구슈강(GSK) 생체내 및 체외 실험을 위한 과립 준비
Summary
본 품은 동물 연구를 위한 구슈강 과립 및 시험관 내 실험을 위한 혈청을 함유하는 GSK 과립의 작동 용액을 준비하기 위한 상세한 프로토콜을 제공한다. 이 프로토콜은 한방 의약품의 약리학적 조사뿐만 아니라 생체 내 및 시험관 내 실험 모두에 대한 처방에 적용 할 수 있습니다.
Abstract
중국 전통 한방 의학은 폐경 후 골다공증 (POP)과 같은 많은 질병을 치료하는 대체 방법으로 역할을합니다. Gushukang (GSK) 과립, 중국에서 판매 처방, POP 치료에 뼈 보호 효과. 신체에 투여하기 전에, 하나의 표준 준비 절차가 일반적으로 필요합니다, 이는 원시 허브에서 활성 성분의 방출을 촉진하고 약리효과뿐만 아니라 치료 결과를 향상시키는 것을 목표로. 본 연구는 생체 내 및 시험관내 실험 분석에서 GSK 과립을 사용하기 위한 상세한 프로토콜을 제안한다. 저자는 먼저 생체 내 조사를 위한 과립의 동물적 적당한 복용량을 계산하기 위하여 상세한 프로토콜을 제공합니다: 계량, 용해, 저장 및 관리. 둘째, 이 문서에서는 마이크로 CT 스캐닝프로토콜과 골격 파라미터 측정에 대해 설명합니다. 샘플 전처리, 마이크로 CT 기계를 실행하기 위한 프로토콜 및 뼈 파라미터의 정량화를 평가하였다. 셋째, 혈청 함유 GSK 과립이 제조되고, 약물 함유 혈청은 시험관내 골다강 형성 및 골아세포 발생을 위해 추출된다. GSK 과립은 3일 연속적으로 쥐에게 하루에 두 번 위내 투여하였다. 혈액을 수집, 원심 분리, 비활성화, 필터링. 마지막으로, 혈청을 희석시키고 골성형술 및 골아합형성을 수행하기 위해 사용되었다. 여기에 기술된 프로토콜은 과립과 같은 한방 처방 의약품의 약리학적 조사를 위한 참고자료로 간주될 수 있다.
Introduction
중국 전통 의학 (한의학)은 골다공증을 치료하는 중요한 보완및 대체접근법 중 하나입니다 1,2. 물 달인은 공식 3의 기본 및가장 일반적으로 사용되는 형태입니다. 그러나 단점도 존재: 나쁜 맛, 운송에 대 한 불편, 짧은 수명 및 일관성 없는 프로토콜, 사용 뿐만 아니라 치료 효과 제한. 위의 단점을 방지하고 더 나은 효과를 추구하기 위해 과립이 개발되었으며 널리 사용되어 왔습니다4. 많은 연구가과립5,6,7에서하나 이상의 효과적인 성분의 약리학적 메커니즘을 탐구했지만, 정확한 메커니즘과 기본 약리학적 과정은 여전히 식별하기 가 어렵습니다. 이것은 하나의 과립에서 너무 많은 효과적인 성분이 동시에 유사하거나 반대 효과를 발휘 할 수 있기 때문이다4. 따라서, 체내에 전달하기 전에 과립을 준비하는 하나의 표준 프로토콜의 개발은 치료 결과에 큰 영향을 미칠 뿐만 아니라 생체 내 및 시험관내 분석법 모두에 대해서도 요구된다.
더욱이, 진료소에 있는 과립의 치료 효력은 약리학 기계장치가 너무 복잡하기 때문에 도전을 만드는 시험관 내 또는 ex vivo 연구 결과를 사용하여 확인하고 정확하게 확인하기 어렵습니다. 이 문제를 해결하기 위해 1980 년대8에서 타시노가 약물 함유 혈청의 제조를 처음 제안했습니다. 그 때부터, 수많은 연구자들은 과립9,10,11을포함하여 한방 의학에 약물 함유 혈청을 적용했습니다. 현재, 생체외 조사를 위한 약물 함유 혈청의 선택은 생리적 조건을 밀접하게 모방하는 하나의 전략으로 여겨진다.
