Trasplante de células madre derivadas de tejido adiposo hoja para reducir fugas después de colectomía parcial en un modelo de rata
Summary
Se presenta la preparación y el trasplante de tejido adiposo derivado de la célula de vástago (ASC) hojas en anastomosis colorrectales suficientemente suturadas en un modelo de rata. Esta aplicación novedosa muestra que hojas ASC pueden reducir la fuga de la anastomosis colorrectal.
Abstract
Fuga anastomótica es una complicación catastrófica después de la cirugía colorrectal. Aunque los métodos actuales para la prevención de fugas tienen diferentes niveles de eficacia clínica, son hasta ahora imperfectas soluciones. Terapia de células madre utilizando hojas de ASC podría proporcionar una solución a este problema. ASCs son considerados como prometedores candidatos para promover tejido de cicatrización debido a sus propiedades tróficas e inmunomoduladores. Aquí, ofrecemos métodos para producir alta densidad hojas ASC, que se trasplantan en una anastomosis colorrectal en un modelo de rata para reducir la fuga. ASCs forman hojas celular en platos termo-sensible de la cultura que pueden ser desmontados fácilmente. En el día del transplante, se realizó una colectomía parcial con una 5-sutura en la anastomosis colorectal. Los animales fueron trasplantados inmediatamente con 1 hoja ASC por rata. Hojas ASC se adhirieron espontáneamente a la anastomosis sin ninguÌ n pegamento, sutura o cualquier biomaterial. Grupos de animales fueron sacrificados 3 y 7 días después de la operación. Comparado con animales trasplantados, la incidencia de abscesos anastomóticos y la salida fue mayor en los animales control. En nuestro modelo, el trasplante de hojas ASC después de anastomosis colorrectal era acertado y asociado con una menor tasa de salida.
Introduction
Colectomía parcial con una anastomosis primaria es una cirugía comúnmente realizada que se puede hacer para muchas enfermedades que afectan el colon como el cáncer colorrectal, enfermedad de Crohn y diverticulitis1,2. La más temida complicación después de la fuga anastomótica3anastomosis colorrectal. Aunque se han identificado varios factores de riesgo asociados a fugas anastomóticas, soluciones para la prevención de fugas siguen siendo desconocido4,5.
Células estromales derivadas de tejido adiposo (ASCs) están asociadas con propiedades antiinflamatorias y tróficos6,7, que hace que estas células prometedores candidatos para terapias regenerativas8. La eficacia de ASCs para promover la curación del tejido fue demostrada en varios tejidos como el músculo cardiaco, piel y esófago9,10,11,12,13. Sin embargo, hay pocos informes sobre el uso de ASCs para promover la curación intestinal. Trasplante local de ASCs para anastomosis colorrectales experimentales vía biosutures recubierto de ASC serosas inyecciones de ASCs no mostraron o mejora en la curación de14 o no impidió la fuga anastomótica a pesar de un más favorable anastomótica cura de15.
Trasplante local de ASC en suspensión o en combinación con biomateriales pueden asociarse a retención insuficiente de células o una distribución inadecuada de las células trasplantadas11. Células hoja tecnología16,17 ofrece un método innovador de ASC entrega18,19. Por lo tanto, en un estudio anterior, se propuso un nuevo enfoque en que ASC organizada en una celda de la hoja podría aplicarse en anastomosis colorrectal experimental20. Este estudio demostró que la ASC hoja trasplante es exitoso en la reducción de fugas de anastomosis colorrectal después de la colectomía parcial en un modelo de rata. Este artículo divulga ASC hoja preparación y técnica quirúrgica del trasplante.
Protocol
Representative Results
Discussion
Fuga anastomótica es el evento adverso más grave después de la resección de colon con una anastomosis primaria. Técnicas óptimas para evitar fugas y disrupción anastomótica siguen faltando. Aplicación local de una amplia gama de biomateriales se ha realizado, con distintos resultados25,26,27. El objetivo de las terapias de la célula es facilitar la reparación de los tejidos por el reemplazo del tejido o la estimulaci?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores agradecemos al Prof. Dr. S.E.R. Hovius, Dr. m.a.m. Mureau y todos los cirujanos del Departamento de cirugía plástica de la colección del tejido adiposo subcutáneo. P. Sukho es apoyado por una beca del programa de la comunidad de Países Bajos (NFP-12/435), durante la realización del estudio. Y.M. Bastiaansen-Jenniskens es apoyado por becas de la fundación holandesa de artritis (LP11).
Materials
| LG DMEM | Gibco, Life technologies | 22320022 | ASC isolation and culture |
| Collagenase type I | Gibco, Life technologies | 17100-01 | ASC Isolation |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A9418 | ASC Isolation |
| Fetal bovine serum | Gibco, Life technologies | 10270-106 | FBS, ASC isolation and culture |
| 3% acetic acid with methylene blue | Stemcell Technologies | 7060 | ASC Isolation |
| Gentamicin | Gibco, Life technologies | 15750-037 | ASC isolation and culture |
| Ampothericin B | Gibco, Life technologies | 15290-018 | ASC isolation and culture |
| Shaker (Gallenkamp Environmental Shaker Model 10X 400) | Akribis Scientific | F240 | ASC Isolation |
| Centrifuge | Hettichlab | Rotina380 | ASC isolation and culture |
| Phosphate buffer saline | Gibco, Life technologies | 14190-094 | PBS, ASC isolation and culture |
| Ascorbic acid-2-phosphate | Sigma-Aldrich | A8960 | ASC isolation and culture |
| Human recombinant fibroblast growth factor 2 | AbD Serotec | AF-100-15 | FGF2, ASC isolation and culture |
| Trypsin EDTA | Gibco, Life technologies | 25200-056 | ASC culture |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650-5x | DMSO, ASC freezing |
| Thermo-responsive culture dishes | Nunc Thermo scientific | 174904 | ASC sheet preperation |
| Non-absorbable braided silk 4/0 | B Braun | 21151042 | surgery |
| Non-absorbable monofilament polyamide 8/0 | B Braun | G1118170 | surgery |
| Absorbable braided polyglycolic acid 5/0 | B Braun | C1048207 | surgery |
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