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Articolo metodologico
Proponiamo un protocollo per la preservazione della fertilità nelle ragazze in età prepuberale e nelle donne a rischio di insufficienza ovarica prematura. Combina il congelamento del tessuto ovarico e la crioconservazione degli ovociti recuperati dal tessuto ovarico. Questa strategia migliora la sicurezza e ottimizza il potenziale riproduttivo della conservazione della fertilità, massimizzando le possibilità di parto.
La crioconservazione del tessuto ovarico umano (OTC) è sempre più utilizzata in tutto il mondo per preservare la fertilità femminile nelle ragazze in età prepuberale e nelle donne a rischio di insufficienza ovarica prematura (POI) nel contesto di trattamenti gonadotossici urgenti o di chirurgia ovarica. La preservazione della fertilità è impegnativa perché non c'è consenso sulla gestione del paziente, sulle strategie di preservazione della fertilità o persino sui protocolli tecnici di laboratorio, il che implica che ogni procedura deve essere adattata alle caratteristiche del profilo del paziente e al proprio rapporto rischio-beneficio. Durante l'OTC, gli ovociti maturi/immaturi possono essere aspirati direttamente da follicoli antrali grandi/piccoli all'interno di campioni di tessuto ovarico e/o essere rilasciati in terreni di coltura da follicoli in crescita durante la dissezione del tessuto ovarico in ragazze e donne in età prepuberale. In questo manoscritto, presentiamo un protocollo che combina il congelamento del tessuto ovarico con la crioconservazione di ovociti maturi/immaturi recuperati da campioni di tessuto ovarico, migliorando il potenziale riproduttivo della conservazione della fertilità. Verranno descritte la raccolta, la manipolazione e la conservazione appropriate del tessuto ovarico e degli ovociti prima, durante e dopo la crioconservazione. Verranno inoltre discussi il successivo utilizzo e la sicurezza di campioni di tessuto ovarico crioconservato/scongelato e di ovociti, nonché la tempistica ottimale per la maturazione in vitro di ovociti immaturi. Raccomandiamo l'uso sistematico di questo protocollo nella preservazione della fertilità delle ragazze e delle donne in età prepuberale in quanto aumenta l'intero potenziale riproduttivo della conservazione della fertilità (ad esempio, la vitrificazione degli ovociti in aggiunta all'OTC) e migliora anche la sicurezza e l'uso della conservazione della fertilità (ad esempio, lo scongelamento degli ovociti rispetto al trapianto ovarico), massimizzando le possibilità di successo del parto per le pazienti a rischio di POI.
Il campo della preservazione della fertilità è cresciuto negli ultimi due decenni a causa del crescente numero di pazienti a rischio di insufficienza ovarica prematura (POI)1,2,3. Le opzioni mediche attualmente disponibili per preservare la fertilità sono la crioconservazione del tessuto ovarico (OTC)4, il congelamento di ovociti/embrioni dopo stimolazione ovarica5, la somministrazione di analoghi del GnRH6 o la trasposizione ovarica7. L'OTC è un i....
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Tutte le donne (di età superiore ai 18 anni), così come tutte le ragazze minorenni e i loro genitori hanno firmato un modulo di consenso informato per preservare la fertilità del paziente a rischio di POI. Questo protocollo è considerato come una procedura di riproduzione assistita di routine nel nostro centro per la conservazione della fertilità. Segue le linee guida del comitato etico per la ricerca umana delle nostre istituzioni.
1. Controllo di qualità
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Tra il 2007 e il 2020 sono stati eseguiti un totale di 81 OTC da 81 pazienti di sesso femminile, tra cui 43 ragazze in età prepuberale e 38 donne. L'età media delle pazienti di sesso femminile (ragazze e donne in età prepuberale) era di 14,21 ± 9,61 anni (errore medio ± standard). Il paziente più giovane aveva 5 mesi e il più anziano 33,6 anni (Tabella 1). L'età media delle ragazze e delle donne in età prepuberale era rispettivamente di 6,84 ± 4,81 anni (min-max: 0,5-15,1) e 22,76 ± 5,92 anni (min-max: 1.......
