Observação microscópica multifotípica de vasos em tecido hepático de rato
Summary
Neste experimento, um rato é injetado em sua veia traseira com isotocianato Rhodamine B-dextran que pode manchar vasos sanguíneos. Depois que o fígado é exposto e fixo, uma parte específica do fígado pode ser selecionada para observar o tecido profundo no corpo vivo usando microscopia multifotícula.
Abstract
Observar a dinâmica intravascular do tecido hepático do camundongo nos permite realizar observações e estudos mais aprofundados sobre doenças relacionadas ao tecido do fígado de camundongos. Um rato é injetado com um corante que pode manchar vasos sanguíneos. Para observar o fígado do rato in vivo, ele é exposto e fixado em uma moldura. Imagens bidimensionais dos vasos sanguíneos no tecido hepático são obtidas usando um microscópio multifotono. As imagens dos tecidos nos locais selecionados são adquiridas continuamente para observar alterações a longo prazo; as mudanças dinâmicas dos vasos sanguíneos nos tecidos hepáticos também são observadas. Microscopia multifotítica é um método para observar a função celular e celular em seções de tecido profundo ou órgãos. A microscopia multifotônica tem sensibilidade à microestrutura tecidual e permite a imagem de tecidos biológicos em alta resolução espacial in vivo, proporcionando a capacidade de capturar as informações bioquímicas da organização. A microscopia multifotônio é usada para observar parte do fígado, mas fixar o fígado para tornar a imagem mais estável é problemático. Neste experimento, uma ventosa especial é usada para consertar o fígado e obter uma imagem mais estável do fígado sob o microscópio. Além disso, este método pode ser usado para observar alterações dinâmicas de substâncias específicas no fígado, marcando tais substâncias com corantes.
Introduction
Os vasos sanguíneos podem fornecer nutrientes para vários tecidos de órgãos do corpo humano, e trocar substâncias. Ao mesmo tempo, muitas citocinas, hormônios, drogas e células também funcionam através do transporte vascular para locais específicos. Observar alterações vasculares no tecido hepático pode ajudar na compreensão do fluxo sanguíneo no tecido hepático e no transporte de substâncias, e auxiliar na análise de certas doenças vasculares1,2.
Há muitas maneiras de observar os vasos sanguíneos do fígado em camundongos. Entre elas, a microscopia óptica tem muitas limitações na observação do tecido vascular opaco3. A microscopia multifotúna pode ser usada para imaginar os vasos sanguíneos de fígados vivos com alta resolução não invasiva4. Não só podem ser obtidas imagens tridimensionais dos vasos sanguíneos, mas a técnica também pode ser usada para ajudar a organizar o tecido para observar efeitos biológicos; além disso, todo o tecido pode ser imageado em vez de apenas os microvexis como na tomografia computadorizada e ressonância magnética5.
A microscopia multifotônio pode ser usada para detectar efetivamente sinais fluorescentes dispersos em tecido vivo profundo, com menos fototoxicidade6. Portanto, a atividade do tecido vivo pode ser garantida, e a quantidade de dano pode ser reduzida. A microscopia multifotônio tem melhor poder penetrante do que a microscopia confocal, permitindo que camadas mais profundas sejam observadas7, fornecendo imagens 3D únicas. A microscopia multifotônio é agora frequentemente usada na imagem dos nervos cranianos8 e foi estendida ao estudo da dinâmica neuronal em camundongos vivos9,10,11.
Neste experimento, após a rotulagem fluorescente dos vasos sanguíneos do rato, o fígado é fixado em uma estrutura, e a dinâmica dos vasos sanguíneos no tecido hepático vivo pode ser vista usando microscopia multifotítica. Este experimento demonstra como marcar substâncias específicas, usar microscopia multifotônica para ajudar a observar um local dentro do tecido, observar eventos celulares no tecido intercelular, fazer medições fotoquímicas12,13,14, e observar a dinâmica material dentro do tecido vivo15. Por exemplo, o marcador endotelial tumoral 1 (TEM1) foi identificado como um novo marcador de superfície regulado nos vasos sanguíneos e estroma em muitos tumores sólidos, marcando fragmento variável de cadeia única (scFv) 78 contra TEM1, e então microscopia multifotona pode ser usada para localização de hemangioma de camundongos e avaliação de tumores16.
Protocol
Representative Results
Discussion
Observar um tecido vivo específico é um meio eficaz de compreender as mudanças, localização e efeitos biológicos do material dentro do tecido17. Neste experimento, os passos importantes são a fixação do fígado com uma fixação de imagem de órgão, que pode resolver o problema dos artefatos de movimento devido à respiração e batimentos cardíacos, e o uso de um microscópio multifotônio para observação. Usando este método, os tecidos internos do fígado in vivo são observados at…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciência Natural da China (81772133, 81902444), o Fundo de Ciência Natural de Guangdong (2020A1515010269, 2020A1515011367), o Projeto de Pesquisa em Ciência e Tecnologia em Saúde Cidadã de Guangzhou (201803010034, 201903010072) e o Projeto de Inovação Médica Militar (17CXZ008).
Materials
| 1 mL syringe x 2 | Hunan Pinan Medical Devices Technology | YA0551 | |
| 5 W heating pad | BiolinkOptics Technology | BL336 | |
| 75% absolute ethanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
| Absorbent cotton ball | Healthy Sanitation Kingdom | ||
| Mouse surgical instrument | RWD Life Science | SP0001-G | Including scissors and tweezers |
| Multiphoton microscopy | Olympus | FV1200MPE | |
| Organ imaging fixture | BiolinkOptics Technology | BL336 | Including suction cup, hose, negative pressure pump and bracket |
| Rhodamine B isothiocyanate–Dextran | Sigma | R9379 | |
| Shaving machine | Lei Wa | RE-3201 | |
| Sodium pentobarbital | Sigma | P3761-25G |
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