Summary
Denne protokol beskriver en hidtil ukendt fremgangsmåde til 3D sammenligning af hel-hjerte myokardievæv med MRI. Dette er designet til nøjagtig vurdering af intramyocardiale injektioner i infarkt randzonen af en kronisk porcin model for myokardieinfarkt.
Abstract
Hjerte regenerative behandlinger til formål at beskytte og reparere sårede hjerte hos patienter med iskæmisk hjertesygdom. Ved at injicere stamceller eller andre biologiske der forbedrer angio- eller vaskulogenese i infarkt grænsezonen (IBZ), er vævsperfusion forbedret, og myocardiet kan beskyttes mod yderligere skader. For maksimal terapeutisk virkning, antages det, at den regenerative stof bedst leveres til IBZ. Dette kræver nøjagtige injektioner og har ført til udviklingen af nye injektionsteknik. At validere disse nye teknikker har vi designet en valideringsprotokol baseret på myokardievæv analyse. Denne protokol omfatter hel-hjerte myokardievæv behandling, der muliggør detaljeret todimensionale (2D) og tredimensionale (3D) analyse af hjertets anatomi og intramyocardiale injektioner. Hos en gris blev myokardieinfarkt skabt af en 90-min okklusion af den venstre forreste nedadgående kranspulsåre. Fire uger senere, en mixture af en hydrogel med superparamagnetiske jernoxidpartikler (SPIOs) og fluorescerende perler blev injiceret i IBZ under anvendelse af et minimalt invasiv endocardiel tilgang. 1 time efter injektionen procedure blev grisen aflivet, og hjertet blev udskåret og indlejret i agarose (agar). Efter størkning af agaren blev magnetisk resonans (MRI), udskæring af hjertet, og fluorescensafbildning udført. Efter billedet efterbehandling, blev 3D-analyse udført for at vurdere nøjagtigheden IBZ målretning. Denne protokol giver en struktureret og reproducerbar metode til vurdering af den målsøgende nøjagtigheden af intramyocardiale injektioner i IBZ. Protokollen let kan anvendes, når der ønskes behandling af arvæv og / eller validering af injektionen nøjagtighed af hele hjertet.
Introduction
Iskæmisk hjertesygdom har været verdens førende dødsårsag for de seneste årtier 1. Akut behandling efter myokardieinfarkt har til formål at genoprette blodstrømmen til myocardiet via perkutan koronar intervention eller koronar bypassoperation. I alvorlige infarkter, er et stort område af myocardiet arret, og disse tilfælde resulterer ofte i iskæmisk hjertesvigt (HF) 2. Aktuelle behandlingsmuligheder for HF fokus på forebyggelse og bevarelse af hjertefunktionen for HF-patienter, men ikke på regenerering.
I det sidste årti, har kardiale regenerative terapier blevet undersøgt som en mulighed for HF 3 behandling. Denne terapi til formål at levere biologiske, såsom stamceller eller vækstfaktorer, direkte til det sårede myocardium at inducere revaskularisering, cardiomyocyte beskyttelse, differentiering og vækst 4. For optimalterapeutiske virkning antages det, at den biologiske skal injiceres i infarkt grænsezonen (IBZ) for at lette god vævsperfusion for overlevelsen af den biologiske og for optimal effekt til målzonen 5, 6. Flere teknikker er blevet udviklet til at udføre identifikation og visualisering af IBZ at vejlede intramyocardiale injektioner 7, 8, 9, 10, 11. Udover identifikation og visualisering af IBZ, levering har ligeledes på biomaterialer og injektion katetre anvendes. At validere injektion nøjagtigheden af leveringsteknikker, der kræves en nøjagtig og reproducerbar kvantificering metode.
