사와 비인간 영장류의 대사 상태의 특성
Summary
이 프로토콜의 목적은 인간이 아닌 영장류에서의 혈당 조절을 평가하고 dysmetabolic 건강한에서 대사 상태를 평가하기 위해 정맥 내 글루코스 내성 시험 (IVGTTs)를 수행하기위한 표준 방법을 제공하는 것이다.
Abstract
정맥 내 글루코스 내성 시험 (IVGTT)은 글루코스 항상성의 특성에 중요한 역할을한다. 혈청 생화학 프로파일 모두 공급의 혈당치를 포함한 금식 상태, 혈색소, 인슐린 수치, 다이어트의 병력, 신체 조성 및 체중 상태, 정상 및 비정상 혈당 조절에 대한 평가와 함께 할 때 만들어 질 수있다 . IVGTT의 해석은 덱 스트로스 도전과 관련하여 시간이 지남에 포도당과 인슐린 수치의 변화 측정을 통해 이루어집니다. 고려해야 할 중요한 요소는 다음과 같습니다 T0 (포도당 주입의 끝), 처음 20 분에 빠른 포도당 통관의 기울기에서 파생 된 포도당 통관 율 K (T20에 T1), 시간과 관련하여 도달 피크 포도당과 인슐린 수준 포도당 기본으로 돌아가려면, 곡선 (AUC) 아래의 면적은.이 IVGTT 대책은 건강한 t에서 포도당 항상성 이동 등의 특성 변화를 보여줍니다OA 병에 걸린 대사 상태 5. 여기에서 우리는에서 인간 형 당뇨병 (T2D)의 가장 적절한 동물 모델과 IVGTT 이러한 동물의 임상 적 프로파일은 인간이 아닌 영장류 (히말라야와 시노 몰 거스 원숭이)의 특성을 설명하는 비만 dysmetabolic에 건강한 린, T2D와 상태 8, 10, 11.
Introduction
IVGTT 일상적 다른 대사 상태 5에서 7 인간의 β 세포 기능을 결정하기 위해 사용되는 편리한 기능적 분석이다. T2D 동물 모델에서, 잘에서 대사 질환 진행을 보여 동물을 특성화하기위한 도구로서 인식되고 dysmetabolic 고혈당 상태 8, 9 건강한. T2D의 가장 가까운 동물 모델은 붉은 털과 노몰 거스 원숭이가 주목할만한 예입니다있는 인간이 아닌 영장류 (NHPs)에서 증명된다. 이러한 동물은 자연스럽게 인간 10과 나이 및 빈도에 기여 비만과 같은 위험 인자 T2D을 개발한다. 또한,이 유사한 질병의 진행은하고 dysmetabolic 질환 11 진행됨에 따라 췌장 병리은 아밀로이드 침착을 표시합니다.
여기에서 우리는이 동물의 대사 상태의 우리의 식민지 특성화의 일환으로 NHPs에 IVGTT을 수행하는 우리의 표준 방법에보고한다. 이 방법은소비 다른, 더 많은 시간과 비용이 많이 드는 기술 2를 기준으로 수행하기 쉬운. IVGTT 신속하고 자주 동물의 많은 식민지를 특성화하는 데 유용합니다. 당화 혈색소 (당화 혈색소)의 수준을 고려하면, 동물의 다이어트 및 음식 섭취 이력뿐만 아니라 %의 근육량과 체지방은 IVGTT 일반적 현성 당뇨병 6 향해 동물의 대사 상태와 진행 특성화 충분 8.
당화 혈색소는 3 개월 이전 6 주 동안 혈당 측정의 신뢰성을 제공하는 적혈구의 수명 동안의 평균 혈당 수준을 나타낸다. IVGTT의 금식 기준선 혈액 샘플에서 측정했을 때,이 값은 절차 사이의 개월 동안의 혈당 조절에 창을 제공합니다. 동물이 그들의 마지막 IVGTT 때문에 당뇨병에 dysmetabolic에서 전환 한 경우, 이전 값보다 훨씬 더 높은 혈색소 값을 나타냅니다전환이 빨리 시작하는 것이 그들의 마지막 IVGTT 후, 반면, 가까운 이전 값으로 당화 혈색소 값은 최근 전환 된 것을 나타냅니다. 일반적으로, 붉은 털 원숭이에, 당화 혈색소가 6 %가 가난한 혈당 조절 10, 23 비정상으로 간주하고, 표시되어 더 이상 값.
혈당 수준은 전체 동물의 행동 및 일반적인 건강의 컨텍스트 내에서 해석되어야한다. 당뇨병 원숭이 – 전시 과식증, 갈증과 다뇨증 – 인간 등을들 수있다. 동물의 그룹 하우징은 dysmetabolic 당뇨병 원숭이에 필요한 이러한 지표와 개별 치료의 측정에 상당한 도전을 제공합니다. 우리는 단독 치료보다 개인화를 제공 할 수 있도록하기 위하여 동물을 선택할 것을 권장하고 쉽게 원숭이의 상태의 마커 행동 8 모니터링 될 수있다. 또한, 당뇨병 원숭이 체중 감소뿐만 아니라 증가 된 상승 된 지질 프로파일 (나타낼 것이다콜레스테롤, 중성 지방 혈증) 및 혈청 화학 방해 미네랄 대사. 이러한 장기에 손상이 대사 장애 / 당뇨병 발전의 합병증은 종종 있으며, 혈당, 지질, 미네랄 불균형 9, 11, 18의 공동 결정 할 수있다, 24로는, 간, 혈청 화학 신장 기능의 지표를 측정하는 것이 중요하다 .
