Roman Photoacoustic mikroskopi og optisk kohærens tomografi Dual-modalitet Chorioretinal Imaging i levende kanin øjne
Summary
Dette manuskript beskriver det nye setup og betjening af en photoacoustic mikroskopi og optisk kohærens tomografi dual-modalitet system for noninvasive, etiket-fri chorioretinal billeddannelse af større dyr som kaniner.
Abstract
Photoacoustic okulær imaging er en spirende oftalmologiske imaging-teknologi, der kan noninvasively visualisere øjenvæv ved at konvertere lysenergi til lydbølger og er i øjeblikket under intensiv efterforskning. Men de fleste rapporterede hidtidige arbejde er fokuseret på billeddannelse af bageste segment af øjnene af små dyr, som rotter og mus, som udgør en udfordring for kliniske menneskelig oversættelse på grund af små øjeæblet størrelser. Dette manuskript beskriver en roman photoacoustic mikroskopi (PAM) og optisk kohærens tomografi (OCT) dual-modalitet system for bageste segment billeddannelse af øjnene af større dyr som kaniner. Systemkonfiguration, system justering, animalsk forberedelse og dual-modalitet eksperimentelle protokoller for in vivo, noninvasive, etiket-fri chorioretinal imaging i kaniner er detaljerede. Effektiviteten af metoden, der er påvist gennem repræsentative eksperimentelle resultater, herunder retinal og choroidal Vaskulaturen fremstillet ved PAM og OCT. Håndskriftet indeholder en praktisk vejledning til at gengive de imaging resultater i kaniner og fremme photoacoustic okulær imaging i større dyr.
Introduction
De seneste årtier har været vidne til den eksplosive udvikling af inden for biomedicinsk photoacoustic billeddannelse1,2,3,4,5,6,7 ,8. Baseret på energi konverteringen af lys til lyd, den nye photoacoustic imaging kan visualisere biologiske prøver på skalaer fra organeller, celler, væv, organer til små dyr hele kroppen og kan afsløre sin anatomiske, funktionelle, molekylære, genetiske, og metaboliske oplysninger1,2,9,10,11,12. Photoacoustic imaging har fundet unikke applikationer i en række biomedicinsk områder, såsom celle biologi13,14, vaskulære biologi15,16, neurologi17,18 , onkologi19,20,21,22, dermatologi23, farmakologi24og hæmatologi25,26. Dens anvendelse i oftalmologi, dvs photoacoustic okulær imaging, har tiltrukket betydelig interesse fra både forskere og klinikere og er i øjeblikket under aktiv efterforskning.
I modsætning til anvendes rutinemæssigt okulær tænkelig teknologier27, såsom fluorescein angiografi (FA) og indocyanine grønne angiografi (ICGA) (baseret på fluorescens kontrast), optisk kohærens tomografi (OCT) (baseret på optiske spredning kontrast) , og dens afledte OCT angiografi (baseret på bevægelse kontrast af røde blodlegemer), photoacoustic okulær imaging bruger optisk absorption som kontrast mekanisme. Dette adskiller sig fra konventionelle okulær billeddannelsesteknologier og giver et unikt værktøj til at studere optisk absorption egenskaber i øjet, hvilket som regel er forbundet med den patofysiologiske status af øjenvæv28. Til dato har betydelige er fremragende arbejde blevet gjort i photoacoustic okulær imaging29,30,31,32,33,34,35, 36,37, men disse undersøgelser fokuserer på det bageste segment af øjnene af små dyr, som rotter og mus. De banebrydende studier godt demonstrere mulighederne for photoacoustic billeddannelse i oftalmologi, men der er stadig lang vej at gå mod kliniske oversættelse af teknologi siden øjeæblet størrelser af rotter og mus er meget mindre (mindre end en tredjedel) end af mennesker. På grund af udbredelsen af ultralyd bølger over et væsentligt længere afstande lider signalet intensitet og billedkvalitet høj grad når teknikken bruges til billeddannelse den bageste segment af større øjne.