Vi har udviklet en protokol for hel-hjerte myokardie vævsbehandling, der tilbyder todimensional (2D) og tre-dimensionellenal (3D) billeddannelse, som kan bruges til kvalitativ og kvantitativ undersøgelse sigter. Protokollen dækker indlejring processen og den digitale billedanalyse. I dette papir udviser vi en protokol til vurdering af den målsøgende nøjagtigheden af intramyocardiale injektioner i IBZ i en stor porcin model af kronisk myokardieinfarkt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
In vivo Forsøget blev udført i overensstemmelse med den vejledning for pleje og anvendelse af forsøgsdyr udarbejdet af Institute of Laboratory Animal Research. Forsøget blev godkendt af den lokale dyreforsøg udvalg.
1. Fremstilling af injicerbar og Indlejring Løsning
- Forberede den injicerbare gel.
- Forbered 1 ml ureido-pyrimidinon (UPy) gel i overensstemmelse med tidligere beskrevne protokoller 12, 13.
- Tilføj superparamagnetiske jernoxidpartikler (SPIOs) til opløsningen for at få en koncentration på 15 ug / ml og omrør blandingen i 5 minutter til ensartet fordeling.
- Tilføje de fluorescerende mikroperler til opløsningen for at få en koncentration på 10.000 perler / ml og omrør blandingen i 5 minutter til ensartet fordeling.
- Gemme den resulterende blanding ved stuetemperatur i mørke omgivelser. Varm og vortex eller stir tHan løsning kort før injektionsproceduren.
- Forbered indlejring opløsning.
- Starte med ledningsvand ved stuetemperatur og tilsæt agarose (agar) til en koncentration på 4 vægt-%.
- Langsomt opvarme opløsningen til kogepunktet i en mikrobølgeovn og rør ofte under opvarmning. Efter at have nået kogepunktet, opbevare og holde agaropløsningen over 70 ° C i 2 timer for at tillade indesluttet luft til overfladen.
- Tillad agaren afkøle ved stuetemperatur til en temperatur mellem 50 og 60 ° C indtil tidspunktet for indlejring.
2. Injektion Procedure
- Udføre præmedicinering (antiarytmiske midler, anti-blodplade terapi og smertestillende medicin), anæstesi, venøs adgang, og intubation, som tidligere beskrevet 14.
- Udføre injektioner under anvendelse af en injektion i kateteret (tabel of Materials). For hver injektion, 0.2 ml af blandingen injiceres i en bolus ved en konstant hastighed på ca. 0,3 ml / min ved anvendelse af en injektionsindretning. Placer injektionerne ved forskellige positioner langs IBZ 12.
- Administrere 0,2 ml / kg (1,0 mmol / ml) af et gadolinium-baserede kontraststof 15 minutter inden aflivning af dyret.
- Administrere 20 ml 7,5% kaliumchlorid intravenøst aflive dyret.
- Sikker mediastinal adgang følgende protokol trin 8,2-8,3, som beskrevet af Koudstaal et al. 14. Sender en ringere caval vene 5 cm fra højre atrium og fjerne udstrømmende blod med en sugeindretning. Udskære hjerte og skyl den med 0,9% saltvand ved stuetemperatur.
3. Indlejring Procedure
- Forbered hjertet.
- Fjern hjertesækken fra hjertet og samtidig holde forkamre og hjertekamre intakt. Dissekere aorta ascendens ± 1 cm over aortaklappen hjælp Klinkenbergsaks. Skær ringere caval vene ± 1 cm fra atrium, og gøre det samme for de pulmonale vener.
- Suturere hjertespidsen til bunden af en plast indlejring beholder (17 x 15 x 15 cm, B x D x H) under anvendelse af en 2-0 sutur for at forhindre flydning af hjertet under indlejring (figur 1A).
- Suturere den resterende del af aorta på fælgene af beholderen under anvendelse af 2-0, at sikre, at hjertet er centreret og ikke røre væggene af beholderen (figur 1B).
