Kontraktilität Messungen auf isolierte Papillarmuskeln für die Untersuchung von Herz Inotropie bei Mäusen
Summary
Murine linksventrikulären Papillarmuskeln können verwendet werden, um Herzkontraktilität in vitro untersucht werden. Dieser Artikel beschreibt im Detail die Isolierung und experimentelle Protokolle, um die Herzkontraktionseigenschaften zu studieren.
Abstract
Papillarmuskel aus adulten Mäuseherzen isoliert verwendet werden, um Herzkontraktilität während verschiedene physiologische / pathologische Zustände zu untersuchen. Die kontraktilen Eigenschaften unabhängig von äußeren Einflüssen wie Gefäßtonus oder neurohumoral Status ausgewertet. Es zeigt einen wissenschaftlichen Ansatz zwischen Einzelzellmessungen mit isolierten Herzmuskelzellen und in vivo Studien wie Echokardiographie. So Papillarmuskel Präparate dienen als ein hervorragendes Modell, um Herzphysiologie / Pathophysiologie zu studieren und kann für Untersuchungen wie die Modulation durch pharmakologische Mittel oder die Erforschung der transgene Tiermodelle verwendet werden. Hier beschreiben wir ein Verfahren zur Isolierung des murinen linken vorderen Papillarmuskel zu Herzkontraktilität in einem Organbad Setup zu untersuchen. Im Gegensatz zu einer Muskelstreifen Zubereitung aus der Herzkammerwand getrennt, kann der Papillarmuskel in toto, ohne die Muskel tissu vorbereitet werdenE streng. Das Organbad Setup besteht aus mehreren temperaturgesteuerten, vergast und Elektroden ausgestattete Organbad Kammern. Isoliertes Papillarmuskel wird im Organbad Kammer befestigt und elektrisch stimuliert. Die hervorgerufene Zuckungskraftmessungen wird mit einem Druckaufnehmer und Parameter wie Zuckungskraftmessungen Amplitude und twitch Kinetik analysiert werden aufgezeichnet. Verschiedenen Versuchsprotokollen durchgeführt werden kann, um die Calcium- und frequenzabhängige Kontraktions sowie Dosis-Wirkungskurven von kontraktilen Mittel wie Katecholaminen oder anderen Arzneimitteln zu untersuchen. Zusätzlich können pathologische Zustände wie akute Ischämie simuliert werden.
Introduction
Die Untersuchung von Proteinen, wie Ionenkanäle beziehen ihre Rolle für die Kontraktilität des Herzens ist wichtig, verschiedene Pathomechanismen zu entdecken und neue therapeutische Strategien für Herzerkrankungen wie Ischämie und Herzversagen etablieren.
Kontraktile Funktion Säugerkardiomyocyten ist bekannt, durch verschiedene Ionenkanäle, Transporter und andere Proteine moduliert werden. Aktionspotential ausgelöst Aktivierung der spannungsabhängige sarkolemmalen L-Typ-Ca 2+ Kanälen führt zu Ca 2+ Einstrom von extrazellulären Raum und anschließend an Ca 2+ -induzierte Ca 2+ Freisetzung (CICR) 1, die zelluläre Kontraktions 2 auslöst. Ca 2+ -signaling eine zentrale Rolle bei der kardialen Kontraktilität und Anpassung an physiologische oder pathologische Stress spielt. Katecholamine aktivieren kardialen β-adrenergen Rezeptoren, so anregend Adenylylcyclase (AC), die cAMP synthetisiert. Aktiviert, protein Kinase A (PKA) phosphoryliert verschiedene intrazelluläre und membranassoziierten Proteinen, wie L-Typ-Ca 2+ -Kanälen, Phospholamban und Ryanodinrezeptoren was Modifikation Ca 2+ Transienten und Herzkontraktilität 1,3,4. cAMP wird von Phosphodiesterase (PDE) abgebaut wird. Aktivierung anderer als β-Adrenozeptoren Gs-gekoppelter Rezeptoren führt auch zu einer Akkumulation von cAMP.
Die Technik der Kontraktilität Messungen in isolierten ventrikulären Muskel-Streifen ist gut für größere Säugetierarten 5-8 etabliert. Bezogen auf die Möglichkeit, das Gen-Targeting in Mäusen ist es wichtig, Methoden zu ermitteln und murine Herzphysiologie analysieren. Unterscheiden sich jedoch vorhandenen Daten über die physiologischen Eigenschaften isolierter Muskelpräparate Mäuse auf experimentellen Bedingungen 9-12 variiert.
Das beschriebene Verfahren wird verwendet, um die Herzkontraktionsfähigkeit des linken Ventrikels Papillarmuskel pre analysierenPräparate in vitro. Untersuchung der Herzkontraktilität in Abwesenheit von Einflüssen Modifizieren Herzkontraktilität in vivo, wie Blutdruck, neurohumoral Stimulation und physikalischen oder metabolischen Stress durchgeführt. Die Schlagfrequenz des öffentlichen Muskel-Präparat kann streng definiert und beliebig verändert werden. Zuckungskraftmessungen kann im Kontext von spezifischen Stimuli wie Calciumkonzentration, Schlagfrequenz oder Temperatur analysiert werden. Darüber hinaus kann dieses Verfahren verwendet, um verschiedene Signalweg Komponenten zu untersuchen und die Herzleistung von genetisch veränderten Mausmodellen durch Steuern oben erwähnten Versuchsbedingungen zu vergleichen.
Protocol
Representative Results
Discussion
In diesem Manuskript beschreiben wir ein Verfahren, um die Kontraktilität von murinen Papillarmuskel in vitro, die verwendet werden können, um mehrere wissenschaftliche Fragen zu Herz Physiologie und Pathologie in Mäusen zu beantworten und um die Analyse der transgenen Linien und die Entdeckung von neuen pharmazeutischen Ansätze unterstützen untersuchen Herzfunktionsstörungen zu behandeln. Wir veranschaulichen die Anwendung dieser Methode auf physiologische, pathologischen und pharmakologischen Eigenschaf…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde von der Deutschen Forschungsgemeinschaft (KFO 196 "Signaltransduktion bei adaptativen und maladaptiven kardialen Remodelling-Prozessen", FR 1638 / 1-2) und vom DZHK (Deutsches Zentrum für Kreislaufforschung, einem Teil der German Centres of Health Research , die eine BMBF (Bundesministerium für Bildung und Forschung) Initiative) ist.
Materials
| Sodium chloride | Sigma-Aldrich | S7653 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| Potassium chloride | Sigma-Aldrich | P9333 | |
| Glucose | Sigma-Aldrich | D9434 | |
| Sodium pyruvate | Sigma-Aldrich | P5280 | |
| Calcium chloride dihydrate | Sigma-Aldrich | 223506 | |
| Magnesium sulfate heptahydrate | Sigma-Aldrich | 230391 | |
| Potassium phosphate monobasic | Sigma-Aldrich | P 5655 | |
| 2,3-Butanedione monoxime | Sigma-Aldrich | B0753 | |
| Forskolin | Sigma-Aldrich | F3917 | Hazard statement H312, solve in DMSO |
| 3-?Isobutyl-?1-?methylxanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | Hazard statement H 302, solve in DMSO |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| Isoprenaline hydrochloride | Sigma-Aldrich | I5627 | Hazard statement H 315-H319-H335 |
| Sodium Heparine 250.000 IE/10ml | ratiopharm | PZN 3874685 | |
| Histamine dihydrochloride | Sigma-Aldrich | H7250 | Hazard statement H 315-H 317-H319- H334-H335 |
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