Qui, descriviamo un modello di topo di ischemia retinica mediante occlusione bilaterale transitoria comune dell'arteria carotide usando suture semplici e un morsetto. Questo modello può essere utile per comprendere i meccanismi patologici dell'ischemia retinica causati da anomalie cardiovascolari.
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Articolo metodologico
Un modello murino di lesione retinica ischemica indotta dall'occlusione dell'arteria carotide comune transiente
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Diverse malattie vascolari come la retinopatia diabetica, l'occlusione delle vene o delle arterie retiniche e la sindrome ischemica oculare possono portare all'ischemia retinica. Per studiare i meccanismi patologici dell'ischemia retinica, è necessario sviluppare modelli sperimentali pertinenti. Anatomicamente, un principale vaso di alimentazione del sangue retinica è l'arteria oftalmica (OpA) e OpA ha origine dall'arteria carotide interna della comune arteria carotide (CCA). Pertanto, l'interruzione del CCA potrebbe effettivamente causare ischemia retinica. Qui, abbiamo stabilito un modello di topo di ischemia retinica mediante occlusione dell'arteria carotide comune bilaterale transitoria (tBCCAO) per legare il CCA destro con suture di seta 6-0 e per occludere il CCA sinistro transitoriamente per 2 secondi tramite un morsetto, e abbiamo dimostrato che tBCCAO potrebbe indurre ischemia retinica acuta che porta alla disfunzione retinica. L'attuale metodo riduce la dipendenza dagli strumenti chirurgici utilizzando solo aghi chirurgici e un morsetto, riduce i tempi di occlusione per ridurre al minimo la morte animale inaspettata, che è spesso vista nei modelli di topo dell'occlusione dell'arteria cerebrale media e mantiene la riproducibilità dei comuni risultati ischemici retinali. Il modello può essere utilizzato per studiare la fisiopatologia delle retinopatie ischemiche nei topi e ulteriormente può essere utilizzato per lo screening in vivo dei farmaci.
Introduzione
La retina è un tessuto neurosensoriale per la funzione visiva. Poiché è necessaria una notevole quantità di ossigeno per la funzione visiva, la retina è conosciuta come uno dei tessuti più esigenti di ossigeno nel corpo1. La retina è suscettibile alle malattie vascolari poiché l'ossigeno viene fornito attraverso i vasi sanguigni. Vari tipi di malattie vascolari, come la retinopatia diabetica e il vaso sanguigno retinale (vene o arterie) occlusione, possono indurre ischemia retinica. Per studiare i meccanismi patologici dell'ischemia retinica, sono considerati necessari modelli sperimentali riproducibili e clinicamente rilevanti di ischemia reti....
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Protocollo
Tutti i metodi qui descritti sono stati approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) della Keio University School of Medicine.
1. Preparazione di strumenti chirurgici e animali
- Autoclave strumenti chirurgici e tenerli in 70% alcol etilico. Prima di ogni nuova procedura chirurgica, pulire accuratamente gli strumenti chirurgici utilizzando il 70% di alcol etilico.
- Preparare topi BALB/cAJc1 maschi (6 settimane, 26-28 kg) in una stanza priva di agenti patogeni specifici (SPF) per mantenere condizioni sterili prima, durante e dopo l'intervento chirurgico.
2. Occlusione del....
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Risultati
Dopo la circolazione sistemica del FITC-dextran per 2 minuti, sono state esaminate le vasculure retiniche delle retine sinistra e destra nei topi azionati da sham e nei topi azionati da tBCCAO (Figura complementare 1). Fitc-dextran era completamente visibile sia nelle retine nei topi a farsa che nella retina sinistra nei topi azionati da tBCCAO, mentre era parzialmente rilevabile nella retina destra nei topi azionati da tBCCAO.
Dopo il tBCCAO, è stato esaminato lo sbavatura de.......
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Discussione
Nello studio, abbiamo dimostrato che il tBCCAO, utilizzando suture semplici e un morsetto, potrebbe indurre ischemia retinica e conseguente disfunzione retinica. Inoltre, abbiamo dimostrato che il nostro attuale protocollo per lo sviluppo di un modello di topo di ischemia retinica è più facile e veloce rispetto ad altri protocolli precedenti per lo sviluppo di modelli di lesioni ischemiche retiniche2,3,7.
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (18K09424 a Toshihide Kurihara e 20K18393 a Yukihiro Miwa) del Ministero dell'Istruzione, della Cultura, dello Sport, della Scienza e della Tecnologia (MEXT).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Atipamezolo cloridrato | Zenoaq | Antisedan | Per anti-anestesia |
| Applied Biosystems 7500 Fast | Applied Biosystems-Per | qPCR | |
| Butorphanol tartrato | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | Per anestesia |
| BZ-II Analizzatore | KEYENCE-Per | un'immagine unire | |
| BALB/cAJc1 | CLEA-Mouse | ceppo | |
| β-actina (8H10D10) mAb di topo | CST | 3700 | Per western blot |
| Pinza, Pinza | World Precision Instruments | WPI 500451 | Per chirurgia |
| Pinze Dumont #5 | Fine Science Tools | 11251-10 | Per chirurgia |
| Soluzione DAPI | Dojindo | 340-07971 | Per IHC |
| Envisu, sistema SD-OCT | Leica | R4310 | Per OCT |
| FITC-destrano | Merk | FD2000S | Per la perfusione sanguigna retinica |
| Microscopio a fluorescenza | KEYENCE | BZ-9000 | Per il rilevamento della fluorescenza |
| Gatifloxacina idrato | Senju Pharmaceutical | Gachifuro | Per l'infezione antibatterica |
| GFAP Anticorpo monoclonale (2.2B10) | Thermo | 13-0300 | Per |
| IHC Termoforo | Marukan | RH-200 | Per chirurgia |
| HIF-1α (D1S7W) XP Rabbit mAb | CST | 36169 | Per western blot |
| ImageQuant LAS 4000 mini | GE | Healthcare-Per | chemiluminescenza |
| Midazolam | Sandoz KK | Sandoz | Per anestesia |
| Microtomo Tissue-Tek TEC 6 | Sakura-Per | sezionamento | |
| Medetomidina | Orion Corporation | Domitore | Per anestesia |
| Ago supporto | Handaya | HS-2307 | Per chirurgia |
| PuREC | MAYO | Corporation-Per | ERG |
| Forbice | Fine Science Tools | 91460-11 | Per chirurgia |
| Ialuronato di sodio | Santen Ileina farmaceutica | Per lubrificazione degli occhi | |
| Tropicamide/Penilefrina cloridrato | Santen Farmaceutico | Mydrin-P | Per midriasi |
| Sutura di seta 6-0 | Natsume | E12-60N2 | Per chirurgia |
Riferimenti
- Anderson, B. Ocular effects of changes in oxygen and carbon dioxide tension. Transactions of the American Ophthalmological Society. 66, 423-474 (1968).
- Ingberg, E., Dock, H., Theodorsson, E., Theodorsson, A., Ström, J. O.
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Ristampe e permessi