Figur 1: Skematisk oversigt og Fotografi af Indlejring Container. (A) Skematisk oversigt over indlejringsprocessen. Hjertet (rød) er fastgjort i beholderen (blå) ved anvendelse af suturer. Efter fyldning af hjertet med agaropløsningen er rummet omkring hjertet fyldt. Endelig,to stive plastrør (gul) er anbragt i beholderen, ved siden af, men ikke rører hjertet, for at tjene som en reference under billedregistrering. (B) Fotografi af en hjerte fastgjort i indlejringen beholderen. Suturerne fastspændt til randen af beholderen ved hjælp af myg klemmer. Klik her for at se en større version af dette tal.
- Indlejre hjertet i en slutdiastolisk-lignende geometri.
BEMÆRK: Forebyggelse af luftboble skabelse er nødvendig. Hvis store luftbobler til stede i agaren opløsning, holde agar ved 40 ° C, hvilket tillader luftboblerne til overfladen.- Spænd ringere Caval vene bruge myg klemmer. Injicer langsomt flydende agar under anvendelse af en 50 ml sprøjte i højre atrium via den overlegne caval vene, indtil både det højre atrium og ventrikel fyldes helt.
- Klemme lungevenerne anvender Mosquito klemmer. passere forsigtigt en agar-fyldt 50-ml sprøjte retrogradt gennem aortaklapper. Injicer langsomt opløsningen i den venstre ventrikel (LV), indtil LV og venstre atrium fyldes helt. Efter fyldning af LV, klemme aorta for at holde agar i LV.
- Hæld den resterende agar i beholderen indtil hjertet er fuldt dækket. Placere to stive plastrør i indlejring beholder at tjene som referencepunkter strukturer for senere billedregistrering (figur 1A). Sørg for, at rørene ikke rører væggene i beholderen eller hjertet.
- Lad agaren størkner ved 2 - 7 ° C.
4. Image Acquisition
- Udfør tværgående ex vivo MRI-scanninger af hjertet, der er indlejret i beholderen.
- Placer beholderen med den integrerede hjerte inde i et hoved spole (tabel of Materials).
- Vinkling skiverne parallelt med bunden af beholderen. Brugden samme orientering og vinkling i hver ex vivo MRI-sekvens.
- At visualisere myocardium, udføre en fluid svækkede inverse recovery (FLAIR) sekvens med følgende parametre: gentagelse tid [TR] / ekkotid [TE] = 10 s / 140 ms, flip vinkel = 90 °, pixel størrelse = 0,5 x 0,5 mm, synsfelt [FOV] = 169 x 169 mm, 320 x 320 matrix og skivetykkelse 3 mm.
- At visualisere det myokardieinfarkt, udføre en sen-gadolinium forstærket (LGE) sekvens med følgende parametre: [TR] / [TE] = 5,53 ms / 1.69 ms, flipvinkel = 25 °, pixelstørrelse = 1,0 x 1,0 mm, [ FOV] = 169 x 169 mm, 176 x 176 matrix og 3 mm skivetykkelse.
- At visualisere SPIOs, udføre en T2 * -vægtede gradient ekkosekvens med følgende parametre: [TR] / [TE] = 88,7 ms / 15 lige fordelte tes med en række 1,9 - 24,6 ms, flipvinkel = 15 °, pixel size = 0,5 x 0,5 mm, [FOV] = 169 x 169 mm, 320 x 320 matrix og 3 mm skivetykkelse.
- tissue processynge
- Dreje beholderen på hovedet og lade luft mellem agar og siderne af beholderen for at fjerne det faste agaropløsning, herunder hjertet, fra beholderen. Fjerne plaststænger fra den faste agar.
- Afsnittet agar blok, der indeholder hjertet i 5 mm skiver fra spidsen til bunden af hjertet ved hjælp af en pålægsmaskine. Holde vinkling af de afskårne skiver den samme som i de overtagne MR-billeder ved at skære parallelt med bunden af agar blok.
- Plette agar skiver (herunder hjertet) i 15 minutter i 1 vægt% af 2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride (TTC) opløst i 0,9% saltvand ved 37 ° C, og fotografere skiverne på begge sider fra en vinkelret visning (figur 2A). Dernæst omhyggeligt skylles skiverne i 0,9% saltvand.
