Allogeneic प्लेटलेट युक्त प्लाज्मा के प्रभाव (पीआरपी) के उपचार की प्रक्रिया पर खोदी गई दुखती चूहों का एक Methodological वर्णन:
Summary
इस प्रोटोकॉल का वर्णन है कि चूहों में tendons चिकित्सा के मूल्यांकन की प्रक्रिया है कि allogeneic प्लेटलेट रिच प्लाज्मा (पीआरपी) के साथ इंजेक्शन किया गया है या दुखती पट्टा के भाग को हटाने के बाद खारा समाधान । पट्टा चिकित्सा की प्रगति का विश्लेषण के विभिंन प्रकारों का उपयोग कई समय बिंदुओं पर मूल्यांकन किया है ।
Abstract
इस लेख का वर्णन प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं अगर पीआरपी सकारात्मक पट्टा चिकित्सा को प्रभावित कर सकते है निरीक्षण करते थे । वहाँ 4 मुख्य चरणों का पालन करने के लिए कर रहे हैं: दुखती tendons में एक घाव प्रेरित; पीआरपी तैयार है और यह सुई (या खारा समाधान); पट्टा निकालें; और यांत्रिक, आणविक, और ऊतकवैज्ञानिक मूल्यांकन प्रदर्शन करते हैं । हर कदम पर, सभी प्रक्रियाओं और विधियों में विस्तार से वर्णित हैं, ताकि वे आसानी से reproduced किया जा सकता है ।
दुखती tendons शल्य चिकित्सा (एक 5 मिमी लंबे अनुभाग के हटाने) खोदी गई है । बाद में, पीआरपी या खारा समाधान का अध्ययन है कि पीआरपी पट्टा की चिकित्सा पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है इंजेक्शन था । इस अध्ययन में 40 पशुओं के तीन समूह (कुल 120 चूहों का उपयोग किया गया) 2 उपसमूहों में विभाजित किए गए थे: पीआरपी इंजेक्शन समूह और एक खारा इंजेक्शन नियंत्रण समूह । चूहों को बढ़ती समय अंक (समूह एक: 5 दिन में बलिदान किया गया; ग्रुप बी: 15 दिन; समूह सी: 30 दिन) और tendons हटा दिया गया । 90 tendons transcriptomic विश्लेषण प्रदर्शन करने से पहले यांत्रिक परीक्षण किया गया और 30 शेष tendons ऊतकवैज्ञानिक विश्लेषण करने के लिए प्रस्तुत किए गए ।
Introduction
जमावट, भड़काऊ प्रक्रियाओं, और प्लेटलेट्स की उन्मुक्ति मॉडुलन भूमिकाओं को अच्छी तरह से जाना जाता है1. हाल ही में, यह प्रदर्शित किया गया है कि वे भी दृढ संपत्तियों2,3है । वास्तव में, विभिंन साइटोकिंस और वृद्धि कारकों (वीईजीएफ़, PDGF, TGF-बी, IGF-I, और एचजीएफ) प्लेटलेट्स द्वारा दानेदार के दौरान जारी कर रहे हैं । इन विकास कारकों angiogenesis को बढ़ावा देने, ऊतक remodeling, और घाव भरने (हड्डी, त्वचा, मांसपेशी, पट्टा)2। केंद्रापसारक ऑटोलॉगस रक्त प्लेटलेट रिच प्लाज्मा (पीआरपी) जो अलगाव विधि के आधार पर उच्च प्लेटलेट सांद्रता शामिल पैदा करता है (3 और 10 बार रक्त आधारभूत सांद्रता के बीच) । दरअसल, विभिंन पीआरपी तैयारी तकनीक एक समान अंतिम उत्पाद प्रदान नहीं कर सकते । अब तक, इस मुद्दे पर कोई अंतर्राष्ट्रीय सामांय समझौता नहीं किया गया है । कुल मिलाकर, पीआरपी ऐसी tendinopathy, तल fasciitis, पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस के रूप में पुरानी, पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस के इलाज के लिए एक आकर्षक चिकित्सीय विकल्प हो सकता है, और4संघ । यह मौखिक सर्जरी में पहली बार के लिए इस्तेमाल किया गया था और implantology4 में सुधार लाने और एक दंत प्रत्यारोपण रखने के बाद हड्डी चिकित्सा में तेजी लाने के लिए । इस अध्ययन में, हम एक reproducible विधि का वर्णन करते हैं जो पशु प्रयोग4के लिए पीआरपी के अधिग्रहण की अनुमति देता है ।
tendons के घावों के बाद से अक्सर खिलाड़ियों और शारीरिक कार्यकर्ताओं में मनाया जाता है, चिकित्सा की प्रक्रिया को बढ़ाने और इस तरह वसूली के लिए समय को कम करने के महान ब्याज की कर रहे हैं5. नई उपचार विधियों कि विकसित कर रहे है अक्सर विकास कारकों का उपयोग शामिल है, और प्रशासन पीआरपी के एक सरल और ंयूनतम इनवेसिव तरीका है अंतर्जात विकास कारकों की एक मिश्रण देने के लिए4।
