Indspilning rumligt begrænset svingninger i Hippocampus adfærd mus
Summary
Denne protokol beskriver optagelse af lokalt felt potentialer med multi skanken lineær silicium sonder. Konvertering af signaler ved hjælp af aktuelle kilde tæthed analyse giver mulighed for genopbygningen af lokale elektriske aktivitet i mus hippocampus. Med denne teknik, kan rumligt begrænset hjerne svingninger studeres i frit flytte mus.
Abstract
Det lokale område potentiale (LFP) fremgår af ion bevægelser på tværs af neurale membraner. Da spændingen indspillet af LFP elektroder afspejler den summerede elektrisk felt af en stor mængde hjernevæv, er udtrække oplysninger om lokale aktiviteter udfordrende. At studere neuronal mikrokredsløb, men kræver en pålidelig adskillelse mellem virkelig lokale begivenheder og volumen-gennemført signaler med oprindelse i fjerne hjernen områder. Aktuelle kilde tæthed (CSD) analyse tilbyder en løsning på dette problem ved at give oplysninger om aktuelle dræn og kilder i nærheden elektroderne. I hjernen områder med laminar cytoarchitecture såsom hippocampus, kan endimensional CSD opnås ved estimering af den anden rumlige afledte af LFP. Her, beskriver vi en metode til at optage multilaminar LFPs ved hjælp af lineære silicium sonder implanteret i den dorsale hippocampus. CSD spor er beregnet langs individuelle skafter af sonden. Denne protokol beskriver således en procedure for at løse rumligt begrænset neuronal netværk svingninger i hippocampus frit flytte mus.
Introduction
Svingninger i LFP er kritisk involveret i information behandling af neuronal kredsløb. De dækker et bredt spektrum af frekvenser, lige fra langsom bølger (~ 1 Hz) til hurtig ripple svingninger (~ 200 Hz)1. Forskellige frekvensbånd er forbundet med kognitive funktioner heri indbefattet hukommelse, følelsesmæssige forarbejdning og navigation2,3,4,5,6,7. Nuværende flow over neuronal membraner udgør den største del af LFP signal8. Kationer ind i cellen (f.eks. via aktivering af glutamatergic ophidsende synapser) repræsenterer en aktiv nuværende vasken (som charge efterlader den ekstracellulære medium). Derimod skildrer nettostrømmen af positiv ladning til ekstracellulære medium, for eksempel ved aktivering af GABAergic hæmmende synapser, en aktiv aktuelle kilde på dette sted. I neuronal dipoler, er nuværende dræn parret med passiv kilder og omvendt på grund af forædlingsprodukter strømninger som påvirker membran afgift på fjerne steder.
Det elektriske felt produceret af remote neurale processer kan også resultere i betydelig spænding omlægges på en optagelse elektrode og kan derfor fejlagtigt betragtes som en lokal begivenhed. Denne diskenhed overledning udgør en alvorlig udfordring for fortolkningen af LFP signaler. CSD analyse giver oplysninger om lokale nuværende dræn og kilder underliggende LFP signaler og derfor består et middel til at mindske virkningerne af volumen overledning8. I lamineret strukturer som hippocampus, kan endimensional CSD signaler opnås af den anden rumlige derivat af LFP registreres fra ækvidistante elektroder anbragt vinkelret til laminar fly9. Fremkomsten af kommercielt tilgængelige lineær silicium sonder har tilladt forskere at udnytte metoden CSD for studiet af lokale svingning aktivitet i hippocampus. For eksempel, er det blevet påvist, at forskellige gamma svingninger dukke op i et lag-specifik måde i CA1 område10. Derudover har CSD analyse identificeret uafhængige Hotte steder af gamma aktivitet i de vigtigste cellelag af dentate gyrus11. Disse resultater var vigtigere, kun synlige i lokale CSD, men ikke i LFP signaler. CSD analyse giver således et kraftfuldt værktøj til at få indsigt i dataloger operationerne i hippocampus.
I denne protokol leverer vi en omfattende guide for at få endimensional CSD signaler med silicium sonder. Disse metoder vil muliggøre brugernes hen til undersøge lokaliserede svingning begivenheder i hippocampus opfører mus.
Protocol
Representative Results
Discussion
Stigende beviser indikerer, at hjernens svingninger i hippocampus neuronal kredsløb opstår i diskrete rumlige domæner10,11,16. CSD analyse reducerer drastisk indflydelsen fra volumen overledning, en afgørende forudsætning for studiet af lokale svingning begivenheder. Med denne video giver vi en guide til implanterer silicium sonder ind i musen hippocampus til analyse af CSD data. Vi viser repræsentative eksempler på CSD s…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vi er taknemmelige for Karin Winterhalter og Kerstin Semmler teknisk bistand. Dette arbejde blev støttet af klyngen af excellence BrainLinks – BrainTools (EXC 1086) af tyske Research Foundation.