BEMÆRK: I dette studie, brugte vi et DSLR setup med en passende linse / objektiv, et stativ, og ensartet belysning. Men fotografierne tjente kun som en kontrol for vurderingen af ar-regionen,så vi kunne have brugt et andet setup.
- Fluorescens billedbehandling
BEMÆRK: Afhængigt af excitations- og emissionsbølgelængder de fluorescerende mikroperler vælge de relevante filter blok- og excitation lasere (fx de røde mikroperler anvendes her har excitations- og emissionsbølgelængder på 580 nm og 605 nm, og derfor den valgte excitation laser og båndpasfiltre blev indstillet til 532 nm, 580/30 nm og 610/30 nm).- Vælg fluorescens-mode scanning på variabel-tilstand scanner. Indstil fotomultiplikatorrøret til 430 V eller tilsvarende og pixelstørrelsen til 100 x 100 um. Vælg en excitation laser (532 nm) nærmest excitationsbølgelængden af fluorescerende mikroperler.
- For første filterblok, vælg båndpasfilter (580/30 nm), der overlapper med emissionsbølgelængden af de injicerede fluorescens-perler (kanal 1). Vælg et båndpasfilter for det andet filter blok (610/30) uden for emission bølgelængde (kanal 2).
BEMÆRK: Det andet filter blok tjener som en negativ kontrol og fjerne auto-fluorescens samtidig holde injektionsstederne intakt. - Scanne begge sider af agar skiver i fluorescensen tilstanden af variablen-mode laserscanner anvendelse af de to kanaler. Sørg for, at hver skive er helt scannet, herunder referenceårene huller.
5. Efterbehandling
BEMÆRK: Det første skridt i billedet efterbehandling er den manuelle segmentering af myokardiet hjælp i egenudviklede scripts til at spore endo- og epikardielle grænser, samt injektionssteder. Dette er den samme for både MR og fluorescens-scanninger.
- Segment myokardiet i MR scanninger.
- Segment den endokardiale og epikardielle LV grænser på FLAIR MRI sekvens billeder.
- Kopier LV segmentering fra trin 5.1.1 til LGE-MRI datasæt og segment arret på LGE MR sekvens.
- Kopier myokardiet segmentering fra trin 5.1.1 til T2 * vægtede datasæt og segmentere de SPIO depositioner i LV myokardiet.
- Behandle fluorescensbilleder og udfører segmentations.
- Indlæs filerne er opnået fra variabel tilstand scanner og lave et separat billede af hver tværsnit hjerte skive.
- Flip skiverne, der blev scannet i base til apex orientering og sortere fluorescens billeder i en stabel for begge kanaler, der er orienteret fra apex til basis.
- Segment den endokardiale og epikardielle LV grænser på fluorescens billeder.
- Segment arret manuelt på fluorescens billeder og bruge LGE-MR-scanning og fotografier for at bekræfte ar morfologi.
- Træk stakken af kanal 2 billede fra stakken af kanal 1 billede at udelukke automatisk fluorescens. Manuelt segment de fluorescerende mikroperle depositioner og bruge T2 * billeder til bekræftelse.
- At skabeen anatomisk korrekt 3D-geometri, udføre en stiv registrering af skiverne i stablen billedet baseret på referencestrukturer (hullerne skabt af de stive rør). Beregn og opbevar den anvendte oversættelse og rotation af hvert billede.
- Anvend de gemte transformationer til billedet stakke og de segmenter. Lineært interpolere de segmentations af begge sider af skiverne til at rekonstruere den oprindelige skive tykkelse og for at skabe en 3D-model af dataene.
