C57BL/6 마우스에서 타우로콜레이트 나트륨 유도 심한 급성 췌장염
Summary
가혹한 급성 췌장염을 위한 동물 모형은 염증성 사건의 진화의 관측을 용이하게 하는 초기 단계에서 병리학적 변화의 연구를 가능하게 합니다. 여기서 우리는 마취 C57BL/6 마우스의 췌장 덕트에 타우로콜린산 나트륨의 역그레이드 주입에 의하여 가혹한 급성 담즙 췌장염의 유도를 위한 프로토콜을 제공합니다.
Abstract
타우로콜린성 주입에 의한 담즙 급성 췌장염 유도는 임상 담즙 췌장염의 발병에 대응하는 염증 성 사건의 인간 임상 상태 및 재생의 표현으로 인해 과학 계에 의해 널리 사용되고 있다. 췌장 손상의 심각도는 주입된 담즙산의 농도, 속도 및 부피를 측정하여 평가될 수 있다. 이 연구는 프로토콜 재생에 사용되는 재료 및 방법의 업데이트 된 체크리스트를 제공하고이 급성 췌장염 (AP) 모델의 주요 결과를 보여줍니다. 이전 출판물의 대부분은 쥐에서이 모델을 재현하는 자신을 제한했다. 우리는 연구 결과와 관련있을 수 있는 추가이 (즉, 마우스의 유전자 변형 된 균주와 함께 작동의 가능성과 함께 이 동물을 위한 시약 및 항체의 무기고의 가용성)를 제공하는 마우스에 이 방법을 적용했습니다. 마우스의 급성 췌장염 유도의 경우, C57BL/6 마우스에서 3분 동안 주입 속도 10 μL/min에서 2.5%의 나트륨 타우로콜레이트의 정의된 투여량을 가진 체계적인 프로토콜을 제시하며, 이는 유도의 12시간 이내에 최대 정도의 심각도에 도달하고 그 결과를 강조하는 방법을 검증하는 결과를 강조한다. 연습과 기술로 마취 유도부터 주입 완료까지 총 예상 시간은 동물 당 25 분입니다.
Introduction
인간에서, 담석의 존재는 담석의 말단 부분의 방해로 인한 췌장염의 가장 흔한 원인이며, 췌장 분비물의 흐름을 방해하고 췌장에 있는 강렬한 염증 과정을 일으키는 원인이 되며, 혈청 및 염증 성 중재자에서 소화 효소의 농도가 증가한다1,2.
급성 췌장염의 발달을 설명하기 위해 두 가지 다른 이론이 제안되었습니다 (AP). “일반적인 채널” 이론은 담낭에 존재하는 돌이 담즙 분비가 췌장 덕트로 역행하는 것을 허용하는 말단 일반적인 담관 시스템을 방해한다는 것을 건의합니다. 두 번째 이론 (“덕트 방해” 이론)은 과잉 담석에 의한 췌장 덕트의 방해가 십이지장 분비의 흐름에 막힘을 일으켜 덕덕 고혈압을 유발한다는 것을 시사합니다. 급성 담즙 췌장염으로 이끌어 내는 기계장치는 완전히 이해되지 않더라도, 결과는 강렬한 선동적인 프로세스입니다. 소화효소 분화와 췌장자가 소화는 조직병리학적 변화, 염증성 사이토카인(IL-1β, IL-6, TNF-α)의 증가, 급성상 단백질4,5,6의 증가로 이어집니다.
가혹한 심각한 심각한 췌장염은 다중 기관의 관여 및 높은 사망 리스크 때문에 임상주의를 받을 자격이 있는 상태입니다. 급성 췌장염의 번식을 위한 동물 모델은 질병의 병리학적 메커니즘을 설명하고 질병의 초기 단계에서 시작하여 염증 성 사건의 진화를 모니터링하는 데 도움이되기 때문에 중요합니다. 이것은 일반적으로 진료소에서 불가능2,7. 또한, 췌장 조직에 대한 접근은 임상 전 연구에서 쉽게, 동위원소 종과 함께 작업할 가능성과 함께 임상 조건에 연결된 변화의 용해성을 선호8, 바람직하지 않은 변수를 제거하고, 인간 조건에서 관찰 된 결과와 임상 유사성을 미러링9.
