여기서, 우리는 간단한 봉합사 및 클램프를 사용하여 일시적인 양측 공통 경동맥 폐색에 의한 망막 허혈의 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 심혈관 비정상으로 인한 망막 허혈의 병리학적 메커니즘을 이해하는 데 유용할 수 있습니다.
당뇨병 성 망막병증, 망막 정맥 또는 동맥 및 안구 허혈 증후군의 폐색과 같은 다양한 혈관 질환은 망막 허혈으로 이어질 수 있습니다. 망막 허혈의 병리학 적 메커니즘을 조사하려면 관련 실험 모델을 개발해야합니다. 해부학적으로, 주요 망막 혈액 공급 혈관은 안과 동맥 (OpA) 및 OpA는 일반적인 경동맥의 내부 경동맥에서 유래 (CCA). 따라서 CCA의 중단은 망막 허혈을 효과적으로 유발할 수 있습니다. 여기서, 우리는 6-0 실크 봉합사를 가진 오른쪽 CCA를 묶고 클램프를 통해 2 초 동안 좌측 CCA를 폐색하기 위하여 일시적인 양측 공통 경동맥 폐색(tBCCAO)에 의하여 망막 허혈증의 마우스 모형을 설치하고, tBCCAO가 재발성 기능 장애로 선도하는 급성 망막증증을 유도할 수 있었다는 것을 보여주었습니다. 현재 방법은 수술 바늘과 클램프를 사용하여 수술 기구에 대한 의존도를 줄이고, 중간 뇌동맥 폐색의 마우스 모델에서 흔히 볼 수 있는 예기치 않은 동물 사망을 최소화하기 위해 폐색 시간을 단축하며, 일반적인 망막 허혈성 발견의 재현성을 유지합니다. 이 모델은 마우스의 허혈성 망막병증의 병리학을 조사하기 위해 활용될 수 있으며 생체 내 약물 스크리닝에 더 사용될 수 있다.
망막은 시각 기능을 위한 신경 감각 조직입니다. 시각 기능에 상당한 양의 산소가 필요하기 때문에 망막은 신체1에서가장 높은 산소 를 요구하는 조직 중 하나로 알려져 있습니다. 망막은 산소가 혈관을 통해 전달되기 때문에 혈관 질환에 취약합니다. 당뇨병 성 망막병증 및 망막 혈관 (정맥 또는 동맥) 폐색과 같은 다양한 유형의 혈관 질환은 망막 허혈을 유발할 수 있습니다. 망막 허혈의 병리학적 메커니즘을 조사하기 위해, 망막 허혈의 재현 가능하고 임상적으로 관련된 실험 모델은 필요하다고 간주됩니다. 중간 대뇌 동맥 폐색(MCAO)은 내트라루민 필라멘트의 삽입에 의한 실험대뇌 허혈2,3의생체 내 설치류 모델의 개발을 위해 가장 일반적으로 활용되는 방법이다. MCA에 안과 동맥(OpA)의 근접성으로 인해 MCAO 모델은 망막 허혈4,5,6의병리생리학을 이해하는 데 동시에 사용된다. 망막 허혈과 함께 대뇌 허혈을 유도하기 위해, 긴 필라멘트는 전형적으로 일반적인 경동맥 (CCA) 또는 외부 경동맥 (ECA)의 절개를 통해 삽입됩니다. 이러한 방법은 수행하기 어렵고, 수술을 완료하는 데 오랜 시간이 걸리며(한 마우스의 경우 60분 이상), 수술 후 결과에 높은 변이성을 초래할수 있다 7. 이러한 문제를 개선하기 위해 더 나은 모델을 개발하는 것이 중요합니다.
이 연구에서는, 우리는 단순히 짧은 일시적인 양자 CCA 폐색 (tBCCAO)을 바늘과 클램프로 사용하여 쥐의 망막 허혈을 유도하고 망막에서 허혈성 부상의 전형적인 결과를 분석했습니다. 이 비디오에서는 tBCCAO 절차를 시연할 것입니다.
연구에서, 우리는 tBCCAO, 간단한 봉합사 및 클램프를 사용하여, 망막 허혈및 동반망막 기능 장애를 유도할 수 있었다는 것을 보여주었습니다. 더욱이, 망막 허혈의 마우스 모델 의 개발을 위한 현재 의정서가 망막 허혈성 상해 모델2,3,7의개발을 위한 다른 이전 프로토콜과 비교하여 더 쉽고 빠르다는 것을입증했습니다.
<p clas…The authors have nothing to disclose.
이 작품은 과학연구보조금(KAKENHI)(18K09424)과 구리하라 도시히데, 20K18393, 미와 유키히로(MEXT)가 지원했다.
Atipamezole hydrochloride | Zenoaq | Antisedan | For anti-anesthesia |
Applied Biosystems 7500 Fast | Applied Biosystems | – | For qPCR |
Butorphanol tartrate | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | For anesthesia |
BZ-II Analyzer | KEYENCE | – | For an image merge |
BALB/cAJc1 | CLEA | – | Mouse strain |
β-Actin (8H10D10) Mouse mAb | CST | 3700 | For western blot |
Clamp Forcep | World Precision Instruments | WPI 500451 | For surgery |
Dumont forceps #5 | Fine Science Tools | 11251-10 | For surgery |
DAPI solution | Dojindo | 340-07971 | For IHC |
Envisu SD-OCT system | Leica | R4310 | For OCT |
FITC-dextran | Merk | FD2000S | For retinal blood perfusion |
Fluorescence microscope | KEYENCE | BZ-9000 | For fluorescence detection |
Gatifloxacin hydrate | Senju Pharmaceutical | Gachifuro | For anti-bacterial infection |
GFAP Monoclonal Antibody (2.2B10) | Thermo | 13-0300 | For IHC |
Heating pad | Marukan | RH-200 | For surgery |
HIF-1α (D1S7W) XP Rabbit mAb | CST | 36169 | For western blot |
ImageQuant LAS 4000 mini | GE Healthcare | – | For chemiluminescence |
Midazolam | Sandoz K.K | SANDOZ | For anesthesia |
Microtome Tissue-Tek TEC 6 | Sakura | – | For sectioning |
Medetomidine | Orion Corporation | Domitor | For anesthesia |
Needle holder | Handaya | HS-2307 | For surgery |
PuREC | MAYO Corporation | – | For ERG |
Scissor | Fine Science Tools | 91460-11 | For surgery |
Sodium hyaluronate | Santen Pharmaceutical | Hyalein | For eye lubrication |
Tropicamide/Penylephrine hydrochloride | Santen Pharmaceutical | Mydrin-P | For mydriasis |
6-0 silk suture | Natsume | E12-60N2 | For surgery |