Descrevemos uma plataforma baseada em chip para o cultivo tridimensional de células em micro-biorreatores. Um chip pode abrigar até 10 milhões. células que podem ser cultivadas sob condições estritamente definidas em relação ao fluxo de fluidos, etc tensão de oxigênio em um circuito de circulação estéril, fechado.
Nós desenvolvemos um chip baseado em sistema de cultura de células para o cultivo tridimensional de células. O chip é normalmente fabricados a partir de polímeros não-biodegradáveis, por exemplo, policarbonato ou polimetilmetacrilato por moldagem por injeção micro, estampagem a quente micro ou micro termoformagem. Mas, ele também pode ser fabricado a partir de polímeros bio-degradáveis. Suas dimensões são 0,7 1 x 20 x 20 x 0,7 1 mm (AxLxP). As principais características dos chips usados são ou uma grade de até 1.156 cúbicos micro-recipientes (cf-chip) cada um do tamanho de 120-300 x 300 x 300 μ (AxLxP) ou recessos redonda com diâmetro de 300 μ e uma profundidade de 300 μ (r-chip). O andaime pode abrigar 10 milhões. células em uma configuração tridimensional. Para um nutriente ideal e fornecimento de gás, o chip é inserido em uma carcaça biorreator. O biorreator é parte de um circuito fechado de circulação estéril que, na configuração mais simples, é adicionalmente constituído por uma bomba de roletes e um reservatório com uma média de fornecimento de gás. O biorreator pode ser executado em perfusão, superfusão, ou mesmo um modo de operação mista. Temos cultivou com sucesso linhagens de células, bem como células primárias ao longo de períodos de várias semanas. Para as células do fígado de ratos primária que poderia mostrar uma preservação das funções organotípicas por mais de duas semanas. Para as linhas de células de carcinoma hepatocelular pudéssemos mostrar a indução de genes específica do fígado ou não apenas um pouco expressa em cultura em monocamada padrão. O sistema também pode ser útil como um sistema de cultivo de células-tronco desde experimentos primeira diferenciação com linhas de células-tronco foram promissores.
Nós desenvolvemos uma plataforma baseada em chip para o cultivo tridimensional de células em biorreatores ativamente perfundidos micro. Os chips podem ser fabricados a partir de não-biodegradáveis, bem como polímeros biodegradáveis por moldagem por injeção micro, estampagem a quente e micro técnicas de termoformagem 3. Dependendo do projeto experimental, a superfície do polímero pode ser modificado por irradiação UV-4. Linhagens de células de hepatócitos, bem como hepatócitos primários de rato po…
The authors have nothing to disclose.
Gostaríamos de agradecer Mechthild Herschbach e Anke Dech de assistência técnica excelente.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Cells | Altro | ATCC | HB-8065 | |
Collagen I from rat tail | Reagent | Roche Diagnostics | 11 179 179 001 | |
PARIS kit | Reagent | Ambion Inc. | AM1921 | |
Syto16 | Reagent | Invitrogen | S7578 | |
anti cytokeratin 18 | Antibody | Abcam plc | ab668 | Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/100 in PBS |
Anti E-cadherin | Antibody | Abcam plc | ab1416 | Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/50 in PBS. |
Goat anti-albumin | Reagent | Bethyl Laboratories | E80-129 | Primary Ab, goat anti-human Albumin, used 1/200 in PBS |
Rabbit anti-mouse IgG1 | Antibody | Invitrogen | A11059 | Secondary Ab, Alexa Flour 488 conjugated, used 1/100 in PBS + 0.5 % BSA |
Cy3 anti-goat IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Lab | 705-165-003 | Cy3 AffiniPure donkey a-goat IgG Ab, used 1/700 in PBS + 0.5% BSA |