쥐와 쥐 종에 있는 급성 췌장염의 유도를 위한 담즙 및 비 담즙 모형은 과학문헌에서 빈번하게 공부되었습니다. 유도의 비 담즙 방법은 cholecystokinin 분비학 또는 그 아날로그 cerulein10의 수막 자극 복용량의 관리를 포함한다; L-아르기닌의 거의 치명적인 복용량의 관리; 또는 ethionine11로 보충 콜린 결핍 다이어트의 관리. 이러한 방법은 재현하기 쉽고 췌장 염증을 초래하지만 이론적으로 AP (즉, 췌장 덕트로 담즙 분비물의 역류)를 트리거하는 메커니즘을 복제하지 않습니다. 담즙 모형을 해결하는 기술은 췌장 덕트에 담즙산의 역행 주입을 기반으로 하고 이 프로토콜을 실행하기 위하여 잘 훈련된 연구원을 요구합니다. 여러 연구는 쥐에서이 방법을 사용 하 여 발표 되었습니다 (이러한 실험 외과 수술을 포함 하기 때문에 분명히 기술적 인 이유로)12,13. 그러나, 마우스에 있는 접근은 염증3,14,15의 연구 결과에 있는 더 흥미로운 결과를 제안할 수 있습니다. 이 연구에서는, 우리는 C57BL/6 마취 마우스에 있는 타우로콜린나트륨의 주입에 의하여 가혹한 급성 췌장염의 재생산을 위해 따라야 할 단계의 체크리스트를 보여줄 것입니다.
항체를 이용한 실험의 필요성과 유전자 및 단백질 발현의 분석을 수반하는 작업의 경우, 마우스의 사용은 이러한 동물에 대한 물질의 무기고가 크고 동종 및 녹아웃 종과 함께 작업할 가능성 때문에 바람직하며, 그 중에서도 연구와 관련이 있는 것으로 나타났다16. 마우스 C57BL/6은 원래 항종양 활성 및 면역학 연구를 위해 개발된 마우스의 근친 변형이다. 이 긴장은 점점 동종인 것에 대 한 연구원에 의해 선호 되 고, 결과의 더 큰 재현성을 허용, 실험에 동물의 작은 수의 사용 및 동일한 그룹 사이의 결과의 적은 가변성을 의미할 수 있습니다17,18.
Perides 외. (2010)14 나트륨 taurocholate 주입에 의해 마우스에서 AP 유도에 대 한 프로토콜을 발표 했다. 여기서 우리는 C57BL/6 마우스에서 더 높은 나트륨 타우로콜린 농도(2.5%)를 사용하여 이 모델을 업데이트하며, 주입의 부피 및 속도(도 1). 심각도의 최대 수준은 마우스에 있는 유도의 12 시간 안에 도달합니다. 혈청 과 복막 구멍에서 IL-6의 농도의 상승은 AP의 진행과 상관된다. 연습을 통해 마취 유도에서 주입 완료까지의 총 예상 시간은 동물 당 25 분입니다. 숙련된 연구원이 이 실험을 수행하는 것이 필수적입니다. 용액이 일반적인 담관에 제대로 주입되도록 타우로콜레이트 나트륨 대신 메틸렌 블루를 사용하여 여러 파일럿 트레이닝 세션을 수행합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
타우로콜레이트 나트륨 주입에 의한 급성 췌장염을 유도하는 방법은 이미 랫트22,23,24에서 나타났다. 2008년, 2010년, 2015년에 출판된 세 개의 유사한 작품은 프로토콜3,14,15에 대한 참조역할을 했습니다. 이 작업에서는 C57BL/6 마우스에서 이 방법을 재현하기 위…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 상파울루 대학의 의학 클리닉에서 포스트 졸업 프로그램 덕분에; 코르데나카오 데 아페르페이소아멘토 데 페소알 드 니벨 슈페리어(CAPES) 및 상파울루 의과대학(FMUSP).
Materials
| 0.4 mm needle | INTRAG MEDICAL TECH | 90183210 | 30G |
| 0.54 mm polyethylene tube | Tygon | 730010 | – |
| Styrofoam block | – | – | – |
| masking tape for mounting the mouse | Missner | 1236 | – |
| Infusion pump scheduled to 10µL / min. | Havard aparatus-Peristaltic Pump Series | MA1 55-7766 | Model 66 Small Peristaltic |
| Scissors and forceps | |||
| Antiseptic providine iodine | Pfizer | 12086OR | antisepsis |
| 70% ethanol | SIGMA | 459836 | Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O |
| Razor blade | Lord | bdk9a1ghk6 | For trichotomy |
| Sodium taurocholate | Sigma-Aldrich | 86339- 1G | CAS NUMBER- 345909-26-4 |
| microvessel clip | Medicon Surgical | 56.87.35 | Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 - 40 g |
| 6-0 prolene | Bioline | 5162 | Suture line |
| Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL | Cristália | ||
| Xilazine 2% | Syntec | ||
| Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline) | Farmace | 105851 | |
| Methyl Blue | Sigma-Aldrich Chemicals | M5528 | |
| MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel – Immunology Multiplex Assay | MERCK | MCYTOMAG-70K | Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples. |
| Amylase Assay | Labtest | 11 | |
| Desmarres retractor 13-mm width |
ROBOZ | RS-6672 |
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