Valutazione difetti di ostruzione delle vie urinarie Junction iniettando colorante blu di metilene
Summary
Iniezione della tintura del blu di metilene nella pelvi renale facilita la valutazione dei difetti di ostruzione delle vie urinarie giunzione durante lo sviluppo embrionale dell’apparato urinario del mouse. Qui, un protocollo per l’iniezione della tintura del blu di metilene nella pelvi renale è descritto.
Abstract
Difetti di ostruzione delle vie urinarie giunzione sono anomalie congenite inducendo idronefrosi e hydroureter. Difetti di ostruzione giunzione murino delle vie urinarie possono essere valutati da monitorando il flusso di colorante blu di metilene all’interno del sistema urinario. Blu di metilene colorante viene iniettato nella pelvi renale dei reni embrionali perinatale e flusso di tintura è monitorato dalla pelvi renale del rene attraverso l’uretere e nel lume della vescica dopo l’applicazione di pressione idrostatica. Accumulo di colorante sarà evidente nel lume della vescica dell’apparato urinario perinatale normale, ma sarà vincolata tra pelvi renale e il punto finale di un uretere anormale, in caso di ostruzioni delle vie urinarie. Questo metodo facilita la conferma delle ostruzioni di giunzione delle vie urinarie e visualizzazione di idronefrosi e hydroureter. Questo manoscritto descrive un protocollo per l’iniezione della tintura del blu di metilene nella pelvi renale per confermare ostruzioni di giunzione delle vie urinarie.
Introduction
Il sistema urinario è costituito da una coppia di reni e ureteri e un comune della vescica e dell’uretra. La funzione principale del sistema urinario è di mantenere l’omeostasi corporea gestendo l’equilibrio di acqua ed elettroliti del sangue. I reni filtrano il sangue per controllo di concentrazione di elettroliti e l’equilibrio acido-base e producono urina per espellere l’acqua in eccesso e rifiuti tra cui soluti e metaboliti. Urina viene quindi trasportato attraverso l’uretere dalla pelvi renale del rene per la bladderin un modo unidirezionale dove viene immagazzinata e infine eliminata attraverso l’ uretra1.
Gli ureteri sono tubi dritti che proviene dal dotto nephric. Dopo in erba dal dotto nephric al giorno embrionale 10.5 (e 10.5) nel topo, il gambo di uretere si allunga e differenzia in una struttura multistrata denominata urothelium che è impermeabile tra mouse 12.5 ed E16.5. Le cellule mesenchimali che circondano il gambo dell’uretere sono anche differenziate in tre strati composto da cellule stromali interne, cellule di muscolo liscio spessore intermedio e fibroblasti adventitial esterni. Le onde peristaltiche ureterale avvio nella pelvi renale vengono propagate attraverso lo strato di muscolo liscio della parete dell’uretere alla vescica per il trasporto di urine2,3, che è prodotto a partire da E16.5 in mouse1.
Anomalie congenite del rene e delle vie urinarie (CAKUT) sono tra le più frequenti malattie genetiche, presente in circa 1% dei feti umani1,4e composto di una varietà di fenotipi compreso idronefrosi e hydroureter. L’abnorme accumulo di urina nel rene e uretere provoca hydronephrotic del rene e hydroureter formazione. Una causa di formazione di idronefrosi e/o hydroureter è un’ostruzione delle vie urinarie. Ureteropelvic della giunzione (UPJO) è causato dal flusso di urina aberrante a causa di un blocco tra l’uretere prossimale e la pelvi renale, con conseguente idronefrosi e prossimale hydroureter restringimento con angolazione o persistente pieghevole5, 6. Inoltre, l’inserimento ectopica dell’uretere distale nella parete della vescica o del tratto riproduttivo viene chiamato ostruzione giunzione ureterovesical (UVJO). UVJO può anche indurre l’idronefrosi e hydromegaureter formazione7,8. Un difetto di giunzione (UVJ) ulteriori ureterovesical è reflusso vesicoureteric (RVU). VUR è caratterizzata da flusso retrogrado dell’urina dalla vescica verso il rene presso UVJ. Rispetto al UVJO, perinatali embrioni con VUR non distintamente mostrano un rene hydronephrotic dilatato o grave hydroureter fenotipo9.
Nel topo di laboratorio, il flusso di urina può essere esaminato tramite l’iniezione di un colorante, come il blu di metilene, nel bacino renale9. La soluzione di injectedmethylene blu si traccia la traiettoria di urina dalla pelvi renale attraverso l’uretere e la vescica. Idronefrosi possono essere riconosciuto da un’espansione del colorante nel rene. UPJO può essere rilevato come un blocco del flusso di tintura all’uretere prossimale con pelvi renale dilatata5. Qualsiasi dilatazione dell’uretere indicato da un diametro allargato di seguito viene illustrato un esempio di hydroureter. Infine, accumulo di colorante alla parete della vescica o presso il sito del tratto riproduttivo indica UVJO con rene hydronephrotic dilatato e dilatato hydromegaureter7,10. Per rilevare VUR, la soluzione colorante viene iniettata nella vescica e conseguente flusso retrogrado è monitorato nel rene9.
Qui, un protocollo per l’iniezione di colorante blu di metilene nella pelvi renale di un embrione perinatale è presentato. Questo protocollo permette l’analisi del flusso di urina dalla pelvi renale attraverso l’uretere e la vescica e verifica potenziali ostacoli di giunzione delle vie urinarie come UPJO o UVJO.
Protocol
Representative Results
Discussion
I reni mouse sono inizio funzionale alle E16.5 e una prova di iniezione della tintura è teoricamente possibile da questo punto di tempo. Tuttavia, il rene è troppo piccolo per essere iniettato con la soluzione colorante e fenotipi quali idronefrosi e hydroureter non si osservano chiaramente dal momento che questi fenotipi sono un effetto secondario di urina accumulato a causa del trasporto delle urine anormali. Questi fenotipi, da ostruzioni quali UPJO o UVJO, sono evidenti alle E18.5 di dilatato reni e ureteri. Reni p…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ringrazio il dottor Alan O. Perantoni (NIH/NCI/CDBL) per sostenere la presentazione di questo manoscritto. Ringrazio anche il Dr. Michael Hall (NIH/NCI/CDBL) e Nirmala Sharma (NIH/NCI/CDBL) per la modifica di questo manoscritto. Sono grato a Lai Thang (SAIC) per il suo allevamento eccellente mouse. Questo lavoro è stato sostenuto dagli istituti nazionali di salute, National Cancer Institute e centro per la ricerca sul cancro.
Materials
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. NORMAL SALINE – 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip | BD | 309657 | |
| Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane | Pall corporation | 4614 | |
| Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Delicate Operating Scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| Micro Dissecting Forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5135 | |
| Dumont Tweezers; Pattern #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
Riferimenti
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