Un modello murino Goldblatt modificato a 2 rene 1 clip (2K1C) è stato sviluppato utilizzando tubi in poliuretano per avviare la stenosi dell'arteria renale, inducendo un aumento dell'espressione della renina e un danno renale. Qui, descriviamo una procedura dettagliata di preparazione e posizionamento del bracciale sull'arteria renale per generare un modello murino 2K1C riproducibile e coerente.
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Articolo metodologico
Un modello di topo modificato a due rene una clip della regolazione della renina nella stenosi dell'arteria renale
In questo articolo
Sommario
Abstract
La stenosi dell'arteria renale è una condizione comune nei pazienti con malattia coronarica o vascolare periferica in cui il sistema renina-angiotensina aldosterone (RAAS) è iperattivato. In questo contesto, c'è un restringimento delle arterie renali che stimola un aumento dell'espressione e del rilascio di renina, la proteasi limitante nella RAAS. Il conseguente aumento dell'espressione della renina è un noto driver dell'ipertensione renovascolare, frequentemente associata a danno renale e danno agli organi terminali. Pertanto, vi è un grande interesse nello sviluppo di nuovi trattamenti per questa condizione. Il meccanismo molecolare e cellulare del controllo della renina nella stenosi dell'arteria renale non è completamente compreso e merita ulteriori indagini. Per indurre la stenosi dell'arteria renale nei topi, è stato sviluppato un modello murino Goldblatt modificato 2 rene 1 clip (2K1C). Il rene destro è stato stenoso in topi wild type e topi operati fittizi sono stati utilizzati come controllo. Dopo la stenosi dell'arteria renale, abbiamo determinato l'espressione della renina e il danno renale. I reni sono stati raccolti e sono state utilizzate cortecce fresche per determinare l'espressione di proteine e mRNA della renina. Questo modello animale è riproducibile e può essere utilizzato per studiare le risposte fisiopatologiche, le vie molecolari e cellulari coinvolte nell'ipertensione renovascolare e nel danno renale.
Introduzione
La stenosi dell'arteria renale (RAStenosis) è un problema intrattabile che colpisce circa il 6% delle persone sopra i 65 anni e fino al 40% delle persone con malattia coronarica o vascolare periferica 1,2. I trattamenti attuali per la malattia sono limitati; pertanto, vi è una necessità critica di sviluppare nuove terapie per trattare l'ipertensione renovascolare o l'ipertensione resistente indotta da RAStenosis. Il sistema dell'angiotensina aldosterone renina (RAAS) è la via chiave coinvolta nella patogenesi dell'ipertensione indotta da RAStenosi o dell'ipertensione renovascolare ....
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Protocollo
I topi sono stati ospitati e curati presso la Vanderbilt University Medical Center (VUMC) Division of Animal Care seguendo le linee guida del National Institutes of Health (NIH) e la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio, Dipartimento della salute e dei servizi umani degli Stati Uniti. Tutte le procedure sugli animali sono state approvate dal VUMC Institutional Animal Care and Use Committee prima di iniziare gli esperimenti.
1. Preparazione e dissezione degli animali
- Accendere il germinatore e la pompa dell'acqua della piastra riscaldante circa 30 minuti prima di iniziare l'intervento chirurgico.
- Tagliar....
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Risultati
La costrizione dell'arteria renale aumenta l'espressione della renina nel rene stenoso mentre reprime l'espressione nel rene controlaterale. Il modello di stenosi a due rene una clip (2K1C) o Goldblatt induce un aumento dell'espressione di renina e danno renale. Questo è riconosciuto come il miglior modello rappresentativo di stenosi unilaterale dell'arteria renale nell'uomo.
L'espressione di renina e prorenina (precursore della renina) è stata misurata utilizzando immunoblotting. I dati mostr.......
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Discussione
La stenosi dell'arteria renale è una causa importante di ipertensione secondaria o resistente e danno renale 1,29. Il modello Goldblatt a due rene una clip (2K1C) è stato impiegato per studiare l'ipertensione renovascolare indotta da RAStenosi 1,17,18,19. Numerosi studi precedenti che utilizzano vari modelli animali hanno dimostrato che.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi, finanziario o di altro tipo, è dichiarato dagli autori.
Ringraziamenti
La ricerca è stata sostenuta dal NHLBI Research Scientist Development Grant (1K01HL135461-01) a JAG. Grazie a David Carmona-Berrio e Isabel Adarve-Rengifo per la loro assistenza tecnica.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Diet Gel | Clear H2O | Diet-Gel 76A | Dieta di recupero chirurgico |
| EMC Cuscinetto rigido riscaldato | Hallowell | 000A2788B | I cuscinetti riscaldanti sono stati utilizzati per mantenere caldi i topi |
| Suture in nylon Ethilon | Ethicon | 662G | 4-0 (1,5 metriche), Questa sutura è stata utilizzata per chiudere il peritoneo e la pelle |
| Suture in nylon Ethilon | Ethicon | 2815 G | 8-0 (0,4 metrico), questa sutura è stata utilizzata per chiudere il bracciale per legare e restringere l'arteria |
| Germinator 500 | Braintree Scientific Inc. | GER 5287 | Sterilizzare gli strumenti chirurgici tra gli interventi chirurgici |
| Ketoprofene | Zoetis | Ketofen | Antidolorifico |
| Poliuretano | Braintree Scientific Inc. | MRE-025 | Questo tubo è stato utilizzato per iniziare la stenosi |
| Tamponi antisettici allo iodio Povidone | Medline | MDS093901 | È stato applicato dopo la depilazione e l'intervento chirurgico sulla pelle |
| Reflex 7 Clip Applier | Roboz Surgical Instrument Co | 204-1000 | Questo applicatore di clip è stato utilizzato per applicare la clip nel caso in cui una o più suture si staccassero |
| Teli per asciugamani sterili | Dynarex | 4410 | È stato utilizzato come lenzuolo per i topi durante l'intervento chirurgico |
| Unguento antibiotico triplo | Medi-First | 22312 | |
| Pompa dell'acqua | Stryker | T/pompa Professionisti | Utilizzato per riscaldare e far circolare l'acqua nel cuscinetto rigido riscaldante per mantenere caldi i topi durante e dopo l'intervento chirurgico |
Riferimenti
- Kashyap, S., et al. Blockade of CCR2 reduces macrophage influx and development of chronic renal damage in murine renovascular hypertension. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 310 (5), 372-384 (2016).
- Wang, W., et al.
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Ristampe e permessi
