Summary
Her beskriver vi protokollerne for anvendelse af definerede mekaniske belastninger til muse kalve og til overvågning af samtidige intramuskulære trykændringer. De eksperimentelle systemer, som vi har udviklet, kan være nyttige til at undersøge mekanismen bag de gavnlige virkninger af motion og massage.
Abstract
Massage er generelt anerkendt for at være gavnlig for at lindre smerter og inflammation. Selv om tidligere undersøgelser har rapporteret anti-inflammatoriske effekter af massage på skeletmuskulatur, de molekylære mekanismer bag er dårligt forstået. Vi har for nylig udviklet en simpel anordning til at anvende lokale cykliske kompression (LCC), som kan generere intramuskulær trykbølger med varierende amplituder. Ved hjælp af denne enhed, har vi vist, at LCC modulerer inflammatoriske reaktioner af makrofager in situ og Linderer immobilisering-induceret muskelatrofi. Her beskriver vi protokoller for optimering og anvendelse af LCC som en massage-lignende intervention mod immobilisering-induceret betændelse og atrofi af skeletmuskulatur af mus baglemmer. Den protokol, som vi har udviklet, kan være nyttig til at undersøge mekanismen underliggende gavnlige virkninger af motion og massage. Vores eksperimentelle system giver en prototype af den analytiske tilgang til at belyse den mekaniske regulering af muskelhomeostase, selv om yderligere udvikling skal gøres for mere omfattende undersøgelser.
Introduction
Massage er generelt anerkendt for at være gavnlig for både smertelindring og forbedring af den fysiske præstation blandt konkurrencedygtige atleter og ikke-atleter ens1,2. Faktisk, tidligere undersøgelser har vist, at massage undertrykker lokale inflammation3 og prompter opsving fra post-motion muskelskader4,5. Molekylære mekanismer underliggende de gavnlige virkninger af massage forbliver stort set ukendte.
En af vanskelighederne med den mekanistiske undersøgelse af massage vedrører reproducerbarhed af eksperimentelle teknikker, hvormed massage-lignende interventioner testes. I tidligere undersøgelser, eksperimentelle procedurer, der efterligner massage for det meste involverer anvendelse af fysiske indgreb ved hjælp af praktikere kropsdele, såsom palmer og fingre6,7,8. Dette gør det vanskeligt præcist at gengive deres størrelse, hyppighed, varighed og tilstand.
Mange enheder er blevet udviklet til at anvende definerede mekaniske belastninger til målvævet. For eksempel har Zeng et al. udviklet et pneumatisk system til længde-klog mekanisk lastning til rotter ' baglemmer9 og Wang et al. har udviklet en mekatronisk anordning, der kan anvende massage-lignende mekaniske belastninger til baglemmer af rotter og kaniner med feedback kontrol i realtid10. Sammenlignet med dem, vores lokale cyklisk kompression (LCC) system er meget enklere, krævende langt mindre omkostninger til byggeri. Ikke desto mindre, vi kan reproducere de intramuskulære trykændringer, der genereres under mild muskelsammentrækning. Ved hjælp af denne enhed, har vi med succes påvist, at massage-lignende mekaniske interventioner moduere lokale interstitiel væskedynamik og lindre immobilisering-induceret muskelatrofi11.
Her beskriver vi detaljerne i vores enhed og protokollen, som kan hjælpe med at udforske de molekylære mekanismer bag de positive virkninger af øvelser og massage. Protokollens skemaer præsenteres som supplerende figur 1.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyreforsøg blev udført under godkendelse af det institutionelle dyrepleje-og anvendelses udvalg under det nationale Rehabiliterings Center for personer med handicap.
1. immobilisering af musen bilaterale baglemmer
Bemærk: mandlige C57BL/6 mus blev anvendt til forsøg i en alder af 11-12 uger efter akklikalering i mindst 7 dage.
- Tilstrækkeligt bedøve en mus ved hjælp af natriumpentobarbital (50 mg/kg IP). Sørg for, at mus ikke reagerer på en bagben tå knivspids.
Bemærk: gennemføre proceduren for immobilisering mellem 10 a.m. og 7 p.m. for at minimere de mulige virkninger på fodring aktivitet af mus. - Anvende kirurgiske bånd til de bilaterale bagdele af musen lagt i en liggende position med knæleddene forlænget og ankel leddene plantar-flexed.