इन विट्रो या पशु अध्ययन में कई का प्रदर्शन किया है कि प्लाज्मा के प्रशासन के प्लेटलेट्स के एक उच्च स्तर से युक्त, जैविक मध्यस्थों को रिहा करके, पट्टा और बंधन की मरंमत जैविक मध्यस्थों को रिहा करके उत्तेजित कर सकते है6 ,7,8,9. इसके अलावा, अंय अध्ययनों से पता चला है कि पीआरपी प्रकार मैं और III tendons कोशिकाओं9में कोलेजन संश्लेषण को उत्तेजित कर सकते है,10,11। यह भी सुझाव दिया गया है कि पीआरपी मैट्रिक्स metalloproteinases (MMPs) के सक्रियण में कमी कर सकते है और इसलिए मैट्रिक्स के क्षरण को कम । कोशिकाओं है कि सूजन की प्रक्रिया में शामिल कर रहे हैं एमएमपी-9, जो ऊतक remodeling में एक भूमिका निभाता है उत्पादन कर सकते हैं (शारीरिक और रोग)12सूजन से प्रेरित.
इस जानकारी के आधार पर, हम की कल्पना की है कि चूहों की खोदी दुखती tendons में एक भी पीआरपी इंजेक्शन वसूली की प्रक्रिया में सुधार और मरंमत ऊतक के यांत्रिक शक्ति सकता है । इस वसूली की प्रक्रिया के दौरान उपचार tendons की यांत्रिक गुणों को मापने और ऊतकवैज्ञानिक और आणविक विश्लेषण प्रदर्शन के द्वारा परीक्षण के लिए नए गठन ऊतक में कोलेजन remodeling का मूल्यांकन है । अध्ययन का उद्देश्य अगर allogeneic पीआरपी का एक इंजेक्शन खोदी दुखती tendons की चिकित्सा को प्रभावित कर सकता निरीक्षण था ।
Protocol
Representative Results
Discussion
प्लेटलेट्स पट्टा चिकित्सा प्रक्रिया के प्रारंभिक भड़काऊ चरण के लिए आवश्यक हैं । जब इन प्लेटलेट्स बाध्यकारी ऊतक या कारक है कि जमावट प्रेरित करने के लिए उजागर कर रहे हैं, वे विकास कारक है कि α granules में स्ट?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस अध्ययन को लियोन Frédéricq फंड के स्टैंडर्ड डि Liège और Lejeune-Lechien पलाश ने सपोर्ट किया था ।
Materials
| Xylazine (Xyl-M) | VMD | none | anesthetic |
| Ketamin (Jétamine 1000 CEVA) | CEVA Santé Animale | none | anesthetic |
| Buprenorphin (Vetergésic Multidosis) | ALSTOE | none | Painkiller |
| iso-Betadine | MEDA-Pharma | none | Desinfectant |
| resorbable yarn Vicryl 6/0 | Johnson & Johnson | ||
| Nembutal | CEVA Santé Animale | none | Anesthetic |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | Preserves structure of the tissue |
| Isopropanol 100% | VWR | 20,922,364 | |
| Ethanol 95% | VWR | 20,823,362 | |
| Xylene | VWR | 28973.363 | |
| Paraffin | VWR | LEIC3950.1006 | |
| Hematoxylin | Millipore | 1.15938.0025 | Colorant |
| Eosin | Millipore | 1.15935.0100 | Colorant |
| Eukitt | Sigma-Aldrich | 3989 | Mounting Medium |
| CaCl2 |
Riferimenti
- Kaux, J., Degrave, N., Crielaard, J. Platelet rich plasma traitement des tendinopathies chroniques? Revue de la littérature. Platelet rich plasma treatment of chronic tendinopathies? Review of literature. J. Traumatol. du Sport. 24, 99-102 (2007).
- Anitua, E., et al. Autologous preparations rich in growth factors promote proliferation and induce VEGF and HGF production by human tendon cells in culture. J. Orthop. Res. 23, 281-286 (2005).
- Bosch, G., et al. Effects of platelet-rich plasma on the quality of repair of mechanically induced core lesions in equine superficial digital flexor tendons: A placebo-controlled experimental study. J. Orthop. Res. 28, 211-217 (2010).
