Oligomero di β-amiloide a11-positiva preparazione e valutazione utilizzando Dot Blotting analisi

Huang Chunhui; Xu Dilin; Zhang Ke; Shentu Jieyi; Yan Sicheng; Wu Dapeng; Wang Qinwen; Cui Wei

doi:10.3791/57592

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Articolo metodologico

Oligomero di β-amiloide a11-positiva preparazione e valutazione utilizzando Dot Blotting analisi

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DOI:

10.3791/57592

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22 maggio 2018

Huang Chunhui¹^,² , Xu Dilin¹ , Zhang Ke¹ , Shentu Jieyi² , Yan Sicheng¹ , Wu Dapeng³ , Wang Qinwen¹ , Cui Wei¹^,²

¹Ningbo Key Laboratory of Behavioral Neuroscience, Zhejiang Provincial Key Laboratory of Pathophysiology, School of Medicine, Ningbo University, ²Li Dak Sum Yip Yio Chin Kenneth Li Marine Biopharmaceutical Research Center, Ningbo University, ³School of Materials Science and Chemical Engineering, Ningbo University

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo descrive come preparare oligomeri Aβ da un peptide sintetico in vitro e per valutare la quantità relativa di oligomero Aβ da un punto di analisi macchiante.

Abstract

Β-amiloide (Aβ) è un peptide idrofobo con un'intrinseca tendenza ad auto-assemblarsi in aggregati. Tra i vari aggregati, oligomero Aβ è ampiamente accettata come la neurotossina leader nel progresso della malattia di Alzheimer (AD) ed è considerato l'evento cruciale nella patogenesi dell'annuncio. Di conseguenza, Aβ oligomero inibitori potrebbero impedire la neurodegenerazione e hanno il potenziale per essere sviluppato come modificante la malattia trattamenti dell'annuncio. Tuttavia, i protocolli di diversa formazione di oligomeri Aβ potrebbero portare a oligomeri con caratteristiche diverse. Inoltre, non ci sono molti metodi per efficacemente gli inibitori di oligomero del_1-42 di schermo Aβ. Un anticorpo A11 può reagire con un sottoinsieme di tossico oligomero di Aβ_1-42 con strutture di β-foglio anti-parallelo. In questo protocollo, si descrive come preparare un campione di oligomero-ricco A11-positivi Aβ_1-42 da un sintetico Aβ_1-42 del peptide in vitro e per valutare la quantità relativa di oligomero di_1-42 di Aβ A11-positivi in campioni tamponando un puntino analisi usando A11 e Aβ_1-42-6E10 specifici anticorpi. Usando questo protocollo, inibitori dell'oligomero di A11-positivi Aβ_1-42 possono essere selezionati anche da risultati sperimentali semi-quantitativa.

Introduzione

Morbo di Alzheimer (annuncio) è una delle più importanti malattie neurodegenerative che colpisce le persone anziane nel mondo¹. È ampiamente accettato che l'aggregazione anormale di β-amiloide (Aβ) può essere il fattore patologico principale dell'annuncio. Aggregati Aβ sono i componenti principali delle placche senili, uno dei marcatori biologici nei cervelli dei pazienti dell'annuncio. Inoltre, gli aggregati Aβ, oligomeri in particolare, producono neurotossicità potente, che potrebbe essere la causa della morte di un neurone come progredisce AD. Di conseguenza, l'inibizione della formazione di oligomeri Aβ potrebbe impedire la neurodegenerazio....