亚甲蓝染料注射液评价泌尿道结肠梗阻的缺陷
Summary
亚甲蓝染料注射入肾盂有助于评估尿路结肠梗阻的缺陷, 在小鼠胚胎泌尿道发育。在这里, 一个协议的亚甲蓝染料注射到肾盂是描述。
Abstract
尿路结肠梗阻是先天性异常, 诱发肾积水和 us。小鼠泌尿道结肠梗阻的缺陷可以通过跟踪在泌尿系统内的亚甲基蓝染料流动来评估。将亚甲蓝染料注入围产期胚胎肾脏的肾盂中, 在应用静水压后, 通过输尿管肾脏的肾盂和膀胱腔内的染料流进行监测。在正常围产期泌尿道的膀胱腔内, 染料堆积明显, 但在肾盂与输尿管异常的终点之间, 如果出现尿路梗阻, 则会受到限制。该方法可促进尿路结肠梗阻的确诊和肾积水和 us 的可视化。这份手稿描述了一个协议的亚甲蓝染料注射液进入肾盂, 确认泌尿道交界处的障碍。
Introduction
泌尿系统包括一对肾脏和输尿管和一个共同的膀胱和尿道。泌尿系统的主要功能是通过管理血液的水和电解质平衡来维持身体的稳态。肾脏过滤血液以控制电解质浓度和酸碱平衡, 并产生尿液排出过量的水和废物, 包括溶质和代谢物。然后, 尿液通过输尿管从肾脏的肾盂转移到 bladderin 的单向的方式, 它是储存和最终消除通过尿道1。
输尿管是来自肾导管的直管。在小鼠胚胎日 10.5 (E10.5) 的肾导管萌芽后, 输尿管柄拉长并分化成一种称为膀胱的多层结构, 在小鼠 E12.5 和 E16.5 之间是不透水的。输尿管柄周围的间充质细胞也被分为三层, 包括内基质细胞、中层粗平滑肌细胞和外外成纤维细胞。输尿管蠕动波起始于肾盂, 通过输尿管壁的平滑肌层传播至膀胱以传输尿液2,3, 它是在鼠标1中从 E16.5 开始生成的。
先天性异常的肾脏和泌尿道 (CAKUT) 是最常见的遗传性疾病, 目前在大约1% 的人类胎儿1,4, 并组成的各种表型包括肾积水和 us。肾脏和输尿管的尿液异常积累导致积水肾和 us 的形成。肾积水和/或 us 形成的一个原因是尿路梗阻。肾盂结肠梗阻 (UPJO) 是由于在近端输尿管和肾盂之间的堵塞造成的尿流异常, 导致肾积水和近端 us 狭窄与角度或持续折叠5, 6。此外, 远端输尿管的异位插入膀胱壁或生殖道称为输尿管结肠梗阻 (UVJO)。UVJO 还可诱发肾积水和 hydromegaureter 形成7,8。另外的输尿管结 (UVJ) 缺陷是膀胱回流 (VUR)。VUR 的特点是逆行尿流从膀胱向肾脏在 UVJ。与 UVJO 相比, 围产期胚胎与 VUR 不明显显示肿胀积水肾或严重 us 表型9。
在实验小鼠, 尿液流动可以通过注射染料, 如亚甲蓝, 进入肾盂9。injectedmethylene 蓝溶液将从肾盂经输尿管进入膀胱, 追踪尿液轨迹。肾积水可以通过在肾脏中的染料的膨胀来识别。UPJO 可被检测为堵塞的染料流在近端输尿管与肿胀肾盂5。经加宽的直径所示的输尿管的任何扩张都显示了 us 的一个例子。最后, 染料堆积在膀胱壁或在生殖道的站点表明 UVJO 与膨胀的积水肾脏和扩张的 hydromegaureter7,10。为了检测 VUR, 染料溶液注入膀胱, 随后的逆行流在肾脏的9中被监测。
在这里, 提出了一个协议的亚甲蓝染料注射到肾盂的围产期胚胎。这项协议允许追踪尿液从肾盂通过输尿管和进入膀胱, 并验证潜在的泌尿道交界处的障碍, 如 UPJO 或 UVJO。
Protocol
Representative Results
Discussion
老鼠肾脏是功能开始在 E16.5 和染料射入测试从理论上可能从这个时间点。然而, 肾脏太小, 不能被注射的染料溶液和表型, 如肾积水和 us 没有清楚地观察到, 因为这些表型是由于尿液转运异常而产生的二次作用。这些表型, 从障碍, 如 UPJO 或 UVJO, 是明显的 E18.5 肿胀肾脏和输尿管。E19.5 或新生幼崽的胚胎肾脏比 E18.5 或更年轻的胚胎更容易操作。然而, 有双侧尿路阻塞的幼崽在出生后死亡。因此, 根据?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我感谢 Dr. 艾伦· o. Perantoni (CDBL/国立卫生研究院/NIH) 支持这份手稿的提交。我还要感谢 Dr. 迈克尔霍尔 (CDBL/国立卫生研究院/nih) 和尼玛拉夏尔马 (CDBL/国立卫生研究院/nih) 编辑这篇手稿。我很感谢赖昌星 (SAIC) 的出色的鼠标饲养。这项工作得到了国立卫生研究院、国家癌症研究所和癌症研究中心的支持。
Materials
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. NORMAL SALINE – 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip | BD | 309657 | |
| Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane | Pall corporation | 4614 | |
| Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Delicate Operating Scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| Micro Dissecting Forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5135 | |
| Dumont Tweezers; Pattern #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
Riferimenti
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