- Kaux, J. F., Drion, P., Croisier, J. L., Crielaard, J. M. Tendinopathies and platelet-rich plasma (PRP): From pre-clinical experiments to therapeutic use. J. Stem Cells Regen. Med. 11, P7-P17 (2015).
- Maffulli, N., Wong, J., Almekinders, L. C. Types and epidemiology of tendinopathy. Clin. Sports Med. 22, 675-692 (2003).
- Molloy, T., Wang, Y., Murrell, G. The roles of growth factors in tendon and ligament healing. Sports Med. 33, 381-394 (2003).
- Lyras, D. N., et al. The effect of platelet-rich plasma gel in the early phase of patellar tendon healing. Arch. Orthop. Trauma Surg. 129, 1577-1582 (2009).
- Aspenberg, P., Virchenko, O. Platelet concentrate injection improves Achilles tendon repair in rats. Acta Orthop. Scand. 75, 93-99 (2004).
- Visser, L. C., et al. Growth Factor-Rich Plasma Increases Tendon Cell Proliferation and Matrix Synthesis on a Synthetic Scaffold: An In Vitro Study. Tissue Eng. Part A. 16, 1021-1029 (2010).
- Zhang, J., Wang, J. H. -. C. Platelet-Rich Plasma Releasate Promotes Differentiation of Tendon Stem Cells Into Active Tenocytes. Am. J. Sports Med. 38, 2477-2486 (2010).
- Kajikawa, Y., et al. Platelet-rich plasma enhances the initial mobilization of circulation-derived cells for tendon healing. J. Cell. Physiol. 215, 837-845 (2008).
- Pasternak, B., Aspenberg, P. Metalloproteinases and their inhibitors-diagnostic and therapeutic opportunities in orthopedics. Acta Orthop. 80, 693-703 (2009).
- Dell, R. B., Holleran, S., Ramakrishnan, R. Sample size determination. ILAR J. 43, 207-213 (2002).
- Mähler Convenor, M., et al. FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units. Lab. Anim. 48, 178-192 (2014).
- Kaux, J. -. F., et al. Étude comparative de cinq techniques de préparation plaquettaire (platelet-rich plasma). Pathol. Biol. 59, 157-160 (2011).
- Wieloch, P., Buchmann, G., Roth, W., Rickert, M. A cryo-jaw designed for in vitro tensile testing of the healing Achilles tendons in rats. J. Biomech. 37, 1719-1722 (2004).
- Kaux, J. -. F., et al. Vascular Endothelial Growth Factor-111 (VEGF-111) and tendon healing: preliminary results in a rat model of tendon injury. Muscles. Ligaments Tendons J. 4, 24-28 (2014).
- Docheva, D., Hunziker, E. B., Fässler, R., Brandau, O. Tenomodulin is necessary for tenocyte proliferation and tendon maturation. Mol. Cell. Biol. 25, 699-705 (2005).
- Lambert, C. A., Colige, A. C., Munaut, C., Lapière, C. M., Nusgens, B. V. Distinct pathways in the over-expression of matrix metalloproteinases in human fibroblasts by relaxation of mechanical tension. Matrix Biol. 20, 397-408 (2001).
- Nurden, A. T., Nurden, P., Sanchez, M., Andia, I., Anitua, E. Platelets and wound healing. Front. Biosci. 13, 3532-3548 (2008).
- Woodall, J., Tucci, M., Mishra, A., Benghuzzi, H. Cellular effects of platelet rich plasma: a study on HL-60 macrophage-like cells. Biomed. Sci. Instrum. 43, 266-271 (2007).
- Taylor, D. W., Petrera, M., Hendry, M., Theodoropoulos, J. S. A systematic review of the use of platelet-rich plasma in sports medicine as a new treatment for tendon and ligament injuries. Clin. J. Sport Med. 21, 344-352 (2011).
- Mazzocca, A. D., et al. The positive effects of different platelet-rich plasma methods on human muscle, bone, and tendon cells. Am. J. Sports Med. 40, 1742-1749 (2012).
- McCarrel, T. M., Minas, T., Fortier, L. A. Optimization of leukocyte concentration in platelet-rich plasma for the treatment of tendinopathy. J. Bone Joint Surg. Am. 94 (1-8), e143 (2012).
- Boswell, S. G., et al. Increasing platelet concentrations in leukocyte-reduced platelet-rich plasma decrease collagen gene synthesis in tendons. Am. J. Sports Med. 42, 42-49 (2014).
- Virchenko, O., Aspenberg, P. How can one platelet injection after tendon injury lead to a stronger tendon after 4 weeks?: Interplay between early regeneration and mechanical stimulation. Acta Orthop. 77, 806-812 (2006).