- Placer en aluminiums wire (Se tabel over materialer) på stammen på L4-5 rygsøjlen niveau og spole tråden i en spiral konfiguration omkring bagbenene med 5 mm huller mellem hver drejning af spiral laget (figur 1a). Sørg for ikke at spole ledningen for stramt og undgå at forstyrre den lokale blodgennemstrømning.
- For at minimere muligheden for flugt fra ledningsføring, immobiliserer hofte leddene på positionen af 90 ° bortførelse ved manuelt at justere konfigurationen af aluminiumstråd.
- Returner musene til deres oprindelige bure. 3 h senere, Sørg for, at de inddrive fra anæstesi og adgang til mad og vand som sædvanlig.
- Hus 3-6 immobiliseret mus per bur som før immobilisering.
2. måling af intramuskulær tryk af mus gastrocnemius muskler
Bemærk: flere forskellige vægte af cylindriske enheder (36 g, 66 g og 200 g) blev testet i forsøg med tryk overvågning kombineret med LCC. Denne måling blev udført separat fra forsøgene til at analysere muskelbetændelse og atrofi (Se trin 3-5 for flere detaljer) dvs., de mus, der udsættes for trykmåling, blev ikke anvendt til histologiske analyser.
- Da trykmåling involverer mere invasive procedurer (f. eks. indsnit i huden og nåle indføring) sammenlignet med ledningsføring i bagekstremiteter og LCC, skal der anvendes en blanding af tre anæstetika (medetomidin 0,75 mg/kg, midazolam 4,0 mg/kg og butorphanol 5,0 mg/kg, IP). Sørg for, at mus ikke reagerer på bagbenet tå knivspids.
- Læg musen i en udsat position, lav en 2-mm indsnit med en skalpel på den bageste kalv efter depilating med en elektrisk barbermaskine og semi-sterilisering af hudens overflade med 70% ethanol-og chlorhexidin-gennemblødt absorberende bomuld.
- Indsæt en 20 G permanent nål i gastrocnemius musklen i en stump vinkel (150 °-170 °) til hudens overflade.
- Ved hjælp af plastik kappe af nålen som en guide, placere en sensor af blodtrykket tele meter (Se tabel over materialer) i midten af maven af gastrocnemius muskel, og derefter fjerne kappe fra musklen.
- Efter at have suturere huden med 4-0 nylon sutur, anvende LCC med flere forskellige vægte af cylindriske enheder til kalven i musene (Se trin 3 for flere detaljer), og overvåge intramuskulær tryk ved hjælp af software til biologisk signal analyse (Se tabel over Materialer).
- Returner musene til deres oprindelige bure. 3 h senere, Sørg for, at de inddrive fra anæstesi/analgesi og har adgang til mad og vand som sædvanlig.
3. lokal cyklisk kompression (LCC) på muse kalve
- Med undtagelse af intramuskulær trykmåling og euthanizing (dvs., cervikal dislokation), brug natriumpentobarbital (50 mg/kg IP) til anæstesi.
- Frigør musen fra baglemmer ledninger og læg den i en udsat position med knæleddene forlænget og ankel leddene plantar-flexed, således at kalve står opad. Fastgør ikke muse bagbenene på scenen.
- Påfør LCC til kalven ved lodret bevægelse af en cylindrisk vægtenhed (figur 1b) dækket med en pude pude (figur 1c) ved 1 Hz for 30 min pr. dag, 7 dage.
- Efter hvert anfald af daglig LCC, re-wire musens baglemmer.
4. immunohistokemisk analyse af gastrocnemius
- Euthanize musen ved livmoderhals dislokation under tilstrækkelig anæstesi/analgesi ved intraperitoneal injektion af en blanding af tre anæstetika (medetomidin 0,75 mg/kg, midazolam 4,0 mg/kg, og butorphanol 5,0 mg/kg).
- Efter depilating den bageste kalv overflade, lave en hud Incision, og dissekere gastrocnemius muskler ved at adskille fra tibio-fibular knogle ved hjælp af en kirurgisk saks og hurtigt fryse dem i en optimal skæring temperatur sammensatte løsning.
- Ved hjælp af en cryostat, forberede Cryo-sektion prøver af gastrocnemius muskler på glas slides. Prøverne opbevares i a-80 °C fryser indtil analyse.