6. Analyse
- Udføre 2D og / eller 3D målinger af afstanden mellem centrene af injektionsstederne og IBZ at vurdere injektionen nøjagtighed. Mål afstanden langs endokardie af LV segmentering. I figur 2C og 2F er et eksempel på de 2D- og 3D-målinger angivet af den røde linje.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
tissue Indlejring
Ved indbygning proces blev en slutdiastolisk-lignende geometri etableret. Agaren held klæbet til hjertevævet, således at væv, der skal opskæres i den ønskede vinkling med lige skivetykkelser (figur 2A og 2C).
Scar- og injektionsstedet Assessment
For hver imaging modalitet, blev infarkt og injektion placering vurderinger udført med succes. I både 2D fluorescensafbildning og MRI-billeddannelse, arret og injektionssteder var klart forskellige (figur 2C, 2D, og 2E, henholdsvis). Fotografier af TTC-farvede væv og LGE-MRI-billeder giver en kontrol for ar vurdering fluorescensafbildning (figur2A og 2C).
3D Genopbygning
Referencemarkørerne giver en præcis og pålidelig metode til registrering billede. Billede efterbehandling muliggør genopbygning af 3D geometri af ex vivo hjerte baseret på segmentations og de fluorescerende billeder af hjertet (figur 2F). 3D geometri segmentations muliggør en nøjagtig 3D injektion nøjagtighed vurdering (figur 2F).
Målinger
I denne undersøgelse blev injektionsstederne deposition og IBZ projiceret på den endokardiale væg. Bagefter blev afstandene mellem fremspringene på den endokardiale overflade målt (figur 2C og 2F). Med høj opløsning (0,1 x 0,1 mm) fluorescerende billedertilladt nøjagtige målinger. I 3D-rekonstruktion, beslutningen i z-retningen som følge af skivetykkelse var 2,5 mm.
Figur 2: Typisk Ex vivo Imaging Data og 3D Genopbygning. De resulterende billeder erhvervet af de forskellige modaliteter, der anvendes i denne protokol. Alle billeder viser den samme tværgående skive i den integrerede hjerte. (A) Fotografi af TTC-farvede skive, hvori arret er synlig. (B) Skematisk oversigt over de anatomiske strukturer. (C) Fluorescence billede med begge kanaler tilsammen. Kanalen dækker perlen emissionsspektret er vist med rødt og den negative kontrol er vist i grøn. Den røde cirkel angiver injektionsstedet. Afstanden måling fra injektion til IBZ er angivne with den røde linje. (D) Short-aksen LGE-MRI; infarktareal er vist som en hyper-intens hvide område. (E) T2 * vægtede MRI; De SPIO partikler inden den injicerede substans kan genkendes som den lokale signal void angivet af den røde cirkel. (F) 3D-visualisering af injektionssteder (rød), arvæv (hvid), og myokardiet (grøn) som segmenteret i de fluorescerende billeder. Pilen angiver samme injektion stedet som i C og E. I dette billede, er det samme afstandsmåling angivet med den røde linje. LV = Venstre ventrikels, RV = højre ventrikel. Skalalinjen repræsenterer 10 mm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hel-hjerte 3D myokardievæv forarbejdning ifølge denne protokol giver en struktureret metode, som tillader 3D analyse af infarkt, den IBZ, og de udførte injektioner med hensyn til hjertets anatomi. Påfyldningsvolumenet af hjertet afhænger af den ønskede analyse. I denne undersøgelse at vurdere injektion nøjagtighed, vi havde til formål at fylde dit hjerte til at ligne den endelige diastoliske geometri så tæt som muligt. At håndhæve denne, er LV toppunkt fastgjort til bunden af beholderen og LV er fyldt med agar mens lungevenerne er fastspændt. Når LV er fyldt, aorta fastspændes så godt, forhindrer agar strømme ud af LV og efterligner slutdiastolisk geometri så tæt som muligt. Sektionering den integrerede hjerte tilbyder fordelen ved ensartet skive tykkelse og gør det muligt for skiverne at være i samme vinkling som i ex vivo billeddannelse. Efter udskæring, indkapslingsmaterialet forhindrer væv fra deformation forårsaget afhåndtering af skiverne under billedoptagelse. Ideelt set bør udføres TTC-farvning snarest muligt efter fjernelse fra kroppen, da farvningen er afhængig af enzymer til at skelne mellem metabolisk aktive og Inaktiv væv. I vores protokol, men der er flere vigtige skridt, der skal udføres før TTC farvning kan finde sted, herunder indlejring proces, hvor den integrerede hjerte afkøles at størkne agaren. Da vi har observeret klar farvning af infarktvævet i alle skiver, mener vi, at denne virkning var minimal.
