形態とマウスの下顎頭軟骨細胞解析法
Summary
この原稿は、形態および齧歯動物の下顎内携帯電話の変更を分析するための方法を示します。
Abstract
顎の関節 (顎関節) は外部からの刺激に適応する能力と顆の位置だけでなく、下顎頭軟骨 (MCC) の構造および細胞のコンポーネントに影響を与えることができます変更を読み込んでいます。本稿では、これらの変更、マウス (すなわち、読み込んで圧縮の静的顎) の顎関節の荷重を変更するためのメソッドを分析するためのメソッドについて説明します。ここで示した構造の評価は Digimizer ソフトウェアを使用して、小さな骨のレントゲン写真で実行される単純な形態計測学的アプローチです。さらに、携帯の解析式コラーゲン、骨、細胞分裂の変化にリードを変更してクライアントにおけるプロテオグリカンの分布を説明しました。使用して肯定的な蛍光ピクセルを数えることでの組織学的セクションでこれらの変更の定量化画像ソフトウェアと測定距離マッピングとすすけるエリア Digimizer – でも実証されています。ここに示すメソッドは、マウスの顎関節に限定されないが、追加骨実験用小動物の軟骨内骨化の他の地域で使用できます。
Introduction
顎関節は顎顔面領域に位置するユニークな荷重関節で、線維軟骨の形成されます。顎関節の MCC が話すと、咀嚼しながら妨害されていない顎運動を含む関節の機能的な変性疾患、変形性関節症1を含む一般受けます。顎関節 MCC2,3,4、5のコンポーネントの構造および細胞の変更につながる外部刺激や負荷の変化に適応する能力があります。MCC の荷重特性は、水入り、コラーゲン ネットワークやプロテオグリカンが密集、成分間の相互作用によって説明できます。MCC はコラーゲンと非コラーゲン蛋白質の種類を表す 4 つの異なる細胞地帯: 1) 表在性または関節ゾーン;2) 増殖のゾーン、未分化間葉系細胞の構成要求の読み込みに対応します。3) prehypertrophic のゾーン、コラーゲン タイプ 2; を表現する成熟した軟骨細胞から成る・ 4)、肥大ゾーン、コラーゲンを表現する肥大軟骨細胞が死ぬ 10 を入力領域と石灰化を受けます。非鉱化地域は圧縮力6への抵抗を提供するプロテオグリカンが豊富です。
肥大軟骨軟骨から骨への転移が発生する MCC の継続的な鉱化作用がある7下顎頭の軟骨下骨の堅牢なミネラル構造を保証します。Unmineralized と鉱化地域の細胞の変化は、最終的に下顎頭および下顎骨の形態・構造の変化に します。クライアントのすべての携帯電話地域と軟骨部分の鉱化作用の恒常性の維持は、顎関節の健康、荷重容量性に不可欠です。
(前述の Utrejaらによって) 複数のコラーゲン トランスジェニック マウス モデル8は、すべての遺伝子は、MCC で表されるのでコラーゲン発現の変化を理解するを使用する素晴らしいツールです。詳細な病理組織学的評価、マトリックス析出、鉱化作用、細胞増殖、アポトーシス、MCC の異なる細胞層でのタンパク質発現を研究する組織学的汚れが使用されます。
この原稿、病理組織学的および形態計測学的解析はマウスの下顎の MCC と軟骨下骨の細胞および構造の変化を評価する使用されます。さらに、蛍光組織標本画像の分析や顕微鏡スライドをマッピングするためのように、セル定量化の方法を説明します。MCC と軟骨下骨9時細胞と形態学的変化が原因で、メソッドを読み込み、圧縮静的顎関節は、我々 の方法を検証するも示されています。
下顎頭および齧歯動物の下顎の組織変化と形態を決定するため、軟骨内骨化の他の地域とその他の硬組織の形態を分析したり、ここで説明する方法を使用できます。
Protocol
Representative Results
Discussion
この原稿は、形態計測およびマウス下顎頭および下顎骨の細胞分析のための方法を説明します。撮影形態計測は、実験用小動物から他の骨を分析する使用できます。また、細胞解析 (細胞の定量化と軟骨の距離マッピング) 齧歯動物の下顎に限定されないが多数の組織の組織学的セクションを定量化する使用ことができます。
蛍光レポーターを表現するトランスジェニッ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は、博士デビッド ・ ロウ提供いただきありがとうございます親切トランスジェニック マウスと李陳組織の援助をしたいと思います。
この出版物で報告された研究はだった国立歯科頭蓋顔面研究賞を受賞番号 K08DE025914 の下で健康の国民の協会 · スミット ・ ヤーダブに矯正基礎のアメリカ協会でサポートされています。
Materials
| MX20 Radiography System | Faxitron X-Ray LLC | ||
| Digimizer Image software | MedCalc Software | ||
| Shandon Cryomatrix embedding resin | Thermo Scientific | 6769006 | |
| Manual microscope Axio Imager Z1 | Carl Zeiss | 208562 | |
| yellow fluorescent protein filter – EYFP | Chroma Technology Corp | 49003 | |
| cyan fluorescent protein filter – ECFP | Chroma Technology Corp | 49001 | |
| red fluoresecent protein filter – Cy5 | Chroma Technology Corp | 49009 | |
| sodium acetate anhydrous | Sigma-Aldrich | S2889 | |
| sodium L-tartrate dibasic dihydrate | Sigma-Aldrich | 228729 | |
| sodium nitrite | Sigma-Aldrich | 237213 | |
| ELF97 substrate | Thermo Fisher Scientific | E6600 | |
| ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS kit | Life Technologies | C10339 | includes EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine) |
| DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) | Thermo Scientific | D1306 | |
| Sodium phosphate dibasic | Sigma-Aldrich | S3264 | |
| Sodium phosphate monobasic | Sigma-Aldrich | 71505 | |
| Toluidine Blue O | Sigma-Aldrich | T3260 | |
| Adobe Photoshop | Adobe Systems Incorporated | ||
| Phosphate buffered saline tablets (PBS) | Research Products International | P32080-100T | |
| CNA Beta III Nickel-Free Archwire | Ortho Organizers, Inc. | ||
| GraphPad Prism | GraphPad Software, Inc. |
Riferimenti
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