Materials
| Crocodile clamp with stand | Reichelt Elektronik | HALTER ZD-10D | |
| Silicon probe | Cambridge Neurotech | P-series 32 | |
| Stereoscope | Olympus | SZ51 | |
| Varnish-insulated copper wire | Bürklin Elektronik | 89 F 232 | |
| Ground screws | Screws & More GmbH (screwsandmore.de) | DIN 84 A2 M1x2 | |
| Flux | Stannol | 114018 | |
| Ceramic-tipped forceps | Fine Science Tools | 11210-60 | |
| Paraffine Wax | Sigma-Aldrich | 327204 | |
| Cauterizer | Fine Science Tools | 18010-00 | |
| Soldering iron | Kurtz Ersa | OIC1300 | |
| Multimeter | Uni-T | UT61C | |
| Ethanol | Carl Roth | 9065.1 | |
| Pasteur pipettes | Carl Roth | EA65.1 | |
| Heat sterilizer | Fine Science Tools | 18000-45 | |
| Stereotaxic frame | David Kopf | Model 1900 | |
| Stereotaxic electrode holder | David Kopf | Model 1900 | |
| Isoflurane | Abbvie | B506 | |
| Oxygen concentrator | Respironix | 1020007 | |
| Buprenorphine | Indivior UK Limited | ||
| Electrical shaver | Tondeo | Eco-XS | |
| Heating pad | Thermolux | 463265/-67 | |
| Surgical clamps | Fine Science Tools | 18050-28 | |
| Hydrogen peroxide | Sigma-Aldrich | H1009 | |
| Sterile cotton wipes | Carl Roth | EH12.1 | |
| Drill | Proxxon | Micromot 230/E | |
| 21G injection needle | B. Braun | 4657527 | |
| Phosphate buffer/phosphate buffered saline | |||
| Stereotaxic atlas | Elsevier | 9.78012E+12 | |
| Surgical scissors | Fine Science Tools | 14094-11 | |
| Surgical forceps | Fine Science Tools | 11272-40 | |
| 27G injection needles | B. Braun | 4657705 | |
| Vaseline | |||
| Dental cement | Sun Medical | SuperBond T&M | |
| Carprofen | Zoetis | Rimadyl 50mg/ml | |
| Recording amplifier | Intan Technologies | C3323 | |
| USB acquisition board | Intan Technologies | C3004 | |
| Recording cables | Intan Technologies | C3216 | |
| Electrical commutator | Doric lenses | HRJ-OE_FC_12_HARW | |
| Acquisition software | OpenEphys (www.open-ephys.org) | GUI | allows platform-independent data acquisition |
| Computer for data acquisition | |||
| Analysis environment | Python (www.python.org) | allows platform-independent data analysis | |
| Urethane | Sigma-Aldrich | ||
| Vibratome | Leica | VT1000 | |
| Microscope slides | Carl Roth | H868.1 | |
| Cover slips | Carl Roth | H878.2 | |
| Embedding medium | Sigma-Aldrich | 81381-50G | |
| Distilled water | Millipore | Milli Q | Table-top machine for the production of distilled water |
| Tergazyme | Alconox | Tergazyme |
Riferimenti
- Buzsáki, G., Draguhn, A. Neuronal oscillations in cortical networks. Science. 304 (5679), 1926-1929 (2004).
- Keefe, J., Recce, M. L. Phase relationship between hippocampal place units and the EEG theta rhythm. Hippocampus. 3 (3), 317-330 (1993).
- Benchenane, K., et al. Coherent theta oscillations and reorganization of spike timing in the hippocampal-prefrontal network upon learning. Neuron. 66 (6), 921-936 (2010).
- Jadhav, S. P., Kemere, C., German, P. W., Frank, L. M. Awake hippocampal sharp-wave ripples support spatial memory. Science. 336 (6087), 1454-1458 (2012).
- Yamamoto, J., Suh, J., Takeuchi, D., Tonegawa, S. Successful execution of working memory linked to synchronized high-frequency gamma oscillations. Cell. 157 (4), 845-857 (2014).
- Karalis, N., et al. 4-Hz oscillations synchronize prefrontal-amygdala circuits during fear behavior. Nature Neuroscience. 19 (4), 605-612 (2016).
- Khodagholy, D., Gelinas, J. N., Buzsáki, G. Learning-enhanced coupling between ripple oscillations in association cortices and hippocampus. Science. 358 (6361), 369-372 (2017).
- Buzsáki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C. The origin of extracellular fields and currents–EEG, ECoG, LFP and spikes. Nature Reviews Neuroscience. 13 (6), 407-420 (2012).
- Mitzdorf, U. Current source-density method and application in cat cerebral cortex: investigation of evoked potentials and EEG phenomena. Physiological Reviews. 65 (1), 37-100 (1985).
- Lasztóczi, B., Klausberger, T. Layer-specific GABAergic control of distinct gamma oscillations in the CA1 hippocampus. Neuron. 81 (5), 1126-1139 (2014).
- Strüber, M., Sauer, J. -. F., Jonas, P., Bartos, M. Distance-dependent inhibition facilitates focality of gamma oscillations in the dentate gyrus. Nature Communications. 8 (1), 758 (2017).
- Franklin, K. B. J., Paxinos, G. . The mouse brain in stereotaxic coordinates. , (2007).
- Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).
- Kajikawa, Y., Schroeder, C. E. How local is the local field potential?. Neuron. 72 (5), 847-858 (2011).
- Berens, P., Keliris, G. A., Ecker, A. S., Logothetis, N. K., Tolias, A. S. Feature selectivity of the gamma-band of the local field potential in primate primary visual cortex. Frontiers in Neuroscience. 2 (2), 199-207 (2008).
- Lastóczi, B., Klausberger, T. Distinct gamma oscillations in the distal dendritic field of the dentate gyrus and the CA1 area of mouse hippocampus. Brain Structure and Function. 222 (7), 3355-3365 (2017).
- Nguyen Chi, V., Müller, C., Wolfenstetter, T., Yanovsky, Y., Draguhn, A., Tort, A. B. L., Brankačk, J. Hippocampal respiration-driven rhythm distinct from theta oscillations in awake mice. Journal of Neuroscience. 36 (1), 162-177 (2016).
- Chung, J., Sharif, F., Jung, D., Kim, S., Royer, S. Micro-drive and headgear for chronic implant and recovery of optoelectronic probes. Scientific Reports. 7 (1), 2773 (2017).
