Um modelo de Glaucoma induzido por sutura Circumlimbal em ratos e camundongos
Summary
Hipertensão ocular crônica é induzida pela aplicação de uma sutura de circumlimbal em ratos e camundongos, levando à deterioração funcional e estrutural das células ganglionares da retina consistentes com glaucoma.
Abstract
A sutura de circumlimbal é uma técnica para induzir o glaucoma experimental em roedores por cronicamente elevar a pressão intra-ocular (Pio), um conhecido fator de risco para o glaucoma. Este protocolo demonstra um guia passo a passo sobre essa técnica no longo Evans ratos e camundongos C57BL/6. Sob anestesia geral, uma “” sutura em bolsa é aplicada na conjuntiva, ao redor do Equador e para trás ao limbo do olho. O olho companheiro serve como um controle não tratado. Ao longo da duração do nosso estudo, que foi um período de 8 semanas para ratos e 12 semanas para ratos, IOP manteve-se elevado, medida regularmente pelo tonometria de rebote em animais conscientes sem anestesia tópica. Em ambas as espécies, os olhos suturados mostraram electroretinogram características consistentes com disfunção da retina interna preferencial. Tomografia de coerência óptica mostrou desbaste seletivo da camada retinal da fibra do nervo. Histologia da retina rato na secção encontrada reduzida densidade de células na camada de células ganglionares, mas nenhuma mudança nas outras camadas celulares. Coloração de retinae rato apartamento montado com um marcador específico de células ganglionares (RBPMS) confirmou a perda de células ganglionares. A sutura de circumlimbal é um simples, minimamente invasiva e econômica maneira de induzir hipertensão ocular que leva à lesão de células ganglionares em ratos e camundongos.
Introduction
Modelos animais fornecem que uma plataforma importante para a investigação do laboratório de celular processos subjacentes patogênese de glaucoma, bem como avaliar possíveis intervenções terapêuticas. Foram desenvolvidos vários modelos inducible para produzir elevação sustentada da pressão intra-ocular (Pio), o mais importante fator de risco para o glaucoma. Métodos que foram aplicados para elevar o IOP incluem: injeção salina hipertônica no episcleral veias1, fotocoagulação laser da malha trabecular2 ou do estroma veias3e injeção intracameral de substâncias tais como fantasma vermelho glóbulos4, microbeads5,6 e viscoelástico agentes7. Cada abordagem tem suas vantagens e limitações.
Um bom modelo para o glaucoma deve imitar o processo da doença, com mínima complicação como trauma, inflamação e mídia opacidades. Estas complicações são frequentemente associadas com os procedimentos utilizados para induzir a elevação do IOP e podem confundir a interpretação dos resultados. Por exemplo, paracentese de câmara anterior, mesmo quando substâncias estranhas não são introduzidas, tem demonstrado causar trauma e inflamação que não é representativa de típica mudança glaucomatous8,9. A importância de evitar a inflamação, além de manter a claridade ótica facilita na vivo imaging e Eletrofisiologia para monitorar a progressão da doença. Embora não está claro em que medida estas complicações podem afetar as investigações de doença, pode ser melhor evitar penetrar o olho durante a indução de modelo. A abordagem de sutura circumlimbal evita a penetração do globo e facilita na vivo avaliação longitudinal da estrutura da retina e função. Mais importante, este modelo difere dos anteriores em sua capacidade de retornar o IOP para valores basais remoção da sutura quando necessário. Normalização de IOP pode ser útil para estudar o celular e moleculares correlações do gânglio reversível e irreversível celulares lesão10,11,12,13,14.
Este artigo centra-se na técnica de indução de modelo. Caracterização da lesão retiniana induzida por este modelo em ratos e camundongos pode ser encontrada em maior detalhe em outro lugar15,16,17,18,19.
Protocol
Representative Results
Discussion
A sutura de circumlimbal é um novo modelo de hipertensão ocular crônica. Além dos estudos, do qual os resultados representativos são oriundos de16,18, este modelo animal tem sido utilizado em uma série de recentes estudos15,23,24,25 ,26. Comparação entre estes relatórios anteriores mostra que…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho é financiado pela National Health e Conselho de pesquisa médica da Austrália projeto grant (1046203), bolsa de futuro de Conselho de pesquisa australiano (FT130100338).
Materials
| normal saline | Baxter International Inc | AHB1323 | Maintain corneal hydration during surgery |
| Chlorhexadine 0.5% | Orion Laboratories | 27411, 80085 | Disinfection of surgical instrument |
| Isoflurane 99.9% | Abbott Australasia Pty Ltd | CAS 26675-46-7 | Proprietory Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for suture procedure |
| ocular lubricant | Alcon Laboratories | 1618611 | Proprietory Name: Genteal, ocular lubricant to keep the other eye moist |
| Needle holder (microsurgery) | World Precision Instruments | 555419NT | To hold needle during ocular surgery |
| Proxymetacaine 0.5% | Alcon Laboratories | CAS 5875-06-9 | Topical ocular analgesia |
| Scissors (microsurgery) | World Precision Instruments | 501232 | To cut excessive suture stump during ligation |
| Surgical drape | Vital Medical Supplies | GM29-612EE | Ensure sterile enviornment during surgery |
| Suture needle for rats (microsurgery) | Ninbo medical needles | 151109 | 8-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm |
| Suture needle for mice (microsurgery) | Ninbo medical needles | 160905 | 10-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm |
| Tweezers (microsurgery) | World Precision Instruments | 500342 | Manipulate tissues during ocular surgery |
| rebound tonometer | TONOLAB, iCare, Helsinki, Finland | TV02 | for intraocular pressure monitoring |
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