- Tag gastrocnemius Cryo-sektions prøverne ud for at blive analyseret fra fryseren og dehydrat dem ved lufttørring ved stuetemperatur.
- Brug en Liquid Blocker-pen til at tegne et område, der indeholder alle Cryo-sektioner på diaset. Cirklen vil forhindre, at løsningerne flyder væk fra diaset.
- Undgå at tørre prøverne ved at placere gliderne i en bakke, hvor der dannes et fugtigt miljø med en vand gennemblødt papir klud.
- Påfør 100 μL blokerende buffer (fosfat-bufferet saltvand (PBS) indeholdende 0,25% kasein, bære protein og 0,015 M natrium-Azid) i 30 minutter ved stuetemperatur.
- Glassene skylles to gange ved inkuberet med PBS-T (PBS, der indeholder 0,1% polyoxyethylensorbitan monolaurat (Se tabel over materialer) i5 min.
- Påfør 100 μL primær antistof fortyndet med PBS på hver prøve, dæk bakken med et låg, og Inkuber natten over ved stuetemperatur.
- Vask 3 gange med PBS-T (5 min. for hver vask).
- Påfør 100 μL sekundært antistof fortyndet med PBS på hver prøve, og Inkuber i 1 time ved stuetemperatur.
Bemærk: Brug Alexa fluor 568-konjugeret sekundært antistof til anti-laminat farvning. For anti-F4/80, anti-MCP-1, og anti-TNF-α, brug Alexa fluor 568-eller 488-konjugeret sekundært antistof. - Vask 3 gange med PBS-T (5 min. for hver vask).
- Påfør 100 μL DAPI-opløsning fortyndet med PBS-T på hver prøve, og Inkuber i 3 minutter ved stuetemperatur.
- Vask 3 gange med PBS-T (5 min for hver).
- Monter prøverne med monterings medium, og dæk dem med dæksedler.
5. histo-morphometrisk analyse af gastrocnemius
- Prøve slidene placeres på et fluorescens mikroskop (Se tabel over materialer), og prøverne vises med en 20 × objektiv med passende filtre (dapi-B, 360/40 nm for excitation og 460/50 nm for emission; GFP-B, 470/40 nm for excitation og 535/50 nm for emission; FRITC, 540/25 Nm for excitation og 605/55 nm for emission.
- Brug af softwaren til billedanalyse (Se tabel over materialer), måle tværsnitsarealet (CSA) af hver myofiber, og tælle antallet af F4/80-, MCP-1-, og TNF-α-positive celler.
Bemærk: Bestem CSA for hver myofiber ved at spore den interne margin i kælderen membran visualiseret med anti-Laminin-2 immun farvning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I overensstemmelse med vores tidligere observationer12, blev CSA af gastrocnemius myofibers signifikant reduceret ved baglemmer immobilisering (figur 2A, B). Desuden afslørede vores immunofluorescens farvnings analyse, at celler, der udtrykker MCP-1 og TNF-α, som begge spiller nøgleroller i reguleringen af inflammatoriske processer13,14, signifikant øget i gastrocnemius muskel væv af immobiliserede baglemmer (MCP-1: figur 2C, F, H; TNF-α: figur 2D, G, I). Sammen med stigningen i celler positivt plettet med F4/80, en markør for makrofager (figur 2C-E, H, I), baglemmer immobilisering syntes at indlede kalve muskelatrofi involverer lokale inflammatoriske reaktioner, herunder makrofag akkumulering. Vi søgte derefter at undersøge, om LCC, en massage-lignende mekanisk intervention, moduleret denne immobilisering-induceret muskelbetændelse og atrofi.
Blandt flere forskellige LCC-størrelser, som vi testede ved at ændre vægten af den cylindriske enhed, var den, der svarer til 50 mmHg intramuskulær trykbølger (LCC med 66 g, figur 3a), mest effektivt til at lindre immobilisering-induceret fald i myofiber CSA og stigning i makrofag ophobning i gastrocnemius muskler (figur 3b). Baseret på resultaterne af myofiber CSA og makrofag akkumulering, vi beskæftigede 66 g LCC for yderligere undersøgelser. Navnlig var de LCC-inducerede intramuskulære trykbølger, hvis spids størrelser var afhængige af den cylindriske enheds vægt, meget ensartede (figur 3a), hvilket indikerer, at LCC er konsistent og reproducerbar som en mekanisk intervention på skeletmuskulatur.