구슈강(GSK) 과립은 한의학이론에 비추어 임상실습에 기초하여 폐경기 골다공증(POP)을 치료하기 위해 개발되었다. GSK 과립은 생체 내 난소절제술(OVX) 마우스에서 뼈 손실을 방지하고, 파골세포 뼈 흡수를 억제하며, 골형성골형성을 자극한다4. 따라서, Li 등.12 GSK 과립 뼈 형성을 자극 하는 칼슘 수용 체의 활동을 강화 하 여 OVX 쥐에 뼈 보호 효과 발견. GSK 과립의 약리효과뿐만 아니라 뼈 보호 효과를 확인하기 위해 저자는 작동 용액 및 약물 (GSK 과립)-함유 혈청의 제조를위한 상세한 절차를 제공합니다. 더욱이, 본 호는 OVX 유도 골다공증 마우스 모델 및 GSK 과립 함유 혈청에서 시험관내 파골세포형성/골다공증 발생에 대한 GSK 과립의 적용에 대해 설명한다.
GSK 과립은 여러 허브13,14로 구성되며 식염수로 쉽게 완전히 용해될 수 있다. 따라서 식염수는 차량 역할을 합니다. 샴-조작마우스(Sham) 및 OVX 마우스는 과립 투여 마우스와 동일한 부피의 식염수를 투여하였다. 마우스에 대한 GSK 과립의 동등한 용량은 Meeh-Rubner 방정식15에기초하여 계산되었다. 이 방정식은 안전한 복용량을 얻는 이점이없을뿐만 아니라 약리효과15를보장합니다. GSK 과립의 3개의 투여량은 다음과 같이 생성되었다: (1) GSKL: OVX + 저용량 GSK 과립, 2 g/kg/day. (2) GSKM: OVX + 중간 용량 의 GSK 과립, 4 g / kg / 일. (3) GSKH: OVX + 고용량 GSK 과립, 8 g/ kg/일. GSKL, GSKM 및 GSKH 군의 마우스를 위내 로 GSK 과립을 투여하였다. 탄산칼슘(600 mg/정제)과 비타민 D3(125 국제 단위/정제)를 함유하고, 예를 들어, 골다공증을 치료 및 예방하기 위한 성숙하고 시판된 제품(예를 들어, 칼트레이트[CAL])에서, 양성 대조군으로 사용하였다.
Protocol
Representative Results
Discussion
한 의학 제제의 과립 제형 또는 처방에 대 한 일반적인 선택 중 하나가 되고있다. GSK 과립은 임상 경험 또는 한의학 이론에 근거한 몇몇 한방 약으로 구성되고,적은 부작용으로 더 나은 치료 효력을 발휘합니다 4. 물 달인에 비해, 과립은 다음과 같은 장점이 있습니다 : 좋은 맛, 배달의 편리성, 장기 저장, 표준 프로토콜 및 일관된 치료 효과뿐만 아니라 높은 생산성. 현재, 과립은 …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 중국 국립 자연과학 재단(81804116, 81673991, 81770107, 81603643, 81330085), 혁신팀, 중국 과학기술부(2015RA4002 ~ WYJ)의 보조금으로 지원되었다. 혁신팀, 중국교육부(IRT1270 to WYJ), 상하이 TCM 만성질환 의료센터(2017ZZ01010 ~ WYJ), 중국 전통 의학 계획 개발을 가속화하기 위한 3년간의 조치(ZY(2018-2020-WYJ) -CCCX-3003 국가 핵심 연구 개발 프로젝트 (2018YFC1704302).
Materials
| α-MEM | Hyclone laboratories |
SH30265.018 | For cell culture |
| β-Glycerophosphate | Sigma | G5422 | Osteoblastogenesis |
| Caltrate (CAL) | Wyeth | L96625 | Animal interventation |
| C57BL/6 mice | SLAC Laboratory Animal Co. Ltd. |
Random | Ainimal preparation |
| Dexamethsome | Sigma | D4902 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2438 | Cell frozen |
| Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA) | Sangon Biotech | 60-00-4 | Samples treatmnet |
| Fetal bovine serum | Gibco | FL-24562 | For cell culture |
| Gushukang granules | kangcheng companyin china | Z20003255 | Herbal prescription |
| Light microscope | Olympus BX50 | Olympus BX50 | Images for osteoclastogenesis |
| L-Ascorbic acid 2-phosphate sequinagneium slat hyclrate | Sigma | A8960-5G | Osteoblastogenesis |
| Microscope | Leica | DMI300B | Osteocast and osteoblast imagine |
| M-CSF | Peprotech | AF-300-25-10 | Osteoclastogenesis |
| Μicro-CT | Scanco Medical AG |
μCT80 radiograph microtomograph | Bone Structural analsysis |
| RANKL | Peprotech | 11682-HNCHF | Osteoclastogenesis |
| Sprague Dawley | SLAC Laboratory Animal Co. Ltd. |
Random | Blood serum collection |
| Tartrate-Resistant Acid Phosphate (TRAP) Kit | Sigma-Aldrich | 387A-1KT | TRAP staining |
Riferimenti
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