성장과 재생산 꼬마 선 충 의 화학 물질의 효과 측정

Summary

모델 동물, 꼬마 선 충, 화학 물질의 독성을 평가 하는 기본 프로토콜을 설명 합니다. 방법은 편리 하 고 다양 한 환경 오염 물질의 위험 평가 관해서는 뿐만 아니라 의약품의 개발에 유용 합니다.

Abstract

독물학 평가 기초 및 응용 생명과학 분야에서 살아있는 유기 체에 화학 물질의 효과 이해 결정적 이다. 라운드 비 포유류 땅 벌레, 꼬마 선 충, 독성 연구 편의 및 동물 윤리 문제 포유류 동물 시스템과 비교의 부족에 대 한 귀중 한 모델 생물 이다. 이 프로토콜에서 C. 선 충 에서 화학 물질의 독성 평가의 상세한 절차를 설명 합니다. 임상 항 암 약물, etoposide 인간의 topoisomerase II를 대상으로 하 고 인간 암 세포의 DNA 복제를 억제, 화학 테스트 모델로 선정 됐다. 나이-동기화 C. 선 충 알 디 메 틸 sulfoxide (DMSO) 또는 etoposide에 노출 됐다 고 다음 C. 선 충 의 성장 스테레오 현미경 관찰에 의해 4 일 동안 매일 모니터링 했습니다. C. 선 충 DMSO로 치료에서 계란의 총 수 고 또는 etoposide 또한 스테레오 현미경을 사용 하 여 계산 되었다. Etoposide 치료 성장과 C. 선 충의 번 식에 크게 영향을 받습니다. 비교 하 여 화학 물질의 다른 치료 기간을 가진 벌레에서 누워 계란의 총 수의 그것 수 있습니다 결정 C. 선 충 재생산에 화학 물질의 생식 독성은 가역 또는 돌이킬 수 없는. 이러한 프로토콜 모두는 다양 한 약물의 개발과 환경 유독의 위험 평가 대 한 도움이 될 수 있습니다.

Introduction

독성 평가의 영양 보충 식품, 약품과 cosmeceuticals, 개발 뿐만 아니라 다양 한 환경 독 소의 위험 평가 대 한 필수적입니다. 설치류 모델은 시스템 중 하나는 가장 인기 있는 vivo에서 실험이 독성 연구; 또는, C. 선 충 등 비 포유류 유기 체는 또한 널리 이용 된다. 비 포유류 독성 평가 모델 동물 윤리 문제 뿐만 아니라 그들의 편의 비용 효율성, 관리 용이성, 속도, 및 재현성^{1,2 고려 하는 유용성 때문에 도움이 됩니다. ,,34}.

C. 선 충, 토양에서 다양 한 기초 및 응용 생물학 및 화학 연구 모델 동물로 악용 되어 웜, 라운드. 그것은 긴 1 m m, 투명 한 선 충 류는 단순히에 고체 또는 액체 선 충 류 성장 미디어 (NGM) 세균성 긴장 대장균 OP50 먹이 유지. C. 선 충 은 짧은 라이프 사이클, 그리고 야생-타입 N2 C. 선 충 약 300 알을 낳는. 따라서, 그것은 쉽게 실험 자료^3,,45로 사용 될 전파 됩니다. C. 선 충 또한 널리 많은 약물과 환경 오염 물질^6,7,,89의 독물학 연구에 사용 되었습니다.

빠르게 분열 하는 암 세포를 대상으로 많은 항 암 약 하기 때문에 그들은 또한 급속 하 게 나누어 골, 장 상피 세포, 머리카락 세포 등 정상 세포 손상 수 있습니다. 예를 들어 topoisomerase 억제 항 암 제 약물 표적 암 세포;의 DNA 복제 과정 따라서, 그들은 또한 빠르게 정상 세포 분열 억제. 모든 살아있는 유기 체는 topoisomerases, 그리고 이러한 topoisomerase 억제제 대부분 영향 환경 생태계^6,,1011. 따라서, 약물 독성 평가 플랫폼 모델 동물을 사용 하 여 의약품 개발 환경 위험 평가 모두에 대 한 가치가 있다.

이 문서에서는, 우리 모델 C. 선 충에 독성 화학 제품으로 그 대상 topoisomerase II, 임상 항 암 에이전트 etoposide의 독성을 테스트 하는 자세한 프로토콜을 설명 합니다. 이 위해 몸 크기와 선 충 C. etoposide 치료에 누워 계란의 총 수의 측정 방법을 설명 합니다.

Protocol

참고: 전체 실험 20 ° c 낮은 먼지와 벌레와 세균 처리 하는 동안 오염 최소화 유지 깨끗 한 격리 된 실험실에서 수행 해야 합니다. 이 위해 실험 깨끗 한 벤치를 사용 하 여 알코올 램프의 불꽃에서 수행 해야 합니다. 1. C. 선 충 및 화학 시험에 대 한 계란 준비 유지 보수 유지 선 충 C. N2 (브리스톨 그리고 var) 품고 NGM 한 접시에 20 ° C에서 대장균 OP50 …

Representative Results

Etoposide (h 24-96)의 치료는 크게 C. 선 충의 성장을 지체. 외피의 96 h 후 웜 etoposide 취급 차량 취급 웜 1.04 m m (그림 1) 성장 하는 동안 몸 길이 0.86 m m 성장 했다. 성장 지체도 분명히 스테레오 현미경 관찰 (그림 2)에서 관찰 되었다. 우리 보육의 72 h에 차량 처리 벌레에서 계란을 보고 시작. 다른 한편으로, 계란 96 h etoposide 치료…

Discussion

이 문서에서는, 우리는 C. 선 충, 토양 선 충 류, toxicant 사례로 etoposide를 사용 하 여 화학 물질의 독성 평가 설명 합니다. 이 두 실험 조건 사용 했습니다. 첫 번째 세트에서 C. 선 충 etoposide 젊은 성인 단계에서 계란 접시 포함 하에 성장 했다 하 고 벌레 화학 물질 없이 정상적인 NGM 접시에 알 수 있었습니다. 두 번째 실험 세트에서 C. 선 충 전체 실험 기간 내내 etoposide와 지속적으…

Materials

Agar	Affymetrix, USA	10906
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Cholesterol	Sigma, USA	C3045
Dimethyl sulfoxide	Sigma, USA	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Etoposide	Sigma, USA	E1383
Image J software (ver 1.4)	Natinoal Institute of Health, USA		https://imagej.nih.gov/ij/
Microscope camera	Jenopitk, Progress Gryphax, Germany
Peptone	Merck, USA	107213
35 × 10 mm Petri dish	SPL Life Sciences, South Korea	10035
90 × 15 mm Petri dish	SPL Life Sciences, South Korea	10090
Stereo microscope	Nikon, Japan	SMZ800N
Yeast extract	Becton Dickinson, USA	212750