LCC (1 Hz, 30 min per dag, 7 dage) betydeligt linderede immobilisering-induceret fald i myofiber CSA af gastrocnemius muskler (figur 4A, B). Desuden har LCC delvist dæmpet det immobiliserings inducerede fald i kontrakt kraften for triceps surae-muskler (figur 4c). Desuden, LCC tempereret stigninger i F4/80-positive, TNF-α-positive, F4/80-, MCP-1-, og TNF-α-positive celler i gastrocnemius muskelvæv af immobiliserede baglemmer (F4/80, figur 4D, F; MCP-1, figur 4D, G; TNF-α, figur 4E, H). Kollektivt, LCC, som genererer intramuskulær trykbølger med en amplitude på 50 mmHg, lindret immobilisering-induceret muskelatrofi og lokale inflammatoriske reaktioner, herunder makrofag ophobning.
Figur 1: mus bilateral baglemmer immobilisering og lokal cyklisk kompression (LCC) ansøgning.
(A) bilaterale mus baglemmer blev immobiliseret ved spiral ledninger med hofte leddene bortført, knæleddene forlænget, og ankel leddene plantar-flexed. (B) LCC-enhed. C) eksperimentel opsætning for LCC på musens kalv. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: musens baglemmer immobilisering, som hentærer lægmuskler, inducerer en lokal inflammatorisk respons.
A) tværsnits mikrografiske billeder af anti-Laminin-2 immunofluorescens farvning af gastrocnemius muskler. Billeder med høj forstørrelse (højre) henviser til de områder, som er angivet med rektangler i billeder med lav forstørrelse (venstre). Skala stænger, 100 μm. (B) immobilisering induceret muskelatrofi. CSA af gastrocnemius myofibers faldt med perioden med baglemmer immobilisering. For at kvantificere CSA blev 100 myofibers tilfældigt udvalgt. Data præsenteres som betyder ± S.D. *, P < 0,05, envejs ANOVA med post hoc Bonferroni test (n = 3 mus for hver gruppe). (C og D) Mikrografiske billeder af anti-MCP-1 (grøn i C) og anti-TNF-α (grøn i D) og anti-F4/80 (rød) immun farvning. Til flettet præsentation (grøn og rød) er billeder med lav og høj forstørrelse lagt som i (A). Pile peger på dobbelte positive celler for F4/80 og MCP-1 (C) eller TNF-α (D) skala stænger, 100 μm. (E-I) kvantificering af anti-MCP-1, anti-TNF-α og anti-F4/80 immun farvning. Virkningerne af immobilisering blev analyseret med henvisning til perioden med bilateral bagekstremitet immobilisering. Statistisk analyse blev udført med henvisning til» dag 0 «-prøverne (gastrocnemius-muskler fra mus, der ikke blev udsat for immobilisering). Data præsenteres som betyder ± S.D. *, P < 0,05, envejs ANOVA med post hoc Bonferroni test (n = 3 mus for hver gruppe). Dette tal er blevet ændret med tilladelse11. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: virkningerne af LCC med forskellige størrelser på immobilisering-induceret muskelatrofi og betændelse respons.
A) anvendelse af forskellige størrelser af LCC ved at ændre vægten af den cylindriske enhed. Scale bar, 1 s. 36-g, 66-g og 200-g cylindriske enheder producerede henholdsvis 45 mmHg, 50 mmHg og 140 mmHg intramuskulær trykbølger. B) sammenligning af virkningerne af LCC-applikationen på immobiliserede baglemmer med 36-g, 66-g og 200-g cylindriske enheder. CSA af gastrocnemius myofibers (venstre) og F4/80-positive celler (til højre) af LCC-påført kalv blev kvantificeret som relative værdier til dem af kontrol bagben, som ikke blev udsat for LCC, i hver mus. Data præsenteres som betyder ± S.D. *, P < 0,05, envejs ANOVA med post hoc Bonferroni test (n = 4 mus for hver gruppe). Dette tal er blevet ændret med tilladelse11. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: LCC dæmper immobilisering-induceret muskelatrofi og inflammatorisk respons.