Mod dette mål, vi for nylig rapporteret noninvasive, etiket-fri chorioretinal imaging i levende kaniner ved hjælp af integreret photoacoustic mikroskopi (PAM) og spektral-domæne OCT (SD-OCT)38. Systemet har fremragende ydeevne og kunne visualisere nethinden og årehinden i øjnene af større dyr baseret på endogene absorption og spredning kontrast af øjenvæv. Foreløbige resultater i kaniner viser at PAM noninvasively kunne skelne enkelte retinal og choroidal blodkar ved hjælp af en laser eksponering dosis (~ 80 nJ) betydeligt under den amerikanske nationale standarder Institute (ANSI) sikkerhed grænse (160 nJ) på 570 nm39; og OLT kunne klart løse forskellige retinal lag, årehinden og sclera. Det er den første demonstration af bageste segment billeddannelse af større dyr ved hjælp af PAM og kan være et stort skridt mod kliniske oversættelse af den teknologi, der overvejer at øjeæblet størrelsen af kaniner (18,1 mm)40 er næsten 80% af aksial længde mennesker (23,9 mm).
I dette arbejde, vi leverer en detaljeret beskrivelse af dual-modalitet billedbehandlingssystem og eksperimenterende protokoller bruges til noninvasive, etiket-fri chorioretinal imaging i levende kaniner og demonstrere ordning arbejdsindsats gennem repræsentative retinal og choroidal imaging resultater.
Protocol
Representative Results
Discussion
En intakt og regelmæssig tårefilmen er afgørende for høj kvalitet fundus billeder. En uregelmæssig og forringet tåre film kan betydeligt nedbrydes billed kvalitet42. For at bevare integriteten af tårefilmen og forhindre hornhinde overfladiske punktformet keratopati, er det kritisk at smøre hornhinden ved hjælp af øjenskyller meget ofte, ca hver to min. Hvis der er nogen bekymringer vedrørende opaciteten af øjet, bruge en spaltelampe og fluorescein strips for at kontrollere hornhinden b…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dette arbejde blev støttet af den generøse støtte fra National Eye Institute-4K12EY022299 (YMP), kampen for Sight-International Retinal Research Foundation FFS GIA16002 (YMP), ubegrænset afdelings støtte fra forskning til at forebygge blindhed, og den University of Michigan Institut for oftalmologi og Visual Sciences. Dette arbejde udnyttes Core Center for Vision forskning finansieret af P30 EY007003 fra National Eye Institute.
Materials
| Dual-modality imaging system | |||
| OPO laser | Ekspla (Vilnius, Lithuania) | NT-242 | |
| Beam attenuator | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | AHWP10M-600 | |
| Motorized rotation stage | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | PRM1/MZ8 | |
| Motorized rotation stage controller | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | TDC001 | |
| Focusing lens | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | AC254-250-B | |
| Pinhole | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | P50S | |
| Collimating lens | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | AC127-030-B | |
| Photodiode | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | PDA36A | |
| Laser shutter | Vincent Associates Inc. (Toronto, Canada) | LS6S2T0 | |
| Laser shutter driver | Vincent Associates Inc. (Toronto, Canada) | VCM-D1 | |
| Dichroic mirror | Semrock, Inc. (Rochester, NY, USA) | Di03-R785-t3-25×36 | |
| Scan lens | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | OCT-LK3-BB | |
| Ophthalmic lens | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | AC080-010-B-ML | |
| Ultrasonic transducer | Optosonic Inc. (Arcadia, CA, USA) | Custom | |
| Amplifier | L3 Narda-MITEQ (Hauppauge, NY, USA) | AU-1647 | |
| Band-pass filter | Mini-Circuits (Brooklyn, NY, USA) | BLP-30+ | |
| Digitizer | DynamicSignals LLC (Lockport, IL, USA) | PX1500-4 | |
| Synchronization electronics | National Instruments Corporation (Austin, TX, USA) | USB-6353 | |
| OCT module | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | Ganymede-II-HR | |
| Dispersion compensation glass | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | LSM03DC | |
| Illumination LED light | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | MCWHF2 | |
| Power meter | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | S121C | |
| Power meter interface | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | PM100USB | |
| Height measurement tool | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | BHM1 | |
| Fundus camera | Topcon Corporation (Tokyo, Japan) | TRC 50EX | |
| Matlab | MathWorks (Natick, MA, USA) | 2017a | |
| Oscilloscope | Teledyne LeCroy (Chestnut Ridge, NY, USA) | WaveJet 354T | |
| Animal experiment | |||
| Water-circulating blanket | Stryker Corporation (Kalamazoo, MI, USA) | TP-700 | |
| Ketamine hydrochloride injection | Par pharmaceutical, Inc. (Woodcliff Lake, NJ, USA) | NDC code 42023-115-10 | |
| Xylazine hydrochloride | VetOne (Boise, ID, USA) | NDC code 13985-704-10 | |
| Tropicamide ophthalmic | Akorn Pharmaceuticals Inc. (Lake Forest, IL, USA) | NDC code 17478-102-12 | |
| Phenylephrine hydrochloride ophthalmic | Paragon BioTeck, Inc. (Portland, OR, USA) | NDC code 42702-102-15 | |
| Eye lubricant | Hub Pharmaceuticals LLC (Rancho Cucamonga, CA, USA) | NDC code 17238-610-15 | |
| Eyewash | Altaire Pharmaceuticals, Inc. (Aquebogue, NY, USA) | NDC code 59390-175-18 | |
| Tetracaine hydrochloride ophthalmic solution | Bausch & Lomb, Inc. (Rochester, NY, USA) | NDC code 24208-920-64 | |
| Flurbiprofen sodium ophthalmic solution | Bausch & Lomb, Inc. (Rochester, NY, USA) | NDC code 24208-314-25 | |
| Neomycin and Polymyxin B Sulfates and Dexamethasone Ophthalmic Ointment | Bausch & Lomb, Inc. (Rochester, NY, USA) | NDC code 24208-795-35 | |
| Meloxicam injection | Henry Schein Inc. (Queens, NY, USA) | NDC code 11695-6925-1 |
Riferimenti
- Wang, L. V., Hu, S. Photoacoustic tomography: in vivo imaging from organelles to organs. Science. 335 (6075), 1458-1462 (2012).
