腫瘍組織学におけるマウス肺の多灌流とインフレーション
Summary
この方法の目的は、肺腫瘍病理の検査および肺への転移の評価のためのマウス肺の灌流、膨張、および固定のための簡単で効率的な方法を提示することである。
Abstract
肺の病態を評価する能力は、肺がん研究やがん転移の分野で重要です。調達した組織の質を犠牲にすることなく、研究から迅速かつ効率的に壊死を行うことも同様に重要です。このプロトコルの目的は、下流の組織学的分析のためにマウス肺を迅速に穿ファズ、膨張、および固定する方法を提示することです。この方法は、肺の膨張を標準化しません。したがって、特別な手順や機器を必要とせず、心臓を通して灌流した後の気管を通して直接固定液を植え付けるだけです。これにより、腫瘍のサイズ、組織学、およびスコアリングの十分な推定が可能になります。これはまた肺組織の固定の前に凍結組織のコレクションを可能にする。この方法は、後で肺の形態学的定量を可能にしないために制限されています。しかし、遺伝子組み換えマウスモデル(GEMM)、異種モデル、異種移植片腫瘍および転移研究による肺腫瘍分析には十分です。
Introduction
肺腫瘍発生や癌転移から肺への様々なマウスモデルは、複雑なGEMMから発がん性および異種移植片モデルに至るまで、癌細胞が心臓内、胸腔内、尾静脈、または肺内に腫瘍を確立する他の方法を介して注入される同種および異種移植片モデルに至るまで存在する。これらのモデルはすべて、肺組織学と病理の組織学的評価に共通する必要性を共有しています。したがって、余分な血液を除去するために肺を浸透させ、肺を膨らませて肺のアーキテクチャを明確に可視化しながら、マウスの壊死を行う堅牢かつ迅速な方法が必要である。速度は、単一の時点で数十匹のマウスから肺を収集する必要があるため、この手順の重要な要素です。この手順は、マウスあたり6分以内に実行できます。
この手順は腫瘍組織学を評価するのに十分ですが、肺のステテロロジーまたは形態測定を行いたい人には推奨されません。このような測定では、肺の絶対表面積、絶対体積、歯槽サイズおよび番号1の計算と同様に、肺の膨張を標準化する必要があります。この方法は、一部のイメージングアプローチにも最適ではありません。例えば、ex vivoモルフォメトリック解析のためにμCTを介して肺をイメージングするには、肺が空気2で満たされたままである必要があります。空気空間および寸法の保存が第一の関心事である場合、過灌流脱水技術3、4によって肺を固定することが推奨される。このモデルの最大の懸念の1つは、肺胞壁の破裂の可能性であり、肺気腫の研究における使用を減らす。しかし、肺気腫の研究のための肺の固定のための推奨手順は、一定の流体圧力下で(ここで説明するプロトコルに類似した)10%ホルマリンの気管内点眼点眼によって、またはその場で固定5で肺を固定することが推奨されるように、まだ非常に似ています。
ここで説明した手順の利点は、一定の流体圧力を必要とせず、肺が完全に膨張するまで膨張し、処置に必要な時間を短縮することです。ここで説明する手順は、毒物学病理学会の軍備間膜によって推奨される方法によく似ており、毒物学研究のための肺固定の最良の方法を推奨する小委員会が結成された。この小委員会内の科学者の大半は、肺が固定剤6に残された時間に様々な勧告があったが、注射器で気管内点眼によって肺を固定することを推奨した。従って、肺の膨張および固定の様々な方法が存在する一方で、本明細書に記載される方法は、下流腫瘍組織学的評価のために肺を迅速に膨張および固定する最適な方法であると提案される。
Protocol
Representative Results
Discussion
マウス肺の灌流、膨張、および固定のために上記の手順は、肺腫瘍組織学および病理解析のためのマウス肺の迅速かつ効率的な調製に最適である。この手順は特別な装置を必要とせず、マウス1個につき6分以内に実行できます。この手順では、インフレや一定の流体圧力に固定体積は必要ありません。この手順は標準化されていないため、肺の立体学的または形態測定を行うことを望む人に?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
本論文では、国立トランスレーショナルサイエンス推進センターが、賞番号UL1TR003096(MDE)、国立心臓、肺、血液研究所肺疾患研修プログラム5T32HL134640(MLD)の下で支援を受けました。
Materials
| 10% buffered formalin | Fisher | 23-245685 | |
| 22 G Needle | BD | 305155 | |
| 3 mL syringe | BD | 309656 | |
| 70% Ethanol | Decon | 2405 | |
| Forceps | Harvard Apparatus | 72-8595 | |
| Heparin | Fisher | H19 | |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Corning | 21-030-CV | |
| Surgical scissors | Harvard Apparatus | 72-8428 |
Riferimenti
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