(A, B) Lindring af immobilisering-induceret muskelatrofi ved LCC ansøgning. CSA af gastrocnemius myofibers (B) blev analyseret som i figur 2b. Data præsenteres som: ± S.D. *, P < 0,05; * *, P < 0,01, envejs-ANOVA med post hoc Bonferroni-test (n = 6 mus for hver gruppe). (C) faldet i kontrakt kraft af triceps surae muskler efter immobilisering og dets delvise restaurering af LCC. Data præsenteres som betyder ± S.D. *, P < 0,05, parret student's t test (n = 4 mus til kontrol, n = 5 mus til immobilisering gruppe). (D, E) Mikrografiske billeder af anti-MCP-1 (grøn i D), anti-TNF-α (grøn i E) og anti-F4/80 (rød) immunofluorescens farvning af gastrocnemius muskler mobiliseret (top) og immobiliserede baglemmer uden (midterste) og med (bund) LCC ansøgning præsenteres som i figur 2C, D. Skala stænger, 100 μm. (F-H) kvantificering af anti-MCP-1, anti-TNF-α og anti-F4/80 immun farvning. Vi sammenlignede lægmuskler af immobiliserede baglemmer med og uden LCC ansøgning. Data præsenteres som: ± S.D. *, P < 0,05; * *, P < 0,01, envejs-ANOVA med post hoc Bonferroni-test (n = 6 mus for hver gruppe). Dette tal er blevet ændret med tilladelse11. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Supplerende figur 1: skematisk gengivelse af forsøgsprotokoller. Venligst klik her for at downloade figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vi har beskrevet en metode til at anvende en massage-lignende mekanisk stimulus, som har anti-inflammatoriske virkninger. Vores system har følgende fordele, selv i forhold til tidligere rapporterede. For det første fastlagde tidligere undersøgelser ikke kvantitativt de mekaniske kræfter, der blev anvendt2 , eller definerede deres størrelser baseret på målingen på kroppens overflade, men ikke i vævene10. I modsætning hertil målte vi intramuskulær tryk ved hjælp af et blodtryk tele meter. For det andet tillod den enkle opbygning af vores enhed (figur 1b) os at konstruere systemet med høj konsistens og reproducerbarhed (figur 3a) til en relativt lav pris. For det tredje vedrører vores intervention (LCC) fysisk aktivitet (mild muskelsammentrækning) med hensyn til intramuskulær trykændringer (50 mmHg15). Vores tilgang vil give et videnskabeligt grundlag for massage-lignende intervention som en mulig terapeutisk/forebyggende procedure, der mindsker den nedgang af fysisk inaktivitet16.
Det mest kritiske trin i vores protokol er placeringen af musens baglemmer (protokol trin 3,3). Vi er nødt til at anvende LCC i retningen vinkelret på lægmuskler; ellers vil muskelvæv blive delvist klemt og beskadiget, selv når den cylindriske 66-g-enhed anvendes.
Begrænsningen af LCC metode omfatter kravet om anæstesi, som kan have nogle virkninger på muskel metabolisme. Også, vi kan ikke helt udelukke påvirkninger af lille muskelsammentrækning, der kan være forårsaget som en refleks til skarpe påvirkninger under LCC ansøgning.
Afslutningsvis har vi påvist, at interstitiel væskebevægelse medierer LCC-effekterne11. Vi kan muligvis fremkalde interstitiel flow mere effektivt ved at ændre tilstanden for cyklisk komprimering. For eksempel, kompression af sinusformet tilstand kan være bedre i forhold til skarpe slag, der anvendes i vores nuværende undersøgelse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at der ikke er nogen konkurrerende interesser forbundet med manuskriptet.