- Beard, P. Biomedical photoacoustic imaging. Interface Focus. , (2011).
- Taruttis, A., Ntziachristos, V. Advances in real-time multispectral optoacoustic imaging and its applications. Nat Photonics. 9 (4), 219-227 (2015).
- Tian, C., Xie, Z., Fabiilli, M. L., Wang, X. Imaging and sensing based on dual-pulse nonlinear photoacoustic contrast: a preliminary study on fatty liver. Opt Lett. 40 (10), 2253-2256 (2015).
- Tian, C., et al. Dual-pulse nonlinear photoacoustic technique: a practical investigation. Biomed Opt Express. 6 (8), 2923-2933 (2015).
- Tian, C., et al. Non-Contact Photoacoustic Imaging Using a Commercial Heterodyne Interferometer. IEEE Sens J. 16 (23), 8381-8388 (2016).
- Kim, K. H., et al. Air-coupled ultrasound detection using capillary-based optical ring resonators. Sci Rep. 7, 1 (2017).
- Feng, T., et al. Bone assessment via thermal photo-acoustic measurements. Opt Lett. 40 (8), 1721-1724 (2015).
- Chen, S. -. L., Xie, Z., Carson, P. L., Wang, X., Guo, L. J. In vivo flow speed measurement of capillaries by photoacoustic correlation spectroscopy. Opt Lett. 36 (20), 4017-4019 (2011).
- Dean-Ben, X., Fehm, T. F., Razansky, D. Universal Hand-held Three-dimensional Optoacoustic Imaging Probe for Deep Tissue Human Angiography and Functional Preclinical Studies in Real Time. J Vis Exp. (93), e51864 (2014).
- Galanzha, E. I., et al. In vivo magnetic enrichment and multiplex photoacoustic detection of circulating tumour cells. Nat Nanotechnol. 4 (12), 855-860 (2009).
- Xiang, L., Wang, B., Ji, L., Jiang, H. 4-D photoacoustic tomography. Sci Rep. 3, (2013).
- Tian, C., et al. Plasmonic nanoparticles with quantitatively controlled bioconjugation for photoacoustic imaging of live cancer cells. Adv Sci. 3 (12), (2016).
- Zhou, F., Wu, S., Yuan, Y., Chen, W. R., Xing, D. Mitochondria-Targeting Photoacoustic Therapy Using Single-Walled Carbon Nanotubes. Small. 8 (10), 1543-1550 (2012).
- Maslov, K., Zhang, H. F., Hu, S., Wang, L. V. Optical-resolution photoacoustic microscopy for in vivo imaging of single capillaries. Opt Lett. 33 (9), 929-931 (2008).
- Hu, S., Maslov, K., Wang, L. V. Three-dimensional Optical-resolution Photoacoustic Microscopy. J Vis Exp. (51), e2729 (2011).
- Yao, J., et al. High-speed label-free functional photoacoustic microscopy of mouse brain in action. Nat Methods. 12 (5), 407-410 (2015).
- Yang, X., Skrabalak, S. E., Li, Z. -. Y., Xia, Y., Wang, L. V. Photoacoustic tomography of a rat cerebral cortex in vivo with au nanocages as an optical contrast agent. Nano Lett. 7 (12), 3798-3802 (2007).
