Procedure sperimentali per l'estrazione successiva di tessuti linfatici per testare l'attivazione delle cellule dendritiche linfoidi sono descritti dopo il trattamento di un nanomateriale immunostimulating.
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Articolo metodologico
Valutazione immunostimulatory agente: Attivazione linfoide tessuto estrazione e iniezione Route-dipendente delle cellule dendritiche
In questo articolo
Sommario
Abstract
Per la valutazione di un nuovo agente terapeutico per l'immunoterapia o la vaccinazione, analisi di attivazione delle cellule immuni in tessuti linfatici è essenziale. Qui, abbiamo studiato gli effetti immunologici di un immunostimolante di romanzo del lipido-DNA in forma di nanoparticelle da vie di somministrazione differenti nel topo: orale, intranasale, sottocutanea, zampa, intraperitoneale ed endovenosa. Queste iniezioni influenzerà direttamente la risposta immunitaria e la raccolta dei tessuti linfatici e analisi dell'attivazione delle cellule dendritiche (DC) nei tessuti sono parti cruciali di queste valutazioni. L'estrazione dei linfonodi mediastinici (mLNs) è importante ma abbastanza complessa a causa della dimensione e la posizione di questo organo. È descritta una procedura graduale per la raccolta il linfonodo inguinal (iLN), mLN e la milza e l'analisi di attivazione delle DC tramite flusso cytometry.
Introduzione
Progressi in immunologia e nanomateriali hanno portato ad un'abbondanza di nuove strategie terapeutiche potenziali per applicazioni nel campo della biomedicina, tra cui immunostimolazione e consegna della droga. Ottimizzazione della via di somministrazione è un aspetto fondamentale che influenzano l'efficacia degli agenti immunostimulatory. Una nanoparticella di immunostimulatory (INP) costituito da DNA è un nuova concezione adiuvante di nano-immunitario auto-assemblato da microphase separazione a causa della struttura anfifilica di lipido-DNA1. Di conseguenza, protocolli per INP che coinvolge amministrazione del materiale1
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Protocollo
Tutte le procedure sperimentali tra cui isolamento di manipolazione, sacrificio e organo animale sono state eseguite in stretta conformità con le regole del Comitato uso presso centro clinico di salute pubblica di Shanghai e Asan Medical Center e International Animal Care. Il protocollo di studio è stato approvato dai rispettivi comitati di etica di animale esperimenti presso Shanghai Public Health Clinical Center (numero di protocollo del Mouse: SYXK-2010-0098) e Asan Medical Center (2016-02-168).
1. preparazione del materiale
Nota: Un nano-adiuvante, INP, composto da un elemento portante del lipido-DNA auto-assem....
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Risultati
Per valutare percorsi appropriati iniezione di INP per l'attivazione del tessuto linfatico DC, la popolazione di DC come lignaggio è stata definita ---CD11c+ cellule nella milza, iLN e mLN e analizzati i livelli di espressione di molecole costimolatorie. Trattamento di INP iniezione endovenosa (i.v.) e sottocutanea (s.c.) ha promosso gli aumenti sostanziali nell'espressione CD40, CD80 e CD86 in milza e iLN DCs (Figura 2B
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Discussione
Molti progressi nella nanotecnologia e immunologia sono stati raggiunti attraverso ricerca terapeutica della somministrazione di farmaci e immunostimolazione. Un'attenta selezione del metodo di iniezione è conosciuta per essere importante per immunostimolazione, che era l'obiettivo del presente studio.
Itinerari di iniezione differenti sono stati valutati per un naturalmente non tossici e biodegradabile basati sul DNA materiale, INP (immunostimulatory delle nanoparticelle), per determinare qua.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Questa ricerca è stata supportata dal programma di Creative materiali scoperta attraverso la nazionale Ricerca Fondazione della Corea (NRF) finanziato dal Ministero della scienza, ICT e futuro pianificazione (NRF-2017M3D1A1039421) e dal programma di biotecnologie Marine finanziato dalla Ministero degli oceani e pesca, Repubblica di Corea e una borsa di studio (20150220).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Materiale | |||
| salina tampone fosfato | Corning | 21-040-CVR | Lavaggio organi |
| (PBS, pH 7,4) | |||
| soluzione di isoflurano | Aesica Queenborough limited | 26675-46-7 | Processo di anestesia |
| Siringa tubercolina da 1 ml - | Junglim | N/A | Iniezione |
| 50 ml di tubo conico | SPL | 50050 | Processo di anestesia |
| Siringa da insulina da 1 ml | (BD Ultra-FineTMII)_short ago | 324826 | Iniezione intramuscolare |
| DMEM Hyclone ad alto contenuto di glucosio | SH30081.01 | Conservazione degli organi | |
| Istopaco | Analisi Sigma-Aldrich | 10771 | FACS |
| Alcool etilico anidro 99,5 % | Daejung | 4022-4110 | Disinfettante |
| Attrezzature | |||
| FineCycler C100 (Termociclatore) | Centrifuga | ||
| Centrifuga tubo FACS | FALCON | 2052 | FACS analysis |
| Citometro a flusso automatizzato ad alte prestazioni | BD (USA), FACSVerse-FACS | analysis |
Riferimenti
- Park, H. Preparation of dodecynyl modified DNA nanoparticles with unmethylated CpG adjuvant and ovalbumin for immunostimulation. , Department of Chemistry. Pukyong National University, Master Thesis. (2016).
- Jin, J. O., Park, H., Zhang, W., de Vries, J. W., Gruszka, A., Lee, M. W., Ahn, D. R., Herrmann, A., Kwak, M.
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Ristampe e permessi