Acknowledgments
Vi takker K. Nakanishi, K. Hamamoto, N. Kume og K. Tsurumi for deres konsekvente støtte i hele projektet. Dette arbejde blev delvis støttet af den Intramural forskningsfond fra det japanske ministerium for sundhed, arbejde og velfærd; Tilskud-i-støtte til videnskabelig forskning fra Japan Society for fremme af videnskab; MEXT-understøttet program for den strategiske Research Foundation på private universiteter, 2015-2019 fra det japanske ministerium for uddannelse, kultur, sport, videnskab og teknologi (S1511017).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Aluminum wire | DAISO JAPAN | B028 | An aluminum wire is used to avoid escaping restriction by the wire |
| Blood pressure telemeter | Millar | SPR-671 | A blood pressure telemeter is used to mesure intramuscular pressure. |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI is a fluorescent probe which is commonly used to stain DNA for fluorescent microscopy. |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 (Dilution ratio, 1:500) | Invitrogen | A11034 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Goat anti-rat Alexa Fluor 568 (Dilution ratio, 1:500)) | Invitrogen | A11077 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| ImageJ | NIH | N/A | Analysis software for image |
| LabChart8 | ADInstrumens | Analysis software for acquiring biological signals. | |
| Prolong gold | Thermo Fisher Scientific | P36930 | Prolong gold is for mounting stained samples. |
| Protein Block Serum-Free | Dako | X090930-2 | For blocking non-specific background staining in immunohistochemical procedures. |
| Rat monoclonal anti-laminin-2 antibody (Dilution ratio, 1:1000) | Sigma Aldrich | L0663 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Rat monoclonal anti-F4/80 antibody (Dilution ratio, 1:500) | Abcam | ab6640 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Rabbit polyclonal anti-MCP-1 antibody (Dilution ratio, 1:1000) | Abcam | ab25124 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Rabbit polyclonal anti-TNF-α antibody (Dilution ratio, 1:1000) | Abcam | ab66579 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Surgical tape | 3M Japan | 1530EP-0 | Surgical tape is used to restrict joint movement. |
References
- Furlan, A. D., Imamura, M., Dryden, T., Irvin, E. Massage for low back pain: an updated systematic review within the framework of the Cochrane Back Review Group. Spine. 34 (16), 1669-1684 (2009).
- Robertson, A., Watt, J. M., Galloway, S. D. R. Effects of leg massage on recovery from high intensity cycling exercise. British Journal of Sports Medicine. 38 (2), 173-176 (2004).
- Waters-Banker, C., Butterfield, T. A., Dupont-Versteegden, E. E. Immunomodulatory effects of massage on nonperturbed skeletal muscle in rats. Journal of Applied Physiology. 116 (2), 164-175 (2014).
- Haas, C., et al. Massage timing affects postexercise muscle recovery and inflammation in a rabbit model. Medicine & Science in Sports & Exercise. 45 (6), 1105-1112 (2013).
- Crane, J. D., et al. Massage therapy attenuates inflammatory signaling after exercise-induced muscle damage. Science Translational Medicine. 4 (119), 119ra113 (2012).
- Bove, G. M., Harris, M. Y., Zhao, H., Barbe, M. F. Manual therapy as an effective treatment for fibrosis in a rat model of upper extremity overuse injury. Journal of the Neurological Sciences. 361, 168-180 (2016).
- Andrzejewski, W., et al. Increased skeletal muscle expression of VEGF induced by massage and exercise. Folia Histochemica et Cytobiologica. 53 (2), 145-151 (2015).
- Mantovani Junior, N., et al. Effects of massage as a recuperative technique on autonomic modulation of heart rate and cardiorespiratory parameters: a study protocol for a randomized clinical trial. Trials. 19 (1), 459 (2018).
- Zeng, H., Butterfield, S., Agarwal, F., Haq, T., Zhao, Y. An engineering approach for quantitative analysis of the lengthwise strokes in massage therapies. Journal of Medical Devices. 2 (4), (2008).
- Wang, Q., et al. A mechatronic system for quantitative application and assessment of massage-like actions in small animals. Annals of Biomedical Engineering. 42 (1), 36-49 (2014).
- Saitou, K., et al. Local cyclical compression modulates macrophage function in situ and alleviates immobilization-induced muscle atrophy. Clinical Science. 132 (19), 2147-2161 (2018).
- Onda, A., et al. A New mouse model of skeletal muscle atrophy using spiral wire immobilization. Muscle Nerve. 54 (4), 788-791 (2016).
- Luster, A. D.
- Reid, M. B., Li, Y. P. Tumor necrosis factor-α and muscle wasting: a cellular perspective. Respiratory Research. 2 (5), 269-272 (2001).
- Baumann, J. U., Sutherland, M. D., Hangg, A. Intramuscular pressure during walking: An experimental study using the wick catheter technique. Clinical Orthopaedics Related Research. 145, 292-299 (1979).
- Lee, I., et al. Effect of physical inactivity on major non-communicable diseases worldwide: an analysis of burden of disease and life expectancy. Lancet. 380, 219-229 (2012).