- Agarwal, A., et al. Targeted gold nanorod contrast agent for prostate cancer detection by photoacoustic imaging. J Appl Phys. 102 (6), 064701 (2007).
- Zackrisson, S., van de Ven, S., Gambhir, S. Light in and sound out: emerging translational strategies for photoacoustic imaging. Cancer Res. 74 (4), 979-1004 (2014).
- Ermilov, S. A., et al. Laser optoacoustic imaging system for detection of breast cancer. J Biomed Opt. 14 (2), 024007 (2009).
- Mallidi, S., Luke, G. P., Emelianov, S. Photoacoustic imaging in cancer detection, diagnosis, and treatment guidance. Trends Biotechnol. 29 (5), 213-221 (2011).
- Zhang, H. F., Maslov, K., Stoica, G., Wang, L. V. Functional photoacoustic microscopy for high-resolution and noninvasive in vivo imaging. Nat Biotechnol. 24 (7), 848 (2006).
- Keswani, R. K., et al. Repositioning Clofazimine as a Macrophage-Targeting Photoacoustic Contrast Agent. Sci Rep. 6, 23528 (2016).
- Strohm, E. M., Berndl, E. S., Kolios, M. C. Probing red blood cell morphology using high-frequency photoacoustics. Biophys J. 105 (1), 59-67 (2013).
- Nguyen, V. P., Kim, J., Ha, K. -. l., Oh, J., Kang, H. W. Feasibility study on photoacoustic guidance for high-intensity focused ultrasound-induced hemostasis. J Biomed Opt. 19 (10), 105010 (2014).
- Keane, P. A., Sadda, S. R. Retinal imaging in the twenty-first century: state of the art and future directions. Ophthalmology. 121 (12), 2489-2500 (2014).
- Keane, P., Sadda, S. Imaging chorioretinal vascular disease. Eye. 24 (3), 422-427 (2010).
- Jiao, S., et al. Photoacoustic ophthalmoscopy for in vivo retinal imaging. Opt Express. 18 (4), 3967-3972 (2010).
- Liu, T., et al. Near-infrared light photoacoustic ophthalmoscopy. Biomed Opt Express. 3 (4), 792-799 (2012).
- Song, W., et al. A combined method to quantify the retinal metabolic rate of oxygen using photoacoustic ophthalmoscopy and optical coherence tomography. Sci Rep. 4, 6525 (2014).
- Liu, W., Zhang, H. F. Photoacoustic imaging of the eye: a mini review. Photoacoustics. 4 (3), 112-123 (2016).
- de La Zerda, A., et al. Photoacoustic ocular imaging. Opt Lett. 35 (3), 270-272 (2010).
- Hu, S., Rao, B., Maslov, K., Wang, L. V. Label-free photoacoustic ophthalmic angiography. Opt Lett. 35 (1), 1-3 (2010).
- Silverman, R. H., et al. High-resolution photoacoustic imaging of ocular tissues. Ultrasound Med Biol. 36 (5), 733-742 (2010).
- Wu, N., Ye, S., Ren, Q., Li, C. High-resolution dual-modality photoacoustic ocular imaging. Opt Lett. 39 (8), 2451-2454 (2014).
- Hennen, S. N., et al. Photoacoustic tomography imaging and estimation of oxygen saturation of hemoglobin in ocular tissue of rabbits. Exp Eye Res. 138, 153-158 (2015).
- Tian, C., Zhang, W., Mordovanakis, A., Wang, X., Paulus, Y. M. Noninvasive chorioretinal imaging in living rabbits using integrated photoacoustic microscopy and optical coherence tomography. Opt Express. 25 (14), 15947-15955 (2017).
- Laser Institute of America. American National Standard for Safe Use of Lasers ANSI Z136.1 – 2007. American National Standards Institute, Inc. , (2007).
- Hughes, A. A schematic eye for the rabbit. Vision Res. 12 (1), 123 (1972).
- Ma, T., et al. Systematic study of high-frequency ultrasonic transducer design for laser-scanning photoacoustic ophthalmoscopy. J Biomed Opt. 19 (1), 016015 (2014).
- Song, W., Wei, Q., Jiao, S., Zhang, H. F. Integrated photoacoustic ophthalmoscopy and spectral-domain optical coherence tomography. J Vis Exp. (71), (2013).
- Mattison, S., Kim, W., Park, J., Applegate, B. Molecular Imaging in Optical Coherence Tomography. Curr Mol Imaging. 3 (2), 88-105 (2014).
