Grip özgü antikor titreleri ölçmek için bir en iyi duruma getirilmiş hemaglütinasyon inhibisyon (hı) tahlil
Summary
Sunulan iletişim kuralları nasıl grip özgü antikor titreleri serum numuneleri grip aşısı alıcıların üzerinden ölçmek için bir hemaglütinasyon inhibisyon tahlil gerçekleştirileceğini açıklar. İlk tahlil hemaglütinasyon tarafından en iyi viral antijen konsantrasyonları belirler. İkinci tahlil hemaglütinasyon inhibisyon tarafından grip özgü antikor titreleri quantifies.
Abstract
Antikor titreleri grip ve diğer patojenleri serolojik korunmak için vekil işaretleri olarak yaygın olarak kullanılır. Detaylı bilgi antikor üretim öncesi ve sonrası aşı aşı indüklenen dokunulmazlık anlamak için gereklidir. Bu makalede grip özgü antikor titreleri belirlemek için güvenilir bir noktası noktası protokolü. İlk protokol için ikinci Protokolü (hemaglütinasyon tahlil, HA tahlil) sonraki kullanım konsantrasyonları standartlaştıran hemaglütinasyon için gerekli antijen miktarları belirtmek için bir yöntem açıklanır. İkinci Protokolü grip özgü antikor titreleri farklı virüs suşları karşı miktar insan serum veya hücre kültür supernatants (hemaglütinasyon inhibisyon tahlil, HI tahlil) seri bir seyreltme kullanarak açıklar.
Uygulamalı örnek olarak, biz bir değerlikli Inaktif grip aşısı alınan sağlıklı bir kohort antikor tepki göstermek. Ayrıca, farklı grip virüsleri arasında olan gösterilir ve hayvan kırmızı kan hücrelerinin (RBCs) farklı türleri kullanarak olan en aza indirmek için yöntemleri açıklanmıştır. Tartışma avantajları ve dezavantajları sunulan deneyleri ve grip özgü antikor titreleri belirlenmesi aşı ile ilgili bağışıklık anlayış nasıl geliştirebiliriz vurgulamaktadır.
Introduction
Grip virüsü ile enfeksiyon önemli morbidite, mortalite ve yüksek sağlık maliyetleri1,2,3,4ile ilişkilidir. Özellikle, yaşlı, Yenidoğan, hamile kadınlar ve kronik hastalığı olan hastalarda daha ağır klinik sonuçlar için risk altındadır. Bu nedenle, aşı grip virüs suşları dolaşan karşı bu yüksek riskli nüfus hastalığında yükünü azaltmak için birincil ölçü birimi. Sonra aşı, örneğin, grip özgü antikorların koruyucu bir eşiğin bireysel bağışıklık yanıtının artış azaltır enfeksiyon ve genel olarak bireysel risk olasılığını bir nüfus içinde viral iletim 5. aşı indüklenen humoral bağışıklık yanıtı farklı nüfus ve çeşitli yaş grupları arasında detaylı bir anlayış önemli klinik soruları6,7,8 cevap için bir unsurdur , 9, aşağıdaki gibi: Neden bazı yaşlı hastalarda enfeksiyonlar önceki aşılama rağmen mi? Bir “iyi” ve “yeterli” aşı indüklenen koruması nedir? Ne sıklıkta bir aşı koruyucu titreleri ulaşmak için bir baskılanmış hastaya uygulanması gereken? En etkili doz nedir? Bir roman adjuvan sonrası aşılama antikor titreleri üzerinde etkisi nedir? Aşı özgü antikor üretimi ölçümü bu önemli sorulara cevap ve aşı sonuçları geliştirmek yardımcı olabilir.
Virüs özgü antikor titreleri miktar çeşitli immünolojik yöntemler ile yapılabilir. Bu katı fazlı10 veya boncuk tabanlı ELISA11 deneyleri, HI tahlil12ve nötralize deneyleri13içerir. ELISA tabanlı yöntemler serum numuneleri çeşitli antijenlere karşı nispeten büyük miktarda tarama olanak sağlar. Ayrıca, patojen özgü immünglobulin (Ig) M ve IgG ayrı olarak düzenlemelidir. Antijeni, örneğin, doğrusal amino asit dizisi veya virüs gibi parçacık özelliklerini bağlama antikorların etkileyebilir rağmen potansiyel epitopları yelpazesi çok geniş ve bilgi üzerinde olup olmadığını bir antikor sağlamaz Yanıt fonksiyonel ilgisi yok.
Buna ek olarak, nötralizasyon tahlil antikorlar enfeksiyon hücreleri işlevsel olarak inhibe potansiyeline belirler ve bu nedenle potansiyel nötralize yansıtır. Ancak, bu yöntem çok emek yoğun, belirli kültür satırları hücre ve virüs yaşayan ve bu nedenle, zaman alıcı, pahalı ve özel ekipman gerektirir gerektirir.