Den billeddannende udstyr, der anvendes her, kan erstattes af forskelligt udstyr, der giver samme funktionalitet. Høj opløsning fluorescensimagografi på en variabel tilstand laserscanner og mulighed for at indstille flere filterblokke for effektivt og præcist behandle vævet er afgørende for detaljeret analyse. Til billedet efterbehandling, softwarepakker, der tillader fuld frihed til at perfDer kræves orm billedanalyse. Det er vores erfaring, var 3D analyse til vurdering af injektionen nøjagtighed anvendte, men analyse af de 2D-billeder er også muligt.
Vi har hidtil udført denne myocardievæv forarbejdningsmetode i 10 grise og har kunnet finde 73% af injektionsstederne af i alt 118 udførte injektioner. Forskellen mellem mængden af injektioner udføres, og mængden af identificerede injektionssteder er muligvis forårsaget af forskellen mellem 5 mm skive tykkelse, og 1,5-mmm indtrængningsdybde af fluorescensen scanneren. Teoretisk er 2 mm af væv ikke målt i hver skive. Tynde ville løse dette problem.
Begrænsninger
På trods af end-diastoliske-lignende geometri i starten af indlejring processen, nogle hjerter syntes at have pådraget sig en smule i agaren. Da vi ikke observeret store afvigelser fra den endelige diastoliske volumen, mener vi, atdenne virkning var minimal og ikke påvirke bedømmelsen injektion nøjagtighed. Anvendelse tyndere vævssnit ville forbedre nøjagtigheden af vurderingen og muliggøre en mere detaljeret sammenligning med ex vivo MRI. En anden mulighed ville være at anvende NIRF midler i stedet for fluorescerende mikroperler at forbedre indtrængningsdybden og muligvis-detekteret fraktion. Desuden kan den lave temperatur af den indlejrede hjerte og timingen af TTC-farvning forårsage en mangel på de enzymer, der er nødvendige for denne type farvning. Ikke desto mindre, at fotografierne af de farvede skiver viste sig at være en god kontrol for ar vurdering.
Fremtidige perspektiver
Selv om denne metode oprindeligt var designet til vurdering af intramyocardiale injektioner nøjagtighed, kan undersøgelser med andre endpoints også drage fordel af denne metode (fx infarktstørrelse, morfologi vurdering eller andre organer). Ud over MRI, andre 3D billeddiagnostiske modaliteter, såsom CT,PET eller SPECT, kan bruges på det myocardiale væv efter den påviste metode. Desuden kunne integrationen af disse forskellige afbildningsmodaliteter eventuelt yderligere optimering af 2D og 3D-analyser.
