Criação de abdominais aderências em Ratos

Summary

Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.

Abstract

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.

Introduction

adesões abdominais são uma forma de tecido cicatricial que se formam no abdómen em resposta à inflamação, tipicamente, após a cirurgia ou a infecção intra-abdominal. As aderências são uma das principais causas de dor abdominal crônica e infertilidade, e são a causa mais comum de obstrução do intestino delgado ^1. A presença de aderências torna a executar uma segunda operação abdominal mais difícil e aumenta a probabilidade de complicações ^2.

Apesar de anos de investigação, os mecanismos subjacentes à formação de aderências permanecem pouco compreendidos. Sabe-se que uma lesão inicial à superfície peritoneal provoca uma exsudação de fluido rica em fibrina, o qual forma um coágulo que se liga as superfícies do intestino e a parede abdominal juntamente ^3. Mais tarde, os fibroblastos e outras células migram para o espaço adesiva e secretar tecido conjuntivo ^4. Ao longo de meses ou anos a adesão amadurece através do desenvolvimento de vasos sanguíneos e nervos <sup> 5.

Vários produtos comerciais existentes que foram concebidos para reduzir a formação de adesões após cirurgia abdominal (por exemplo, Seprafilm). Todos estes produtos actuam como barreiras mecânicas e parar a formação de aderência, impedindo o contacto físico entre alças intestinais e a parede abdominal ^6,7. Apesar das evidências de um estudo controlado que uma barreira de adesão cirúrgica reduz a formação de aderências ^8, muitos cirurgiões anecdotally foram decepcionado com a eficácia dos produtos barreira mecânica.

Actualmente não há terapias anti-adesão à base de drogas, o qual reflecte o facto de que os processos precisos envolvidos na formação de aderências são mal compreendidos. O desenvolvimento de uma terapia que visa especificamente agentes celulares e moleculares envolvidas na formação de aderências exigirá uma melhor compreensão dos eventos que estão envolvidas na formação da adesão. vários gruposs identificaram vias moleculares que podem ser importantes para a formação de aderências ^9-11. Os modelos animais proporcionam um meio ambiente excelente para o estudo da formação de aderências. Muitos estudos foram publicados descrevendo a criação cirúrgica de adesão em vários animais, em particular o rato e ratinho ^6,12-14. Dada a nossa experiência com o estudo fibrose no mouse e a ampla disponibilidade de ratinhos transgénicos e anticorpos baseado no mouse, escolhemos o rato como modelo para o estudo de aderências. Relata-se a técnica que desenvolvemos para criar reprodutível e confiável aderências abdominais no rato.

Protocol

O protocolo a seguir foi aprovado pelo Comitê Animal Care Institucional e Use da Universidade de Stanford (IACUC) e está em conformidade com todas as normas éticas institucionais sobre o uso de animais de pesquisa. 1. Criação de abdominais aderências Inicie o rato na dieta de ração de antibiótico, uma semana antes do procedimento. Autoclave os instrumentos cirúrgicos e pré-aquecer a solução de irrigação salina. Anestesiar o mouse usando 2% de iso…

Representative Results

Aos sete dias após a cirurgia, o ceco e, possivelmente, cólon ascendente, fígado e alças de intestino delgado deve ser aderente à parede abdominal do lado direito. (Figura 8) tecido excisado pode ser embebida e seccionada e irá produzir excelentes preparações histológicas. (Figura 11, 12) Quando o processo é realizado adequadamente, 100% dos murganhos deveria ter aderências su…

Discussion

Os passos críticos neste processo são: abrasão completamente o ceco sem causar perfuração, colocando-se suturas na parede lateral abdominal, e aplicar a quantidade certa de amido. Apenas se aplicam lixa ao ceco, ou a uma pequena porção específica do intestino. Amplo uso de lixa em grandes quantidades de intestino delgado tende a causar íleo significativa. Tome cuidado para raspar o ceco com força suficiente para que a superfície torna-se áspera, mas não tanto que as lágrimas de parede. Encontrar esse equil…

Materials

Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24"	Fisher Scientific	14-206-62
Polylined Sterile Field, 18" x 24"	Busse Hospital Disposables	696	Cut a rectangular hole of the appropriate size
Isothesia isoflurane	Henry Schein	050033
Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4"	Fisher Scientific	22-415-469
Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube	Dechra Veterinary Products	NDC 17033-211-38
Nair depilatory cream	Church & Dwight Co.	22339-05
Buprenex buprenorphine  0.3 mg/mL	Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc.	NDC 12496-0757-5
1 cc insulin syringe, 27G	Becton  Dickinson	329412
Povidone Iodine Prep Solution	Medline	MDS093944H
Webcol alcohol prep swabs	Covidien	6818
General-Purpose Labarotory Labeling tape	VWR	89097-912
BioGel PI surgical gloves	Mölnlycke Health Care	ALA42675Z
Micro Forceps with teeth	Roboz	RS-5150
Fine scissors- sharp	Fine Science Tools	14060-09
Straight serrated forceps	Fine Science Tools	11050-10
Castro-Viejo needle driver	Fine Science Tools	12565-14
100 grit 1/4 sheet sandpaper	ACE Hardware	1010446	Cut into strips
4-0 silk suture, 30", SH needle	Ethicon	K831
7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle	Ethicon	Z135	Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures.
Rice starch	MP Biomedicals	102955
0.9% Sodium Chloride Irrigation	Baxter	BHL2F7121	Warm to 37° C prior to use
10 mL syringe	Becton Dickinson	309604
6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle	Ethicon	J212H
6-0 Ethilon nylon monofilament  suture, 18", P-3 needle,	Ethicon	1698G
Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm	3M	1624W	Cut in half lengthwise