Grip özgü antikor titreleri ölçmek için HI Dünya Sağlık Örgütü WHO tabanlı protokol12 adım adım bu makalede anlatılmaktadır. Hemaglütinasyon eritrositler Aglutinasyon için önde gelen bazı virüsler karakteristik bir etkisidir. Bu etkiyi hasta sera ile inhibisyonu nötralize etkisi yansıtan inhibitör antikor konsantrasyonları, ölçüm sağlar.
İş akışını daha verimli kullanımı birden çok örneği aynı anda ve böylece azaltmak belgili tanımlık gerekli zaman izin vermek için WHO-protokol ve değişiklik yapmış. İlk protokolünü belirli grip antijen Aglutinasyon potansiyelinin belirlenmesi açıklar. Bunu yaparken, doğru grip antijen konsantrasyon için ikinci Protokolü belirlenir. Bu bölümü her yeni viral antijen ile yanı sıra her toplu kan yinelenmelidir.
İkinci Protokolü grip özgü antikor titreleri belirlenmesi açıklar. Sunulan iletişim kuralları ancak soruşturma grip virüsü ve insan serum numuneleri için optimize edilmiş, bu aynı zamanda fare serum numuneleri veya hücre kültürü supernatants için uyarılmış bağışıklık hücrelerinden, örneğin, virüs özgü B-hücreleri uygulanabilir. Sonuçları mutlak ölçülen titreleri belirlenebilir. Birçok aşı çalışmalarda, geometrik ortalama titreleri ve % 95 güven aralığı belirli her nüfus için gösterilir. Yorumu, seroprotection veya serokonversiyonu için sık sık bir popülasyona belirli virüs duyarlılık tanımlamak için kullanılır. Daha fazla 4-fold titresi seroprotective titreleri iki saat nokta (öncesi aşı ve 30 gün sonrası aşılama kullanılan özelliklerle) arasındaki başarı ile arttıkça Seroprotection ≥1:40 ve serokonversiyonu titresi tanımlanır.
Her iki iletişim kurallarını kullanmak çok kolay ve çok çeşitli araştırma soruları adapte edilebilir. Özellikle, onlar güvenilir ve hızlı bir şekilde belirlemek için kullanılabilir kapasiteli hemaglütinasyon, kızamık, polyomaviruses, kabakulak, kızamıkçık veya14,15,16 gibi çeşitli diğer virüslere karşı antikor titreleri .
Protocol
Representative Results
Discussion
Öncesi ve sonrası aşı grip virüsü spesifik antikor titreleri miktar aşı çalışmaları için gerekli önemli bir araçtır. Seroprotection gibi virüs bulaşmasına karşı koruma vekil tedbirlerinin temel (> 1:40) veya serokonversiyonu (4-fold titresi artış), aşı stratejileri-ebilmek var olmak en iyi duruma getirilmiş9. Sağlanan iletişim kurallarını kullanarak belirleyebilir: (i) hemaglütinasyon potansiyelini belli bir virüsün ve (ii) antikor titreleri ilgi bir virüs için.<…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
hiçbiri.
Materials
| 25 ml Disposable Multichannel Pipette Reservoirs | Integra | 4312 | |
| 8-well PCR tubes | Brand GMBH | 781332 | For serum aliquots |
| 96-well microtiter plate, U-shaped | TPP | 92097 | For HI assay when using mammalian RBCs |
| 96-well microtiter plate, V-shaped | Corning Costar | 3897 | For HI assay when using avian RBCs |
| Aqua ad iniect. Steril | Bichsel AG | 1000004 | For preparing influenza antigen and cholera filtrate solutions |
| Chicken RBC (10%) | Cedarlane | CLC8800 | 10% suspension of chicken red blood cells in Alsever's solution |
| Cholera filtrate | Sigma-Aldrich | C8772 | Used as receptor destroying enzyme (RDE) |
| Dulbecco's PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | For diluting the serum samples, RBCs and antigens |
| Eppendorf Multichannel pipette, 12-channel, 10-100 µl | Sigma-Aldrich | Z683949 | |
| Eppendorf Multichannel pipette, 8-channel, 10-100 µl | Sigma-Aldrich | Z683930 | |
| Guinea Pig RBC (10%) | Cedarlane | CLC1800 | 10% suspension of guinea pig red blood cells in Alsever's solution |
| Influenza Anti-A/California/7/09 HA serum | NIBSC | 14/134 | Used as positive control at the HI assay |
| Influenza Anti-A/Switzerland/9715293/2013-like HA serum | NIBSC | 14/272 | Used as positive control at the HI assay |
| Influenza Anti-A/Texas/50/2012-Like HA Serum | NIBSC | 13/178 | Used as positive control at the HI assay |
| Influenza Anti-B/Brisbane/60/2008-HA serum | NIBSC | 13/254 | Used as positive control at the HI assay |
| Influenza Anti-B/Massachusetts/02/2012 HA serum | NIBSC | 13/182 | Used as positive control at the HI assay |
| Influenza antigen A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181) | NIBSC | 12/168 | Inactivated, partially purified A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181) virus (ca. 46µgHA/ml) |
| Influenza antigen A/Switzerland/9715293/2013 (NIB88) | NIBSC | 14/254 | Inactivated, partially purified A/Switzerland/9715293/2013 (NIB88) virus (ca. 55µgHA/ml) |
| Influenza antigen A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) | NIBSC | 13/112 | Inactivated, partially purified A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) virus (ca. 74µgHA/ml) |
| Influenza antigen B/Brisbane/60/2008 | NIBSC | 13/234 | Inactivated, partially purified B/Brisbane/60/2008 virus (ca. 42µgHA/ml) |
| Influenza antigen B/Massachusetts/02/2012 | NIBSC | 13/134 | Inactivated, partially purified B/Massachusetts/02/2012 virus (ca. 35µgHA/ml) |
| Serum-Tubes | S-Monovette, Sardstedt | 01.1601.100 | For serum extraction with clotting activator |
| Single Donor Human RBC, Type 0 | Innovative Research | IPLA-WB3 | Suspension of single donor human red blood cells in Alsever's solution (ca. 26%) |
| Turkey RBC (10%) | Cedarlane | CLC1180 | 10% suspension of turkey red blood cells in Alsever's solution |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Gibco |
References
- . Prevention and control of seasonal influenza with vaccines. Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices–United States, 2013-2014. MMWR Recomm Rep. 62, 1-43 (2013).
