כאן, אנו מציגים את פרוטוקול כדי לבדוק התקפה אלימה צמח עם המחלה צמח Magnaporthe grisea. דוח זה לתרום הקרנת בקנה מידה גדול pathotypes של פטריות מבודד, לשמש נקודת התחלה מצוינת להבנת מנגנוני עמידות הצמחים במהלך ההתרבות מולקולרית.
צמחים בעלי מערכת חזקה כדי להגן על עצמם מפני איומים פוטנציאליים על ידי פטריות פתוגניים. בצמחים חשוב בחקלאות, אולם, אמצעים הנוכחי כדי להלחם פתוגנים כאלה הוכיחו שמרן מדי, לכן, לא מספיק יעיל, והם יכול העלול להוות סיכונים סביבתיים. לכן, זה הכרחי מאוד כדי זיהוי המארח-התנגדות גורמים כדי לסייע מחלות השליטה באופן טבעי דרך זיהוי עמיד germplasm, הבידוד, אפיון גנים עמידות ו רבייה מולקולרית של הזנים עמיד. בהקשר זה, יש צורך להקים שיטה מדויקת, מהירה, בקנה מידה גדול חיסון להתרבות ולפתח גנים עמידות צמחים. האורז הפיצוץ תסמיני המחלה חמורה של גורם Magnaporthe grisea פטריות פתוגניות, תשואות הפסדים. לאחרונה, מ grisea התפתחה אורגניזם מודל לומד את המנגנונים של אינטראקציות צמח-פטריות פתוגניות. לפיכך, מדווחים על התפתחות הצמח התקפה אלימה מתודת בדיקה ספציפית עבור grisea מ’. שיטה זו מספקת חיסון בתרסיס עם השעיה conidial וגם ופצעו חיסון עם קוביות תפטיר או טיפות השעיה conidial. השלב מפתח של שיטת חיסון wounding אורז מנותק עלים הוא לעשות פצעים על עלי הצמח, הנמנעת כל הפרעה הנגרמת על ידי המארח חדירה ההתנגדות. זה ספריי ופצעו פרוטוקול תורמת הקרנת מהירה, מדויקת, בקנה מידה גדול pathotypes של grisea מ’ מבודד. זה משולב, משיטת ההדבקה צמח שיטתית ישמש נקודת התחלה מצוינת להשגת פרספקטיבה רחבה של סוגיות פתולוגיה.
הפיצוץ אורז, הנגרמת על ידי מ grisea, היא אחת המחלות הכי רציני אורז הזנים ברחבי העולם1,2. התהליך שבאמצעותו מ grisea מדביק צמחים פונדקאים כולל ייצור conidia, מצורף משטח, נביטה conidia עם היווצרות appressorium, היווצרות של חדירה פג ובידול hypha זיהומית, ולהפיץ מחלה 3. כל השלבים האלה שכיחים אצל רבים אחרים צמח פתוגניים פטריות, ומונעת, ואכן, מצור. על כל שלב בודד הזיהום של צמחים פונדקאים. בשל החשיבות הכלכלית שלה, גנטי ללקוחות שלנו, מ grisea התפתחה אורגניזם מודל לומד את המנגנונים של צמח-פטריות פתוגניות אינטראקציות1,4. לכן, לימוד הבסיס המולקולרי של אלה שלבים התפתחותיים מ grisea יעזור להבהיר את המנגנונים המולקולריים שבבסיס פטריות פתוגניות וזיהוי של המועמד גנים היעד של ההקרנה, עיצוב הרומן קוטלי פטריות5.
דיווחים אחרונים בנוגע grisea מ זיהום התמקדו המנגנונים המולקולריים של שלבי טרום חדירה, במיוחד את conidiation, היווצרות appressorium, את היתדות חדירה ואת הצמיחה זיהומיות3, 6. לכן חיוני לפתח פרוטוקול מפורט לבדיקת זיהום grisea מ’ . במסמך זה, אנו מציגים שיטה מפורטת עבור בדיקת זיהום אשר מנצל מבחני זיהום בתיווך ספריי עם השעיה conidial, את חיסון של פצעים עם תקעים mycelial של grisea מ’. בדו ח זה, הפרוטוקול מתמקד התרבות של זנים, הכנת הפתרון conidiation ריסוס, חיסון בתיווך הכנס mycelial של צמחים עם grisea מ’. שלבים אלה מתוארים פירוט בהמשך, ומבט סכמטית מציג את זרימת העבודה כולו של השיטה, פצע אופייני מוצגות דמויות 1 ו- 2, בהתאמה.
גנים עמידות למחלות צמחים תפקיד חיוני במניעת זיהומים על ידי פתוגנים, כולל פתוגנים ופטריות1,12. אורז הפיצוץ שימש כמודל להבין את טבעם של פתוגן האוכלוסייה מבנים, וכן לזיהוי צמח ההתנגדות גנים4. לכן, יש צורך לבחון את המחלה ההתנגדות גנוטיפ ואת avirulence אחר?…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי הפרויקט מחקר מדעי מיוחד של האוניברסיטה לחקלאות של בייג’ינג (YQ201603) ואת הפרויקט המדעי של ועדת חינוך בייג’ינג (KM201610020005).
Agar | AOBOX Biotechnology(China) | 01-023 | |
Filter paper | GE Healthcare brand(Sweden) | 10311387 | |
50-mL tube | CORNING(Amercia) | 430290 | |
Centrifuge | Eppendorf(Amercia) | 5804R | |
Tween-20 | Coolaber(China) | CT11551-100ml | |
Culture dish | Thermofisher(Amercia) | 150326 | |
0.5-5 mL pipette | Eppendorf | 4920000105 | |
100-1000uL pipette | Eppendorf | 4920000083 | |
Vacuum pump | Leybold | D25B | |
Dissection needle | FST | 26000-35 | |
Incubator | MEMMERT | PYX313 | |
Inoculation ring | Greiner Bio One | 731175 |