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Il presente manoscritto fornisce un protocollo che combina il congelamento del tessuto ovarico e la crioconservazione degli ovociti recuperati dal tessuto ovarico, aumentando il potenziale di fertilità nelle ragazze in età prepuberale e nelle donne a rischio di POI. Si consiglia vivamente di eseguire questo protocollo prima dell'inizio di qualsiasi terapia gonadotossica al fine di ottimizzare la quantità (cioè il numero di ovociti vitali) e la qualità (cioè l'integrità del DNA e la compe.......
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Nessuno degli autori ha interessi concorrenti.
Ringraziamo tutti i membri dei nostri centri coinvolti nell'attività di preservazione della fertilità (ginecologi, biologi, oncologi e anatomopatologi). Lo studio è stato condotto nell'ambito delle procedure di routine per la conservazione della fertilità. Non è stato ricevuto alcun finanziamento.
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Siringa monouso da 1 ml | CDD | 1323101/7002655 | Possono essere adatti anche altri materiali e dimensioni |
| Ago per siringa calibro 21 | Merck | Z192481 | Altri materiali e dimensioni possono essere adatti Piastra |
| di Petri per fecondazione in vitro da 35 mm | Nunc | 150255 | Possono essere adatti anche Altri materiali e dimensioni Piastra |
| Petri per fecondazione in vitro da 60 mm | Nunc | 150270 | Altri materiali e dimensioni possono anche essere adatto |
| 90 mm FIVET Petri Dish | Nunc | 150360 | Altri materiali e dimensioni possono essere adatti anche |
| Pinze atraumatiche | Medlane | PI 299 04 | Altri materiali e dimensioni possono essere adatti Anche |
| Coltura singola continua Completa di HSA | Irvine Scientific | 90165 | Terreno di coltura FIV per la raccolta del liquido follicolare, l'incubazione dei COC, la denudazione degli ovociti e l'incubazione degli ovociti fino alla fase di vitrificazione. |
| Cryotube | Thermo Scientific | 368632 | Altri prodotti possono essere adatti anche |
| Dimetilsolfossido (DMSO) | MILTENYI BIOTEC SAS | 170-076-303 | CryoMACS DMSO 10 (EP) |
| GT40 | Air Liquide | 1,13,517 | Serbatoio di stoccaggio |
| HSV Vitrificazione ad alta sicurezza Straw | Irvine Scientific | 25251 | Paillettes di vitrificazione Albumina |
| sierica umanaVitrolife | 10064 | Possono essere adatti anche altri prodotti | |
| Leibovitz L15 medium | Eurobio | CM1L15000U | Terreno di coltura per la raccolta, il trasporto e la dissezione di tessuti ovarici |
| Leibovitz L15 medium | Eurobio | CM1L15000U | Terreno di coltura per soluzione di congelamento |
| Mars-IVF Class II Workstation/L126 IVF Dual | CooperSurgical | WM1500/6-133-911-121 | Workstation |
| Congelatore programmabile | Planner KRYO 500 | Kryo 560-16 | Possono essere adatte anche altre attrezzature |
| Forbici con lame dritte affilate e punte finemente affilate | Medlane | CI 034 03 | Possono essere adatti anche altri materiali e dimensioni |
| Stripper | CooperSurgical | MXL3-STR-CGR | Altri prodotti possono essere adatti |
| Punte (150µ m) per Stripper | CooperSurgical | MXL3-150 | Altri prodotti possono essere adatti Kit |
| di Vitrificazione | Irvine Scientific | 90133 | I protocolli sono disponibili all'indirizzo http://www.irvinesci.com/products/90133-so-vitrification-freeze-solutions. Altri prodotti possono essere adatti |
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