Создание спаек в брюшной полости у мышей
Summary
Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.
Abstract
Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.
Introduction
Спаек в брюшной полости являются формой рубцовой ткани, которые образуют в брюшной полости в ответ на воспаление, как правило, после операции или внутрибрюшного инфекции. Спайки являются основной причиной хронической боли в области живота и бесплодия, и являются наиболее частой причиной непроходимости тонкой кишки 1. Присутствие спаек делает выполнение второй полостной операции более трудным и увеличивает вероятность осложнений 2.
Несмотря на многолетние исследования, механизмы, лежащие образование спаек остаются плохо понятыми. Известно , что первоначальное повреждение поверхности брюшины вызывает экссудацией фибрина обогащенной жидкостью, которая затем образует сгусток , который связывает поверхности кишечника и брюшной стенки вместе 3. Позже, фибробласты и другие клетки мигрируют в адгезивный пространство и секретируют соединительной ткани 4. В течение месяцев до нескольких лет адгезия созревает путем развития кровеносных сосудов и нервов <suр> 5.
Несколько коммерческих продуктов существуют , которые предназначены для уменьшения образования спаек после операции на брюшной полости (например, Seprafilm). Все эти продукты действуют как механические барьеры и остановить образование спаек путем предотвращения физического контакта между петлями кишечника и брюшной стенки 6,7. Несмотря на доказательства из контролируемого исследования , что хирургическая адгезией барьер уменьшает образование спаек 8, многие хирурги Занимательно были разочарованы эффективностью механических барьерных продуктов.
В настоящее время нет никаких лекарств на основе анти-адгезионные терапии, которая отражает тот факт, что точные процессы, участвующие в формировании адгезии плохо изучены. Разработка терапии, которая конкретно направлена на клеточных или молекулярных агентов, участвующих в образовании спаек потребует более четкого понимания событий, которые участвуют в формировании адгезии. Несколько группаs выявили молекулярные пути , которые могут быть важны для образования спаек 9-11. Животные модели обеспечивают превосходную среду для изучения образования спаек. Многие исследования были опубликованы , описывающее хирургическое создание адгезии в нескольких животных особое крысы и мыши 6,12-14. Учитывая наш опыт с изучением фиброзом у мышей и широкой доступности трансгенных мышей и мышей на основе антител, мы выбрали мышь в качестве нашей модели для изучения спаек. Здесь мы сообщаем о технике, которую мы разработали, чтобы воспроизводимо и надежно создавать спаек в брюшной полости у мышей.
Protocol
Representative Results
Discussion
Критические шаги в этой процедуре являются: тщательно абразивной слепой кишки, не вызывая перфорацию, размещение швов в брюшной боковой стенки, и применяя нужное количество крахмала. применять наждачную бумагу только в слепую кишку, или в небольшой определенной части кишечника. Широк?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
МЧР был поддержан Американской коллегии хирургов (ACS) Resident Research Scholarship. MSH была поддержана Калифорнийского института регенеративной медицины (CIRM) подготовка гранта Клинический сотрудник TG2-01159. MSH, HPL, и MTL были поддержаны Американским обществом челюстно-лицевых хирургов (ASMS) / Фонд челюстно-лицевых хирургов (MSF) Research Award Грант. HPL была поддержана грантом NIH R01 GM087609 и подарок от Ingrid Лай и Билл Шу в честь Энтони Шу. HPL и MTL были поддержаны лабораторией Hagey для детской регенеративной медицины и The Oak Foundation. MTL была поддержана Ганна / Оливье фонда.
