Эта статья предоставляет метод эффективно и целесообразно для построения листы многослойного стволовых клеток с свойства благоприятные стволовых клеток.
Терапия стволовой клетки показывает многообещающее будущее в регенерации потерпевшего органов и тканей и клеток листа техника была разработана для улучшения удержания низкой клеток и бедными выживания в целевой зоне. Однако во время процесса строительства в vitro срочно необходима решение для сохранения стволовых клеток биологическую и увеличивая объем ячейки в ячейку листа. Здесь этот протокол представляет метод для построения клеток многослойного листа с благоприятным стволовых клеток биологическую и оптимальной работоспособности. Decellularized свинину перикарда (DPP) подготовлен фосфолипазы decellularization метод2 (2пла) как на эшафот ячейки листа, и изолированы и расширена в сеяный клетки костного мозга крысы мезенхимальных стволовых клеток (BMSCs). Временные многослойных клеточной структуры листа строится с помощью RAD16-я пептид гидрогеля. Наконец лист клетки культивировали с системой динамического перфузии стабилизировать структуру трехмерного (3D), и ячейку листа могут быть получены после 48-часовой культуры в пробирке. Этот протокол предоставляет метод эффективно и целесообразно для создания многослойных стволовых клеток лист и ячейку листа могут быть разработаны как продукт терапии благоприятные стволовых клеток в будущем.
Терапия стволовой клетки было сообщено как эффективным средством лечения многих заболеваний; Однако низкий ячейки хранения и бедными выживания в целевой зоне остаются критические вопросы, после инъекции традиционные стволовых клеток. Для решения этой проблемы, ткани инженерных ученые разработали технику ячейки листа. Однослойное ячейки листа с нетронутыми внеклеточная матрица сначала был подготовлен с помощью температуры ответ культуры блюдо1, и его последующие исследования сообщили значительные улучшения сохранения стволовых клеток и выживания в infarcted Площадь2,3. Среди методов создания многослойных ячейки листа было сообщено как эффективную стратегию для улучшения выживание клетки и клетки листа терапевтический эффект3,4. С тех пор ученые работали на разработке методов строительства различных клеток листа для того, чтобы увеличить количество клеток, свойства стволовых клеток и механические свойства ячеек листов. До настоящего времени определенные типы клеток листа были построены и учился в лечении инфаркта миокарда5, хряща травмы6, и кожи раны7.
Биологическую стволовых клеток до пересадки показал возникающих влияние на регенерацию тканей потерпевшего, и стратегии строительства различных клеток листа имеют различные эффекты на стволовые клетки. С одной стороны вырожденная ячеек листов только состояла из высокой плотности стволовых клеток, и естественных внеклеточной матрицы могут быть приобретены укладки листов однослойное клетки8 или с помощью магнитных ткани, инженерной техники9. С другой стороны исследователи разработали различные леса для обеспечения адекватного механическую прочность и поддержки клеток роста10,11,12, что позволило низкий стволовых клеток, заполнение плотности для обеспечения питания питания. Однако несмотря на эти подходы, поставки низкой эффективности питания в структуре многослойных ячейки листа остается серьезной проблемой во время строительства в пробирке . Таким образом эффективно и целесообразно ячейки листа строительство системы срочно требуется.
Этот протокол описывает шаги по подготовке multilayeredmesenchymal стволовых клеток (МСК) ячейку листа. В этой конструкции системы клетки листа механическую прочность обеспечивается DPP. Основываясь на этом леску, 3D клеточной структуры может быть быстро построен с RAD16-я пептид гидрогеля и динамический перфузия системы используется для культуры многослойных ячейки листа, чтобы стабилизировать 3D клеточную структуру листа и обеспечить достаточное питание поставка для клеток. С помощью этой системы, многослойных BMSC лист был успешно подготовлен и выставлены оптимального терапевтического эффекта на инфаркт миокарда крыс модель13.
Настоящий Протокол сообщает эффективный метод для построения многослойных листов MSC. Эта ячейка листа экспонатов оптимальная механическая прочность, плотность посева высокой клеток и отпорности благоприятные стволовых клеток. Использование BMSCs в качестве примера, 3D клеточной структ?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана Фонд национального естественных наук Китая (Грант номер 31771064); Наука и технологии планирования проекта провинции Гуандун (Грант номера 2013B010404030, 2014A010105029 и 2016A020214012); Наука и технологии планирования проекта Гуанчжоу (Грант номер 201607010063); и студентов инноваций и предпринимательства программа обучения (Грант номер 201610559028); Национальный научный фонд для молодых ученых Китая (предоставить номер 31800819).
Phospholipase A2 | Sigma-Aldrich | P6534 | |
Sodium deoxycholate | Sigma-Aldrich | D6750-100G | |
Phosphate buffer | Gibco BRL | 89033 | |
Penicillin streptomycin / amphotericin | Gibco BRL | 15640055 | |
Buffer bicarbonate | Sigma-Aldrich | C3041 | |
Table concentrator | Changzhou Aohua Instrument Co. | KT20183 | |
Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM) | Corning Cellgro | 10-014-CVR | |
South American fetal bovine serum | Gibco BRL | 10270-106/P30-3302 | |
L-Glutamine | Corning Cellgro | 25-005-CI | |
0.25% Trypsin/2.21 mM EDTA | Corning Cellgro | 25-053-CI | |
Biosafety cabinet | Esco,Singapore | AC2-2S1 | |
Constant temperature incubator | Esco,Singapore | CLS-170B-8 | |
Centrifuge tube | Corning | 430790 | |
EP tube | Axygen | 31617934 | |
Centrifugal machine | TOMOS | 1-16R | |
Sucrose | Sigma-Aldrich | S9378-500G | |
Pura Matrix | BD | 354250 | |
Dynamic perfusion culture system | Minucells and Minutissue | D-93077 | |
Peristaltic pump | Ismatec | IPC N8 | |
Pump tubing | Ismatec | Nr.1306 | |
MINUSHEET 1300 | Regensburg | tissue carrier components | |
MINUSHEET | Regensburg | dynamic perfusion system | |
MINUSHEET 0006 | Regensburg | gas exchange equipment | |
MINUSHEET 0002 | Regensburg | 500 mL glass bottle | |
MINUSHEET 1301 | perfusion culture container |