- Dominguez-Cherit, G., et al. Critically Ill patients with 2009 influenza A(H1N1) in Mexico. JAMA. 302 (17), 1880-1887 (2009).
- Fox, B. D., et al. Pandemic influenza (H1N1): impact on lung transplant recipients and candidates. J Heart Lung Transplant. 29 (9), 1034-1038 (2010).
- Piercy, J., Miles, A., Krankheiten, S. B. f. G. S. V., Values, M. . The Economic Impact of Influenza in Switzerland: Interpandemic Situation. , (2003).
- Barclay, V. C., et al. Positive network assortativity of influenza vaccination at a high school: implications for outbreak risk and herd immunity. PLoS One. 9 (2), 87042 (2014).
- Baluch, A., et al. Randomized controlled trial of high-dose intradermal versus standard-dose intramuscular influenza vaccine in organ transplant recipients. Am J Transplant. 13 (4), 1026-1033 (2013).
- Haralambieva, I. H., et al. The Impact of Immunosenescence on Humoral Immune Response Variation after Influenza A/H1N1 Vaccination in Older Subjects. PLoS One. 10 (3), 0122282 (2015).
- Egli, A., et al. Vaccine adjuvants–understanding molecular mechanisms to improve vaccines. Swiss Med Wkly. 144, 13940 (2014).
- O’Shea, D., Widmer, L. A., Stelling, J., Egli, A. Changing face of vaccination in immunocompromised hosts. Curr Infect Dis Rep. 16 (9), 420 (2014).
- Meulemans, G., Carlier, M. C., Gonze, M., Petit, P. Comparison of hemagglutination-inhibition, agar gel precipitin, and enzyme-linked immunosorbent assay for measuring antibodies against influenza viruses in chickens. Avian Dis. 31 (3), 560-563 (1987).
- Martins, T. B. Development of internal controls for the Luminex instrument as part of a multiplex seven-analyte viral respiratory antibody profile. Clin Diagn Lab Immunol. 9 (1), 41-45 (2002).
- Webster, R., Cox, N., Stöhr, K. WHO Animal Influenza Manual. WHO/CDS/CSR/NCS. 2002.5, 1-99 (2002).
- Mittelholzer, C. M., et al. Human cell lines used in a micro neutralization test for measuring influenza-neutralizing antibodies. Scand J Immunol. 63 (4), 257-263 (2006).
- Hamilton, R. S., Gravell, M., Major, E. O. Comparison of antibody titers determined by hemagglutination inhibition and enzyme immunoassay for JC virus and BK virus. J Clin Microbiol. 38 (1), 105-109 (2000).
- Kumakura, S., et al. Comparison of hemagglutination inhibition assay and enzyme immunoassay for determination of mumps and rubella immune status in health care personnel. J Clin Lab Anal. 27 (5), 418-421 (2013).
- Ogundiji, O. T., Okonko, I. O., Adu, F. D. Determination of measles hemagglutination inhibiting antibody levels among school children in Ibadan, Nigeria. J Immunoassay Immunochem. 34 (2), 208-217 (2013).
- Cwach, K. T., Sandbulte, H. R., Klonoski, J. M., Huber, V. C. Contribution of murine innate serum inhibitors toward interference within influenza virus immune assay. Influenza Other Respir Viruses. 6 (2), 127-135 (2012).
- Lee, P. S., et al. Receptor mimicry by antibody F045-092 facilitates universal binding to the H3 subtype of influenza virus. Nat Commun. 5, 3614 (2014).
- Blumel, B., et al. Age-related prevalence of cross-reactive antibodies against influenza A(H3N2) variant virus, Germany, 2003 to 2010. Euro Surveill. 20 (32), 16-24 (2015).
- Reber, A. J., et al. Seasonal Influenza Vaccination of Children Induces Humoral and Cell-Mediated Immunity Beyond the Current Season: Cross-reactivity with Past and Future Strains. J Infect Dis. , (2016).
