Transplante de células-tronco derivadas de tecido adiposo folha para reduzir o vazamento após colectomia parcial em um modelo do rato
Summary
A preparação e a transplantação de lençóis de células-tronco (ASC) derivado de tecido adiposo para anastomoses Colorretais insuficientemente suturados em um modelo do rato é apresentado. Esta aplicação romance mostra que folhas ASC podem reduzir o vazamento de anastomose colorretal.
Abstract
Anastomótica escapamento é uma complicação catastrófica após cirurgia colorectal. Embora os métodos atuais para prevenção de vazamento tem diferentes níveis de eficácia clínica, eles são até agora imperfeitas soluções. Terapia de células-tronco, usando folhas de ASC poderia fornecer uma solução para este problema. ASCs são considerados candidatos mais promissores para a promoção do tecido de cicatrização devido às suas propriedades tróficas e imunomoduladores. Aqui, nós fornecemos métodos para produzir folhas ASC de alta densidade, que são transplantadas para uma anastomose colorretal em um modelo do rato para reduzir o vazamento. ASCs formaram folhas de célula em pratos de cultura thermo-responsivo que poderiam facilmente ser desanexados. No dia do transplante, foi realizada uma colectomia parcial com uma anastomose colorretal 5-sutura. Os animais foram transplantados imediatamente com 1 folha ASC por rato. Folhas ASC aderiram espontaneamente para a anastomose sem qualquer cola, sutura ou qualquer biomaterial. Grupos de animais foram sacrificados 3 a 7 dias no pós-operatório. Em comparação com animais transplantados, a incidência de abscessos anastomótica e escapamento foi maior nos animais controle. Em nosso modelo, o transplante de folhas ASC após anastomose colorretal foi bem sucedida e associado uma menor taxa de fugas.
Introduction
Colectomia parcial com uma anastomose primária é comumente realizada cirurgia que pode ser feita para muitas doenças que afetam o cólon como câncer colorretal, doença de Crohn e diverticulite1,2. A mais temida complicação após anastomose colorretal é fuga anastomótica3. Embora tenham sido identificados vários factores de risco associados a vazamentos anastomótica, soluções para a prevenção de vazamento permanecem unkown4,5.
Tecido adiposo-derivado de células do estroma (ASCs) estão associadas com propriedades anti-inflamatórias e trófico6,7, que faz com que estas células prometendo candidatos para terapias regenerativas8. A eficácia de ASCs para promover a cicatrização tecidual foi mostrada em vários tecidos como o músculo cardíaco, pele e esôfago9,10,11,12,13. No entanto, existem poucos relatos sobre o uso de ASCs para promover a cicatrização intestinal. Transplante de local de ASCs para anastomoses Colorretais experimentais através de biosutures ASC-revestido ou serosas injeções de ASCs não mostraram nenhuma melhora ou na cura de14 ou não impediu a fuga anastomótica apesar de um mais favorável anastomótica cura de15.
Transplante de local de ASCs em suspensão ou combinado com biomateriais podem ser associados com retenção insuficiente ou uma distribuição inadequada de células transplantadas11. Célula folha tecnologia16,17 oferece um método inovador de ASC entrega18,19. Portanto, em um estudo anterior, uma nova abordagem foi proposta na quais ASCs organizados em uma célula de folha poderá ser aplicada na anastomose colorretal experimental20. Este estudo demonstrou que o transplante de folha ASC é bem sucedido em reduzir o vazamento de anastomose colorretal após colectomia parcial em um modelo do rato. Este artigo relata a elaboração de folha ASC e técnica cirúrgica de transplante.
Protocol
Representative Results
Discussion
Escapamento anastomótica é o efeito adverso mais grave após a ressecção do cólon com uma anastomose primária. Técnicas ideais para impedir fugas e ruptura anastomótica ainda estão faltando. Aplicação local de uma matriz de biomateriais tem sido conduzida, com resultados variados25,26,27. O objetivo das terapias com células é facilitar o reparo do tecido por substituição de tecido ou a estimulação da cicatrizaç…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores agradecem ao Prof. Dr. S.E.R. Hovius, Dr. M.A.M. Mureau e todos os cirurgiões do departamento de cirurgia plástica para a coleção de tecido adiposo subcutâneo. P. Sukho é suportado por uma concessão do programa The Netherlands Fellowship (NFP-12/435), durante a realização do estudo. Y.M. Bastiaansen-Jenniskens é suportado por doações da Fundação holandesa de artrite (LP11).
Materials
| LG DMEM | Gibco, Life technologies | 22320022 | ASC isolation and culture |
| Collagenase type I | Gibco, Life technologies | 17100-01 | ASC Isolation |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A9418 | ASC Isolation |
| Fetal bovine serum | Gibco, Life technologies | 10270-106 | FBS, ASC isolation and culture |
| 3% acetic acid with methylene blue | Stemcell Technologies | 7060 | ASC Isolation |
| Gentamicin | Gibco, Life technologies | 15750-037 | ASC isolation and culture |
| Ampothericin B | Gibco, Life technologies | 15290-018 | ASC isolation and culture |
| Shaker (Gallenkamp Environmental Shaker Model 10X 400) | Akribis Scientific | F240 | ASC Isolation |
| Centrifuge | Hettichlab | Rotina380 | ASC isolation and culture |
| Phosphate buffer saline | Gibco, Life technologies | 14190-094 | PBS, ASC isolation and culture |
| Ascorbic acid-2-phosphate | Sigma-Aldrich | A8960 | ASC isolation and culture |
| Human recombinant fibroblast growth factor 2 | AbD Serotec | AF-100-15 | FGF2, ASC isolation and culture |
| Trypsin EDTA | Gibco, Life technologies | 25200-056 | ASC culture |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650-5x | DMSO, ASC freezing |
| Thermo-responsive culture dishes | Nunc Thermo scientific | 174904 | ASC sheet preperation |
| Non-absorbable braided silk 4/0 | B Braun | 21151042 | surgery |
| Non-absorbable monofilament polyamide 8/0 | B Braun | G1118170 | surgery |
| Absorbable braided polyglycolic acid 5/0 | B Braun | C1048207 | surgery |
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