이 작품에는 미세 물방울 기반 플랫폼의 제조와 스피어 PCR 확대를 위한 polyacrylamide 스피어의 응용 프로그램에 대 한 방법을 제공 한다. 스피어 PCR 방법 단일 가닥 DNA amplicons 이중 가닥 DNA를 분리 하지 않고 얻을 수 있습니다.
드롭릿 기반 마이크로 제어 크기와 취득된 스피어의 형태를 제공 하는 미세 채널에서 균질 스피어의 안정적인 생산 가능 스피어 acrydite DNA 프로브 copolymerized 성공적으로 조작 했다. 비대칭 PCR, exonuclease 소화와 streptavidin 입히는 자성 구슬에 격리 같은 다른 방법은 단일 가닥 DNA (ssDNA) 합성에 사용할 수 있습니다. 그러나, 이러한 방법을 효율적으로 많은 양의 매우 순화 된 ssDNA 사용할 수 없습니다. 여기, 우리가 어떻게 ssDNA 수 수 효율적으로 증폭 및 구분 dsDNA에서 단순히 PCR 반응 관에서 pipetting 스피어-PCR 프로토콜을 설명 합니다. SsDNA의 증폭 DNA microarray 및 DNA SELEX (지 수 풍부에 의하여 ligands의 체계적인 발전) 프로세스에 대 한 잠재적인 약으로 적용할 수 있습니다.
단일 가닥 DNA (ssDNA) DNA-DNA 교 잡1,2에 대 한 본질적인 속성 때문 분자 인식 요소 (MRE)으로 광범위 하 게 고려 하고있다. SsDNA 합성 시스템의 개발 생물학 응용 DNA microarrays3, oligotherapeutics, 진단 및 보완 상호 작용4,5에 따라 통합 분자 감지 등 발생할 수 있습니다.
날짜 하려면, 마이크로미터 스케일 폴리머 입자는 성공적으로 시연 미세 장치를 사용 하 여. 여러 미세 기술 아닌 환경6,7연속 흐름에 매우 동질적인 스피어를 생산에 대 한 강력한 것으로 입증 되었습니다.
이 외 의 연구에서 8, copolymerizable 올리고 스피어와 ssDNA 증폭의 미세 합성에 대 한 미세 물방울 기반 플랫폼으로 알려졌다. 2 개의 PDMS (입니다) 층의 미세 플랫폼 구성: 스피어 및 아래쪽 평면 부분을 생성 하기 위한 미세 채널 네트워크와 위쪽 부분. 이 세 종류의 PDMS 유체 채널 구성: 1) 물방울 생성에 대 한 채널, 2)는 뱀 두 가지 솔루션, 혼합 채널과 채널 3)는 연속 중 합 스피어 응고에 대 한 초점을 맞추고 흐름. 일단 2 개의 혼합할 수 없는 흐름 PDMS 유체 채널에 소개는, 좁은 구멍 구조를 통해 흐름을 강제로 있습니다. 채널 형상, 유량, 점도 등 흐름 동작 크기와는 스피어의 형태에 영향을 줍니다. 따라서, 주요 액체 스트림 미 monospheres9,10으로 나눌 수 있습니다.
여기, 자세한 스피어-PCR 프로토콜 ssDNA의 증폭에 대 한 제공 됩니다. 첫째, 미세 물방울 기반 장치 설계 과정을 설명 합니다. 그런 다음, 어떤 polyacrylamide에 스피어 수 수 functionalized 무작위 DNA 템플렛으로 보완 하는 방식에서 하는 방법 설명 했다. 마지막으로, 스피어-PCR 프로토콜 ssDNA를 증폭에 대 한 표시 됩니다.
DsDNA의 오염 물질 ssDNA 증폭에 큰 문제입니다. 기존의 비대칭 PCR 증폭15dsDNA 증폭을 최소화 하기 어려운 남아 있다. 또한, ssDNA를 생성 하기 위한 기술적인 개선 샘플 처리량의 효율성을 증가 있게가지고, 비록 ssDNA 절연의 높은 비용 및 불완전 한 정화 수확량 때문에 여전히 문제입니다.
비대칭 PCR ssDNA를 작업할 때 사용 하는 가장 어려운 방법 중 하나입니다. 이 …
The authors have nothing to disclose.
이 연구 “협동 연구 프로그램 농업 과학 기술 개발 (프로젝트 번호에 대 한 권리는 프로젝트에 의해 지원 됩니다. PJ0011642) “농촌 진흥청, 한국에 의해 자금. 이 연구는 또한 부분적으로 기본 과학 연구 프로그램을 통해 국가 연구 재단 (NRF) 사역의 과학, ICT 및 미래 계획, 한국 투자의 부여 (NRF-2017R1A2B4012253)에 의해 지원 됩니다. 이 연구는 또한 크리에이 티브 및 사역의 무역, 산업 및 에너지, 한국 투자 산업 컨버전스에 대 한 교육 프로그램의 교부 금 (N0000717)에 의해 지원.
liquid polydimethylsiloxane, PDMS | Dow Corning Inc. | Sylgard 184 | Components of chip |
40% Acrylamide:bis solution (19:1) | Bio-rad | 1610140 | Components of Copolymerizable oligo-microsphere |
Ammonium persulfate, APS | Sigma Aldrich | A3678 | Hardener of acrylamide:bis solution |
N,N,N′,N′-Tetramethylethylenediamine, TEMED | Sigma Aldrich | T9281 | Catalyst of ammonium persulfate |
Mineral oil | Sigma Aldrich | M5904 | Table 1. Solution III. Component of microsphere reagents |
Cy3 labeled complementary oligonucleotide probes | Bioneer | synthesized | Table 3. Sequence information |
ssDNA acrydite labeled probe | Bioneer | synthesized | Table 1. Solution I. Component of microsphere reagents |
Tris | Biosesang | T1016 | Components of TE buffer, pH buffer solution |
EDTA | Sigma Aldrich | EDS | Components of TE buffer, removal of ion (Ca2+) |
Ex taq | Takara | RR001A | ssDNA amplification |
Confocal microscope | Carl Zeiss | LSM 510 | Identifying oligonucleotides expossure of microsphere surface |
Light Microscope | Nikon Instruments Inc. | eclipse 80i | Caculating number of microspheres |
T100 Thermal Cycler | Bio-rad | 1861096 | ssDNA amplification |
Hand-held Corona Treater | Electro-Technic | BD-20AC Laboratory Corona Treater | Hydrophilic surface treatment |
Hot plate | As one | HI-1000 | heating plate for curing of liquid PDMS |
Syringe pump | kd Scientific | 78-1100 | Uniform flow of Solution I and Solution II |
Compressor | Kohands | KC-250A | Flow control of Solution III |
Bright-Line Hemacytometer | Sigma Aldrich | Z359629 | Caculating number of microspheres |