이 방법을 사용하면 원숭이의 수명이 특정 가치가 위에, 역사적인 값은 여러 자주 특성화에서 생성 된. 이러한 글루코스 클램프 또는 등급 글루코스 주입 (GGI)와 같은 또 다른 과정은 완전 동물의 상태를 평가하는 데 필요한 경우 역사를 사용할 때, 초기 특성에 일반적이다. 3 개월마다의 주파수의 기준이 설정되고 나면 그러나, 반복 IVGTTs는 동물의 진행 상황을 추적하기 위해 일반적으로 충분하다. 동물이 전반에 걸쳐 여러 연구에 등록되어있는 경우에 특히 중요하다연도는 신진 대사 상태에 따라. 건강 한번에 동안 비교적 안정적으로 유지 될 수있는 반면, 동물의 대사 상태가 악화되면, 인슐린 내성 및 글루코스 불내성의 극적인 증가는 매우 급속하게 일어날 수있다. 혈색소 값 석 달 간격 예정된 절차와 동물의 건강 상태의 감소 또는 개선의 일부 보간 허용한다. 이러한 이유로,이 방법은 자연 수명에 걸쳐 여러 종의 연구에 사용되는 동물의 특성에 적합하다.
Protocol
Representative Results
Discussion
IVGTT은 상기 분석에서 공복 혈당 및 인슐린 수준이 달성된다. 체중 5, 12, 13에 기초하여 단일 덱 스트로스 주입 글루코스 자극 인슐린 분비의 능력을 평가하고, 그 동물의 능력을 평가하는 허용 인슐린을 해제하고베이스 라인쪽으로 높은 혈당 수준을 반환합니다. 이는 정상적인 글루코스와 인슐린 수준, 건강 관리, 정상 혈당와 dysmetabolic 혈증 동물 또는 고혈당, 인슐린 저항성 당뇨병 동물?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 DHMRI CLAS 동물 관리 직원의 강력한 지원을 인정하고 싶습니다, 시설 관리자 씨 다니엘 페랄타와 참석 수의사, 박사 Glicerio 이그나시오, DVM MRCVS.
Materials
| Allegra X-15R Centrifuge | plasma: 4C @3000 rpm for 10 min | ||
| Sorvall ST16R Centrifuge | serum: 22C @3000 rpm for 10 min | ||
| Thermo Scientific -86C Freezer, Forma 88000 Series | Model: 88500A | ||
| Dextrose 50% (D50) | Webster | 07-8008986 | I.V. glucose infusate |
| 3mL Luer Lock Syringe | Midwest Veterinary Suppy | serial blood draws | |
| 5ml Luer Lock Syringe | Midwest Veterinary Suppy | heparinized saline flush | |
| 10mL Luer Lock Syringe | Midwest Veterinary Suppy | delivery of I.V. D50 | |
| Gauze sponges 2×2 | Midwest Veterinary Suppy | 366.23000.4 | Used Dry, w/ %70 Alcohol, and 2% Chlorohex Solution |
| 4 ml serum separator tubes | Midwest Veterinary Supply | 366.45000.4 | blood collection tube for superchem panel |
| K2EDTA, 2mL | VWR | 95057-239 | blood collection tubes |
| Aprotinin, 100mg | Sigma | A1153-100MG | blood collection tube protease additive |
| 22g x 1" Catheters | Midwest Veterinary Suppy | 193.75250.2 | I.V. catheter |
| Injection Plug W/ Cap | Midwest Veterinary Suppy | 001.11500.2 | %50 dextrose infusion port |
| Porus Tape, 1/2" x 10yd | Midwest Veterinary Suppy | 001.85000.2 | maintain adherance of catheters and hep. Locks |
| Chlorhexidine Solution 2% | Midwest Veterinary Suppy | 193.08855.3 | prep catheter site |
| 70% Ethanol | VWR | 71001-654 | prep catheter site |
| tourniquet | Webster | 07-8003432 | |
| 3 way stopcock | Midwest Veterinary Supply | 366.28510.4 | hep. lock |
| 37" extension set | Webster | 07-8454200 | hep. lock |
| Exel 50-60cc LL Syringes | Midwest Veterinary Suppy | 001.12250.2 | Heparinized saline flush |
| 250 ml bag 0.9% saline | Webster | 07-8365593 | flush |
| 1,000 U Heparin, 10 ml | Webster | 07-883-4916 | |
| Ketamine, (Ketaset) 100mg/mL | Fort Dodge | (AV ordered) | |
| Precision Xtra glucose test strips 50/bx | Abbott (American Diabetes Wholesale) | 9381599728K7 | test baseline/ T3 blood glucose levels |
| Masimo Rad 57 | DRE | 6052057V | pulse-oximeter |
| Pavia rectal thermometer | Patterson | 07-8391335 | |
| Precision Xtra Glucometer | Abbott | 9381599728K7 | Handheld glucometer |
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