Konklusion
Afslutningsvis har vi givet en roman, standardiseret, og reproducerbar metode til at udføre 3D hel-hjerte myokardie vævsbehandling. Agar har vist sig at være et egnet medium i hel-hjerte indlejring, således at væv, der skal opskæres i den ønskede vinkling og med samme tykkelse. Desuden registrering billedet viste sig muligt for 3D-rekonstruktion af myokardie billeddannelse, der gør det muligt 3D vurdering på en høj rumlig opløsning, som kan bruges til kvalitativ og kvantitativ undersøgelse sigter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Forfatterne vil gerne takke Marlijn Jansen, Joyce Visser, og Martijn van Nieuwburg for deres bistand med dyreforsøg. Vi sætter stor anerkende Martijn Froeling og Anke Wassink for deres hjælp med MR billeddannelse.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% Saline | Braun | ||
| Agarose | Roche Diagnostics | Scientific grade multipurpose agar | |
| Biomolecular fluorescence scanner Typhoon 9410 | GE Healthcare | ||
| Embedding container | Plastic, dimensions 17 x 14.5 x 14 cm | ||
| FluoSpheres Polystyrene Microspheres | Invitrogen | F8834 | red, 10 µm |
| Gadolinium | Gadovist | 1.0 mmol/mL | |
| dS 32 channel head coil | Philips | Or similar | |
| Matlab | Mathworks | To insure compatability 2015a or newer | |
| Meat slicer | Berkel | ||
| Myostar injection catheter | Biosense Webster | ||
| Super paramagnetic iron oxide particles | Sinerem | ||
| Triphenyl-tetrazolium chloride | Merck | ||
| UPy-PEG10k | |||
| Vicryl 2-0 | Ethicon |
References
- Nowbar, A. N., Howard, J. P., Ja Finegold,, Asaria, P., Francis, D. P. 2014 global geographic analysis of mortality from ischaemic heart disease by country, age and income: statistics from World Health Organisation and United Nations. Int J Cardiol. 174 (2), 293-298 (2014).
- Kannel, W. B., Belanger, A. J. Epidemiology of heart failure. Am Heart J. 121 (3), 951-957 (1991).
- Ibáñez, B., Heusch, G., Ovize, M., Van De Werf, F. Evolving therapies for myocardial ischemia/reperfusion injury. J Am Coll Cardiol. 65 (14), 1454-1471 (2015).
- Bartunek, J., Vanderheyden, M., Hill, J., Terzic, A. Cells as biologics for cardiac repair in ischaemic heart failure. Heart. 96 (10), 792-800 (2010).
- Orlic, D., Kajstura, J., et al. Bone marrow cells regenerate infarcted myocardium. Nature. 410 (6829), 701-705 (2001).
- Nguyen, P. K., Lan, F., Wang, Y., Wu, J. C. Imaging: Guiding the Clinical Translation of Cardiac Stem Cell Therapy. Circ Res. 109 (8), 962-979 (2011).
- Psaltis, P. J., Worthley, S. G. Endoventricular electromechanical mapping-the diagnostic and therapeutic utility of the NOGA XP Cardiac Navigation System. J Cardiovasc Transl Res. 2 (1), 48-62 (2009).
- Tomkowiak, M. T., Klein, A. J., et al. Targeted transendocardial therapeutic delivery guided by MRI-x-ray image fusion. Catheter Cardiovasc Interv. 78 (3), 468-478 (2011).
- Dauwe, D. F., Nuyens, D., et al. Three-dimensional rotational angiography fused with multimodal imaging modalities for targeted endomyocardial injections in the ischaemic heart. Eur Heart J Cardiovasc Imaging. 15 (8), 900-907 (2014).
- van Slochteren, F. J., van Es, R., et al. Multimodality infarct identification for optimal image-guided intramyocardial cell injections. Neth Heart J. 22 (11), 493-500 (2014).
- van Slochteren, F. J., van Es, R., et al. Three dimensional fusion of electromechanical mapping and magnetic resonance imaging for real-time navigation of intramyocardial cell injections in a porcine model of chronic myocardial infarction. Int J Cardiovasc Imaging. 32 (5), 833-843 (2016).
- Pape, aC. H., Bakker, M. H., et al. An Injectable and Drug-loaded Supramolecular Hydrogel for Local Catheter Injection into the Pig Heart. J Vis Exp. (100), (2015).
- Bastings, M. M. C., Koudstaal, S., et al. A fast pH-switchable and self-healing supramolecular hydrogel carrier for guided, local catheter injection in the infarcted myocardium. Adv Healthc Mater. 3 (1), 70-78 (2014).
- Koudstaal, S., Jansen of Lorkeers, S. J., et al. Myocardial infarction and functional outcome assessment in pigs. J. Vis. Exp. (86), (2014).
