Preparación De Andamios Renales Descelularizados En Ratas
Summary
Este protocolo introduce un método para desarrollar un andamio usando riñones de rata descelularizados. El protocolo incluye procesos de descelularización y recelularización para confirmar la biodisponibilidad. La descelularización se realiza utilizando Tritón X-100 y dodecil sulfato de sodio.
Abstract
La ingeniería de tejidos es una disciplina de vanguardia en biomedicina. Las técnicas de cultivo celular se pueden aplicar para la regeneración de tejidos y órganos funcionales para reemplazar órganos enfermos o dañados. Se necesitan andamios para facilitar la generación de órganos o tejidos tridimensionales utilizando células madre diferenciadas in vivo. En este informe, describimos un método nuevo para desarrollar andamios vascularizados usando los riñones descelularizados de la rata. Las ratas ocho-semana-viejas de Sprague-Dawley fueron utilizadas en este estudio, y la heparina fue inyectada en el corazón para facilitar el flujo en los recipientes renales, permitiendo que la heparina perfunda en los recipientes renales. La cavidad abdominal fue abierta, y el riñón izquierdo fue recogido. Los riñones recogidos fueron perfundidos por 9 h usando los detergentes, tales como Triton X-100 y sulfato del dodecil del sodio, para descelularizar el tejido. Los andamios descelularizados del riñón entonces fueron lavados suavemente con la penicilina/la estreptomicina y la heparina del 1% para quitar la ruina celular y los residuos químicos. Se espera que el trasplante de células madre con los andamios vasculares descelularizados facilite la generación de nuevos órganos. Así, los andamios vascularizados pueden proporcionar una base para la ingeniería del tejido de los injertos del órgano en el futuro.
Introduction
Las técnicas de cultivo celular se aplican para la regeneración de tejidos y órganos funcionales para reemplazar órganos enfermos o dañados. El trasplante alogénico del órgano es actualmente el tratamiento más común para el daño irreversible del órgano; sin embargo, este acercamiento requiere el uso de la immunosupresión para prevenir el rechazamiento del órgano trasplantado. Por otra parte, a pesar de los avances en inmunología del trasplante, el 20% de los receptores de trasplantes pueden experimentar un rechazo agudo dentro de los 5 años, y dentro de los 10 años posteriores al trasplante, el 40% de los receptores pueden perder su injerto trasplantado o morir1.
Los avances en las tecnologías de ingeniería de tejidos han dado lugar a un nuevo paradigma para el trasplante de nuevos órganos sin rechazo inmunológico utilizando células madre diferenciadas. Después de la diferenciación de células madre, se necesita un andamio, llamado matriz extracelular sintética, para facilitar la generación de órganos tridimensionales y permitir que el nuevo tejido prospere dentro del receptor. Los andamios de órganos nativos descelularizados tienen ventajas, incluyendo un ambiente más efectivo para el establecimiento de células y la mejora de la proliferación de células madre, aunque estos mecanismos no han sido completamente dilucidados2. En particular, el riñón es un órgano adecuado para la generación de andamios porque tiene abundante circulación y un nicho para el establecimiento de células madre. Además, debido a la compleja estructura del riñón, es difícil regenerar artificialmente los riñones para el trasplante de órganos.
En este informe, introducimos un método de desarrollar andamios vascularizados usando órganos decellularized en un modelo de la rata para facilitar estudios animales futuros para los propósitos de la ingeniería de tejidos.
Protocol
Representative Results
Discussion
Se han utilizado varios protocolos para la descelularización de órganos y otros tejidos. El protocolo óptimo de descelularización debe preservar la arquitectura tridimensional de la matriz extracelular (ECM). En general, tales protocolos consisten en lisear la membrana celular mediante procesamiento físico o soluciones iónicas, disociar el citoplasma y el núcleo de la ECM mediante procesamiento enzimático o detergentes, y luego eliminar los desechos celulares del tejido3. Los procesos fís…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este estudio fue apoyado por una beca del Instituto de Investigación Biomédica del Hospital Universitario Nacional de Pusan.
Materials
| 1 cc syringe (inject probes and vehicle solutions | Becton Dickinson | 305217 | |
| 10-0 ethilon for vessel anastomosis | Ethicon | 9032G | |
| 25 gauge inch guide needle(for vascular catheters) | Becton Dickinson | 305145 | |
| 3-0 PDS incision closure rat | Ethicon | Z316H | |
| 3-0 Prolene incision closure rat | Ethicon | 8832H | |
| 3-0 silk spool vascular access/ligation in rat | Braintree Scientific | SUT-S 110 | |
| 4-0 PDS incision closure mouse | Ethicon | Z773D | |
| 4-0 Prolene incision closure mouse | Ethicon | 8831H | |
| 5-0 silk spool vascular access/ligation in mouse | Braintree Scientific | SUT-S 106 | |
| Fine Scissors to cut fascia/connective tissue | Fine Science Tools | 14058-09 | |
| Halsey needle holder | Fine Science Tools | 12001-13 | |
| Kelly Hemostat for rats: muscle clamp to minimize bleeding when cut | Fine Science Tools | 13018-14 | |
| Polyethelyne 50 tubing, catheter tubing 100 ft | Braintree Scientific | .023" × .038” | |
| Schwartz microserrefine vascular clamps | Fine Science Tools | 18052-01 (straight) | |
| 18052-03 (curved) | |||
| Surgical Scissors to cut skin | Fine Science Tools | 14002-12 | |
| Vannas-Tubingen Spring scissors for arteriotomy | Fine Science Tools | 15003-08 |
Riferimenti
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