Materials
| Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24" | Fisher Scientific | 14-206-62 | |
| Polylined Sterile Field, 18" x 24" | Busse Hospital Disposables | 696 | Cut a rectangular hole of the appropriate size |
| Isothesia isoflurane | Henry Schein | 050033 | |
| Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4" | Fisher Scientific | 22-415-469 | |
| Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Nair depilatory cream | Church & Dwight Co. | 22339-05 | |
| Buprenex buprenorphine 0.3 mg/mL | Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc. | NDC 12496-0757-5 | |
| 1 cc insulin syringe, 27G | Becton Dickinson | 329412 | |
| Povidone Iodine Prep Solution | Medline | MDS093944H | |
| Webcol alcohol prep swabs | Covidien | 6818 | |
| General-Purpose Labarotory Labeling tape | VWR | 89097-912 | |
| BioGel PI surgical gloves | Mölnlycke Health Care | ALA42675Z | |
| Micro Forceps with teeth | Roboz | RS-5150 | |
| Fine scissors- sharp | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Straight serrated forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Castro-Viejo needle driver | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| 100 grit 1/4 sheet sandpaper | ACE Hardware | 1010446 | Cut into strips |
| 4-0 silk suture, 30", SH needle | Ethicon | K831 | |
| 7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle | Ethicon | Z135 | Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures. |
| Rice starch | MP Biomedicals | 102955 | |
| 0.9% Sodium Chloride Irrigation | Baxter | BHL2F7121 | Warm to 37° C prior to use |
| 10 mL syringe | Becton Dickinson | 309604 | |
| 6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle | Ethicon | J212H | |
| 6-0 Ethilon nylon monofilament suture, 18", P-3 needle, | Ethicon | 1698G | |
| Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm | 3M | 1624W | Cut in half lengthwise |
Riferimenti
- Ellis, H., et al. Adhesion-related hospital readmissions after abdominal and pelvic surgery: a retrospective cohort study. Lancet. 353 (9163), 1476-1480 (1999).
- Brochhausen, C., et al. Current strategies and future perspectives for intraperitoneal adhesion prevention. J Gastrointest Surg. 16 (6), 1256-1274 (2012).
- diZerega, G. S., Campeau, J. D. Peritoneal repair and post-surgical adhesion formation. Hum Reprod Update. 7 (6), 547-555 (2001).
- Hellebrekers, B. W., Kooistra, T. Pathogenesis of postoperative adhesion formation. Br J Surg. 98 (11), 1503-1516 (2011).
- Herrick, S. E., et al. Human peritoneal adhesions are highly cellular, innervated, and vascularized. J Pathol. 192 (1), 67-72 (2000).
- Beyene, R. T., Kavalukas, S. L., Barbul, A. Intra-abdominal adhesions: Anatomy, physiology, pathophysiology, and treatment. Curr Probl Surg. 52 (7), 271-319 (2015).
- ten Broek, R. P., et al. Benefits and harms of adhesion barriers for abdominal surgery: a systematic review and meta-analysis. Lancet. 383 (9911), 48-59 (2014).
- Becker, J. M., et al. Prevention of postoperative abdominal adhesions by a sodium hyaluronate-based bioresorbable membrane: a prospective, randomized, double-blind multicenter study. J Am Coll Surg. 183 (4), 297-306 (1996).
- Cassidy, M. R., Sherburne, A. C., Heydrick, S. J., Stucchi, A. F. Combined intraoperative administration of a histone deacetylase inhibitor and a neurokinin-1 receptor antagonist synergistically reduces intra-abdominal adhesion formation in a rat model. Surgery. 157 (3), 581-589 (2015).
- Thaler, K., et al. Coincidence of connective tissue growth factor expression with fibrosis and angiogenesis in postoperative peritoneal adhesion formation. Eur Surg Res. 37 (4), 235-241 (2005).
- Hong, G. S., et al. Effects of macrophage-dependent peroxisome proliferator-activated receptor gamma signalling on adhesion formation after abdominal surgery in an experimental model. Br J Surg. 102 (12), 1506-1516 (2015).
- Whang, S. H., et al. In search of the best peritoneal adhesion model: comparison of different techniques in a rat model. J Surg Res. 167 (2), 245-250 (2011).
- Buckenmaier, C. C., Pusateri, A. E., Harris, R. A., Hetz, S. P. Comparison of antiadhesive treatments using an objective rat model. Am Surg. 65 (3), 274-282 (1999).
- Rajab, T. K., et al. An improved model for the induction of experimental adhesions. J Invest Surg. 23 (1), 35-39 (2010).
