Évaluation des voies urinaires Junction Obstruction défauts par Injection de colorant de bleu de méthylène
Summary
Injection de colorant de bleu de méthylène dans le bassinet facilite l’évaluation des voies urinaires junction obstruction défauts au cours du développement embryonnaire des voies urinaires chez la souris. Ici, un protocole pour l’injection de colorant de bleu de méthylène dans le bassinet est décrite.
Abstract
Défauts d’obstruction des voies urinaires junction sont des anomalies congénitales induisant une hydronéphrose et hydroureter. Murine urinaires junction obstruction défauts peuvent être évaluées grâce au suivi des flux de colorant de bleu de méthylène au sein du système urinaire. Colorant de bleu de méthylène est injecté dans le bassinet des reins embryonnaires périnatales et flux de colorant est contrôlée depuis le bassinet du rein par le biais de l’uretère et dans la lumière de la vessie après l’application de la pression hydrostatique. Accumulation de colorant se manifesteront dans la lumière de la vessie du tractus urinaire normal périnatale, mais sera limitée entre le bassinet et le point final d’un uretère anormale, obstruction des voies urinaires en cas. Cette méthode facilite la confirmation des obstructions de jonction des voies urinaires et la visualisation de l’hydronéphrose et hydroureter. Ce manuscrit décrit un protocole pour l’injection de colorant de bleu de méthylène dans le bassinet pour confirmer les obstructions de jonction des voies urinaires.
Introduction
Le système urinaire se compose d’une paire de reins et uretères et une commune la vessie et l’urètre. La fonction principale du système urinaire est de maintenir l’homéostasie de l’organisme de gestion de l’équilibre de l’eau et d’électrolytes du sang. Les reins filtrent le sang pour contrôle électrolyte concentrations et équilibre acido-basique et produisent de l’urine pour excréter les excès d’eau et des déchets, y compris des solutés et métabolites. Urine est ensuite transporté par le biais de l’uretère du bassinet du rein à la bladderin de manière unidirectionnelle, où elle est stockée et finalement éliminé par l’ urètre1.
Les uretères sont des tubes droits provenant de la gaine de réserves. Après bourgeonnement de la gaine de réserves à jour embryonnaire 10,5 (E10.5) chez la souris, la tige de l’uretère s’allonge et différencie en une structure multicouche appelée urothélium imperméable entre souris E12.5 et E16.5. Les cellules mésenchymateuses entourant la tige de l’uretère sont aussi différenciés en trois couches, consistant en des cellules stromales internes, fibres musculaires lisses intermédiaires épais et fibroblastes adventitiels externes. Les ondes péristaltiques urétérales initier dans le bassinet sont propagées à travers la couche de muscles lisses de la paroi de l’uretère jusqu’à la vessie pour transporter l’urine2,3, qui est produit à partir de E16.5 dans la souris1.
Anomalies congénitales du rein et des voies urinaires (CAKUT) sont parmi les maladies génétiques les plus fréquentes, présentes chez environ 1 % des foetus humains1,4et composé d’une variété des phénotypes y compris hydronéphrose et hydroureter. L’accumulation anormale de l’urine dans le rein et l’uretère conduit à la formation de rein et hydroureter hydronephrotic. Une cause de formation de l’hydronéphrose ou hydroureter est une obstruction des voies urinaires. Obstruction de jonction Ureteropelvic (UPJO) est causée par l’écoulement de l’urine anormale causée par un blocage entre l’uretère proximal et le bassinet, entraînant une hydronéphrose et hydroureter proximal rétrécissement avec angulation ou persistants pliant5, 6. En outre, l’insertion ectopique de l’uretère distal dans la paroi de la vessie ou de l’appareil génital est appelée obstruction de jonction ureterovesical (UVJO). UVJO peut également induire une hydronéphrose et hydromegaureter formation7,8. Un défaut de jonction (UVJ) ureterovesical supplémentaires est reflux vésicourétérique (RVU). VUR se caractérise par l’écoulement de l’urine rétrograde de la vessie vers le rein à UVJ. Par rapport à UVJO, embryons périnatales avec VUR ne distinctement montrent un rein hydronephrotic distendu ou de phénotype sévère hydroureter9.
Chez la souris de laboratoire, écoulement de l’urine peut être examiné par l’injection d’un colorant, comme le bleu de méthylène, dans le bassinet9. La solution de bleu d’injectedmethylene retracera le trajet de l’urine du bassinet par le biais de l’uretère et la vessie. Hydronéphrose se distingue par une expansion du colorant dans le rein. UPJO peut être détecté comme un blocage de l’écoulement de la teinture à l’uretère proximal avec bassinet dilaté5. Toute dilatation de l’uretère par un diamètre élargi montre un exemple de hydroureter. Enfin, accumulation de colorant à la paroi de la vessie ou sur le site de l’appareil génital indique UVJO rein hydronephrotic distendu et dilatées hydromegaureter7,10. Pour détecter les VUR, la solution de colorant est injectée dans la vessie et flux rétrograde subséquente est contrôlée dans le rein9.
Ici, un protocole pour l’injection de colorant de bleu de méthylène dans le bassinet d’un embryon de périnatale est présenté. Ce protocole permet le suivi du flux d’urine le bassinet par le biais de l’uretère et la vessie et vérifie les potentiels obstacles de jonction des voies urinaires tels que UPJO ou UVJO.
Protocol
Representative Results
Discussion
Les reins de souris sont fonctionnelles en commençant à E16.5 et un test d’injection de colorant est théoriquement possible à partir de ce point dans le temps. Toutefois, le rein est trop petit pour être injectés avec la solution de colorant et phénotypes comme hydronéphrose et hydroureter ne sont pas clairement respectées puisque ces phénotypes sont un effet secondaire de l’urine accumulée dues au transport de l’urine anormale. Ces phénotypes, des obstructions telles que UPJO ou UVJO, sont visibles à …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Je remercie le Dr Alan O. Perantoni (CDBL/NCI/NIH) pour appuyer la présentation de ce manuscrit. Je remercie également m. Michael Hall (CDBL/NCI/NIH) et Nirmala Sharma (CDBL/NCI/NIH) pour l’édition de ce manuscrit. Je suis reconnaissant à Lai Thang (SAIC) pour son élevage de souris excellent. Ce travail a été soutenu par les National Institutes of Health, National Cancer Institute et le centre de recherche sur le Cancer.
Materials
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. NORMAL SALINE – 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip | BD | 309657 | |
| Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane | Pall corporation | 4614 | |
| Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Delicate Operating Scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| Micro Dissecting Forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5135 | |
| Dumont Tweezers; Pattern #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
Riferimenti
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