Casting vascolare di polmoni di mouse postnatali adulti e precoci per l'imaging Micro-CT

Summary

Lo scopo di questa tecnica è la visualizzazione ex vivo delle reti arteriliiche polmonari dei primi topi postnatali e adulti attraverso l'inflazione polmonare e l'iniezione di un composto a base di polimeri radio-opaco attraverso l'arteria polmonare. Vengono inoltre discusse le potenziali applicazioni per i tessuti castati.

Abstract

I vasi sanguigni formano reti intricate nello spazio tridimensionale. Di conseguenza, è difficile apprezzare visivamente il modo in cui le reti vascolari interagiscono e si comportano osservando la superficie di un tessuto. Questo metodo fornisce un mezzo per visualizzare la complessa architettura vascolare tridimensionale del polmone.

Per raggiungere questo obiettivo, un catetere viene inserito nell'arteria polmonare e la vascolatura viene simultaneamente lavata di sangue e dilatata chimica per limitare la resistenza. I polmoni vengono poi gonfiati attraverso la trachea a una pressione standard e il composto polimerico viene infuso nel letto vascolare ad una velocità di flusso standard. Una volta che l'intera rete arteriosa è stata riempita e autorizzata a curare, la vascolatura polmonare può essere visualizzata direttamente o su uno scanner micro-CT.

Quando eseguito con successo, si può apprezzare la rete arteriosa polmonare nei topi che vanno dalle prime età postnatali agli adulti. Inoltre, mentre dimostrato nel letto arteriosa polmonare, questo metodo può essere applicato a qualsiasi letto vascolare con posizionamento del catetere ottimizzato e punti finali.

Introduction

Il focus di questa tecnica è la visualizzazione dell'architettura arteriosa polmonare utilizzando un composto a base di polimeri nei topi. Mentre è stato eseguito un ampio lavoro su letti vascolari sistemici come cervello, cuore e rene^1,2,3,4,5, sono disponibili meno informazioni per quanto riguarda la preparazione e il riempimento della rete arteriosa polmonare. Lo scopo di questo studio, quindi, è quello di ampliare il lavoro^{precedente 6,7,}

Protocol

Tutti i metodi qui descritti sono stati approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee (ACUC) del National Heart Lung and Blood Institute.

1. Preparazione

1. Iniettare il topo intraperitonealmente con epatina (1 unità/g peso corporeo del topo) e lasciare che ambulate per 2 min.
2. Eutanasia l'animale in una camera di CO_2.
3. Disporre il mouse in posizione supina su una tavola chirurgica e fissare tutti e quattro gli arti alla scheda con del nastro adesivo. Utilizzare l'ingrandimento per la dissezione fine.

2. Esposizione di polmoni e trachea

1. Spruzzare il....

Results

Un cast di successo mostrerà un riempimento uniforme dell'intera rete arteriosa polmonare. Lo dimostriamo nei topi C57Bl/6J che variano in età: giorno postnatale P90 (Figura 4A), P30 (Figura 4B), P7 (Figura 4C) e P1 (Figura 4D). Controllando la velocità del flusso e monitorando visivamente il riempimento in tempo reale, sono stati raggiunti endpoint affidabili della vasc.......

Discussion

Eseguito correttamente, questo metodo produce immagini sorprendenti di reti arteriose polmonari, consentendo il confronto e la sperimentazione nei modelli di roditori. Diversi passaggi critici lungo il percorso garantiscono il successo. In primo luogo, i ricercatori devono eparinizzare l'animale nella fase preparatoria per evitare che si forno coaguli di sangue nella vascolatura polmonare e nelle camere del cuore. Ciò consente il transito arteriosa completo del composto polimero. In secondo luogo, quando si perfora il di.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Siringa da 1 cc	Becton Dickinson	309659
Fiale di scintillazione in vetro da 20 ml	Fisher	03-340-25P
Ago da 30 G	Becton Dickinson	305106
provette coniche da 50 ml	Cornin	352098	Per la conservazione e la scansione dei campioni
Siringa da 60 cc	Becton Dickinson	309653
seta 7-0 sutura	Teleflex	103-S
Analyze 12.0 Software	AnalyzeDirect Inc.	N/A	Software primario
Amira 6.7 Software	Thermo Scientific	N/A	Alternative Sofware
CeramaCut Forbici 9cm	Fine Science strumenti	14958-09
Pinze curve rivestite in ceramica	Strumenti Fine Science	11272-50
Serbatoio CO2	Robert's Oxygen Co.	n/a
Pompa a siringa doppia	Cole Parmer	EW-74900-10
Dumont Mini-Pinza	Strumenti per le scienze fini	11200-14
Etanolo	Pharmco	111000200
Formalina	Sigma - Scienze della vita	HT501128
Garza	Covidien	441215
Emostatico	Strumenti per le scienze fini	13013-14
Eparina (1000USP Unità/ml)	Hospira	NDC 0409-2720-01
Horos Software	Horos Project	N/A	Camera di induzione Sofware alternativa
	n/a	n/a
Kimwipe	Fisher	06-666	salvietta per la pulizia in fibra ottica
Nastro per etichettatura	Fisher	15966
Base magnetica	Kanetec	N/A
Sistema Micro-CT	PerkinElmer	Quantum GX
Microfil (Composto polimerico)	Flowech Inc.	Kit B - MV-122	8 once di composto MV; 8 once di diluente; MV-Curing Agent
Micromanipolatore	Stoelting	56131
Monoject 1/2 ml Siringa da insulina	Covidien	1188528012
Pinza ottagonale Denti dritti	Strumenti di scienza fine	11042-08
Parafilm	Bemis company, Inc.
Tubo PE-10	Instech	BTPE-10
Phospahte tamponato Soluzione salina	BioRad	#161-0780
Supporto ad anello	Fisher	S13747	Altezza 24in.
Sodium Nitroprusside	sigma	71778-25G
	N/A	N/A	16 x 16 pollici di area, 1/16 di spessore
Forbici a molla diritte	Strumenti per la scienza fine	15000-08
Catetere per flebo in teflon SURFLO 24G	Santa Cruz Biotechnology	360103
Surgical Board	Fisher	12-587-20	Questo è un supporto per diapositive convertito
Morsetto universale a 3 rebbi	Fisher	S24280
Inf. alato Set 25X3/4, tubo da 12"	Nipro	PR25G19
Zeiss Stemi-508 Cannocchiale di dissezione	Zeiss	n/a