ラットの断面アキレス腱の治癒過程に及ぼす同種多血小板血漿 (PRP): 方法論的説明
Summary
このプロトコルでは、アキレス腱の部分を削除した後同種多血小板血漿 (PRP) と食塩水注入されているラット腱治癒の評価プロセスについて説明します。腱治癒の進行状況は、別のタイプの解析を使用していくつかの時点で評価されます。
Abstract
この資料では、PRP が積極的に腱の治癒に影響かどうかを観察する実験手順について説明します。4 主な手順があります: アキレス腱; で病変を誘発します。PRP を準備し、それ (または食塩液) を注入腱; を削除します。分子、生体力学的および組織学的評価を行います。各ステップでは簡単に再現できるように、すべての手続きと方法の詳細に説明されます。
アキレス腱は、外科的切片 (5 mm 長いセクションの除去) をされています。その後、PRP や食塩は、PRP が腱の治癒に肯定的な効果を持つかどうかを研究する注入しました。40 動物 (ラット 120 の合計はこの研究で使用された) の 3 つのグループ、2 つのサブグループに細分された: PRP 投与群と生理食塩水注入制御グループ。ラットが増加 (グループ a: 5 日の時点で犠牲になったグループ b: 15 日;グループ c: 30 日) 腱が削除されました。90 腱が生体力学的トランスクリプトーム解析を実行する前にテストを受けたし、30 の残りの腱組織学的解析提出しました。
Introduction
凝固、炎症性プロセス、および血小板の免疫変調の役割はよく知られている1 です。最近では、修復プロパティ2,3がまたあることが実証されています。確かに、様々 なサイトカインや成長因子 (IGF、TGF B、PDGF VEGF- ・ HGF) 脱顆粒中に血小板によって解放されます。これらの成長因子は、血管新生、組織の改造、および創傷治癒 (骨、皮膚、筋肉、腱)2を促進します。多血小板血漿 (PRP) 分離法によって高い血小板濃度が含まれているを生成する自己血を遠心分離 (3 間と 10 回血のベースライン濃度)。確かに、さまざまな PRP 作製手法は、同じ最終製品を提供できません。これまでは、この問題に関する国際の一般協定がないがあった。全体的にみて、PRP は、寛解、足底筋膜炎、変形性関節症、偽関節4など、慢性的な筋骨格の条件を治療するための魅力的な治療オプション可能性があります。それは改善し、歯科インプラントを配置した後治癒を加速する口腔外科とインプラント4で初めて使用されました。本研究では動物実験4の PRP の買収ができる再現性のある方法をについて説明します。
腱の病変は、スポーツマン、物理的な労働者に多く認められ, 大きな関心5が癒しのプロセスとリカバリの時間を短縮を強化します。新しいの多くを開発している治療法は、成長因子の使用を伴うし、PRP の管理は内因性の成長因子4のブレンドを提供するシンプルで低侵襲の方法。
いくつかの生体外でまたは動物の研究は生物の仲介人の解放によって血小板の高レベルを含むプラズマの管理が生物学的調停6 を解放することによって腱・靭帯の修復を刺激することを実証しています。、7,8,9。さらに、他の研究は、PRP が私と腱の III コラーゲン産生細胞の9,10,11種類を刺激することが示されています。それは、PRP するマトリックスメタロプロテアーゼ (Mmp) の活性化が低下し、ため、行列の分解を減らすことも示唆されています。炎症プロセスに関与している細胞は、MMP-9、組織の改造 (生理・病理) 炎症12誘導の役割を果たすを生成できます。
この情報に基づいて、我々 は単一 prp 血小板注入断面のアキレス腱にラットの回復プロセスと修復組織の機械的強度を改善することを仮定しました。これは、回復処理中に腱の力学的特性を測定することによって、コラーゲンの新しく形成された組織のリモデリングを評価する組織学的および分子の解析を実行することによってテストされます。研究の目的は、同種 PRP の単回投与が断面のアキレス腱の治癒に影響を与えるかどうかを観察することだった。
Protocol
Representative Results
Discussion
血小板は治癒過程の腱の炎症性早期に不可欠です。これらの血小板は、結合組織や血液凝固因子にさらされている、彼らは α 顆粒に貯蔵される成長因子を解放します。この相互作用による細胞外マトリックス高分子 synthetized、間葉系細胞が増殖します。血小板も血管新生を強化し、細胞の分化6,20を刺激、血液循環前駆細胞の走化性活性があります…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
本研究は、スタンダールリエージュ支えられて、レオン Frédéricq 資金の助成金ルジューン-Lechien。
Materials
| Xylazine (Xyl-M) | VMD | none | anesthetic |
| Ketamin (Jétamine 1000 CEVA) | CEVA Santé Animale | none | anesthetic |
| Buprenorphin (Vetergésic Multidosis) | ALSTOE | none | Painkiller |
| iso-Betadine | MEDA-Pharma | none | Desinfectant |
| resorbable yarn Vicryl 6/0 | Johnson & Johnson | ||
| Nembutal | CEVA Santé Animale | none | Anesthetic |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | Preserves structure of the tissue |
| Isopropanol 100% | VWR | 20,922,364 | |
| Ethanol 95% | VWR | 20,823,362 | |
| Xylene | VWR | 28973.363 | |
| Paraffin | VWR | LEIC3950.1006 | |
| Hematoxylin | Millipore | 1.15938.0025 | Colorant |
| Eosin | Millipore | 1.15935.0100 | Colorant |
| Eukitt | Sigma-Aldrich | 3989 | Mounting Medium |
| CaCl2 |
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