מאמר זה מתאר ומדגים את ניהול החיסונים התוך-אנלתיים ואת איסוף החלב מארנבים מניקים (Oryctolagus cuniculus) כאמצעי להערכת חסינות הרירית במודל מתאים מבחינה תרגומית של חיסון אימהי.
בשל קווי דמיון בין שליה והעברת נוגדנים עם בני אדם, ארנבות הן מודל מצוין של חיסון אימהי. יתרונות נוספים של מודל מחקר זה הם קלות הרבייה ואיסוף המדגמים, תקופת הריון קצרה יחסית וגדלי פסולת גדולים. נתיבי חיסון שהוערכו בדרך כלל כוללים תת עורית, תוך שרירית, תוך-עורית ותוך עורית. איסוף מדגם לא בסיסי לגילוי כרונולוגי של התגובות האימונולוגיות לחיסונים אלה כולל איסוף דם, הן מסכרים והן מערכות, וחלב מההנקה כן. במאמר זה, נדגים טכניקות המעבדה שלנו השתמשה במחקרים של חיסון אימהי בארנבים לבנים ניו זילנד (Oryctolagus cuniculus), כולל חיסון תוך-כלי ואוסף חלב.
מחקרים על חיסון אימהי והעברת נוגדנים הם לא יסולא בפז מסיבות רבות, שכן זהו המסלול הראשוני של העברת חסינות והגנה עוקבת מפני פתוגנים ומחלות אצל תינוקות ותינוקות. חיסון אימהי יש פוטנציאל להשפיע באופן חיובי הן על בריאות האם והן על בריאות התינוק / ילד ברמה הגלובלית על ידי הפחתת תחלואה ותמותה הקשורים פתוגנים מסוימים בתקופה פגיעה זו1. המטרה העיקרית של אסטרטגיה זו היא להגדיל את רמות הנוגדנים האימהיים הספציפיים במהלך ההריון. נוגדנים אלה יכולים להיות מועברים לאחר מכן לתינוק ולתינוק ברמות מספיקות כדי להגן מפניזיהומיםעד שמערכת החיסון שלהם בוגרת מספיק כדי להגיב כראוי לאתגרים 1,2,3. עבודה קודמת הוכיחה כי טיטרים נוגדנים גבוהים יותר בלידה קשורים להגנה מלאה או להתפרצות מאוחרת ולחומרה מופחתת של מחלות זיהומיות רבות ושונות בתינוק, כולל טטנוס, שעלת, וירוס סינסיטיאלי נשימתי (RSV), שפעת וזיהומים סטרפטוקוקליים קבוצתיים1,2,3.
אצל בני אדם, נוגדנים אימהיים מועברים באופן פסיבי על פני השליה ומועברים גם דרך חלב אם באמצעות הנקה. עבודה קודמת הוכיחה כי רמות IgA ספציפיות ל- HIV בחלב אם אנושי מאמהות נגועות בנגיף היו קשורות להעברה מופחתת לאחר הלידה של הנגיף, מה שמרמז על תפקיד מגן לחלב אם נגד HIV IgA4. מחקרים אצל פרימטים לא אנושיים הראו כי חיסון נגד HIV יכול לגרום לתגובה נוגדנית משמעותית בחלב אם, ולמרות שתגובות IgG בסרום דומה נגרמו בעקבות חיסון מערכתי לעומת ריר, חיסון הרירית גרם לתגובת IgA גבוהה משמעותית בחלב5,6.
זיהוי מודל בעלי חיים מתאים מבחינה תרגומית למחקרים אלה צריך לקחת בחשבון את סוג השליה ואת המנגנונים של העברת נוגדנים פסיביים, כמו גם את העברת נוגדנים באמצעות חלב אם. ישנם שלושה סוגים עיקריים של שליה ביונקים המבוססים על סוגי הרקמות והשכבות בממשק המאטרנו-עוברי, כולל המוכוריאל (פרימטים, מכרסמים וארנבות), אנדותליוצ’וריאלי (טורפים) ואפיתליוצ’וריאלי (סוסים, חזירים ומהרהרים). השליה המוכוריאלית היא הסוג הפולשני ביותר, המאפשר תקשורת ישירה בין אספקת הדם האימהית לבין המקהלה, או קרום העובר החיצוני ביותר. בהתבסס על מספר שכבות trophoblast, ישנן מספר וריאציות של שליה המוכוריאלית, כולל השליה המומונוצ’וריאלית שנמצאה בפרימטים, השליה המודיקוריאלית בארנבים, והשליה המוטריכוריאלית שנצפתה בחולדות ועכברים7. מגע ישיר זה בין אספקת הדם האימהי לבין chorion מאפשר העברה פסיבית של נוגדנים על פני השליה במהלך ההריון. IgG הוא סוג הנוגדנים היחיד שחוצה באופן משמעותי את השליה האנושית8, ואילו IgA הוא המעמד השולט של איג שנמצא בחלב אם אנושי9. מבין המודלים הרלוונטיים מדעית, רק פרימטים (כולל בני אדם), ארנבות ושפני ניסיונות מעבירים את IgG ברחם ו- IgA בחלב10,11. לכן, מודל הארנב משלב גורמים דומים לאלה בבני אדם השולטים העברה transplacental של IgG והעברה הנקה של IgA.
בנוסף לשמש מודל יוצא דופן עבור חסינות אימהית ופיתוח חיסון, קווי דמיון בין הארנב חללי האף האנושי להפוך אותם מודל מתאים לחיסון תוך-אנלתי. נפח חלל האף הארנב דומה יותר לבני אדם מאשר מודלים מכרסמים המבוססים על מסת גוף יחסית12. בנוסף, Casteleyn et al. 12 הוכיח כי רקמת הלימפה הקשורים לאף (NALT) הוא נפחי יותר בארנב לעומת מכרסמים. ה- NALT ממוקם בעיקר בהיבט הגחוני והגחוני של בשר האף הגחוני ובהיבט לרוחב ודורסולטרלי של בשר האף-אופרינגאלי בארנבים, ואילו במכרסמים, רקמת הלימפה נוכחת רק לאורך ההיבט הגחוני של בשר האףהאף 12. בארנבים, המבנה והמיקום של לימפוציטים תוך-אפיתאליים ולאמינה פרופריה, כמו גם זקיקי הלימפה המבודדים, דומים לבני אדם12.
יתרונות נוספים של שימוש בארנב כמודל לחסינות אימהית ורירית כוללים את פוריותם הגבוהה ותקופת ההיריון הקצרה יחסית. כלי דם אורקולריים גדולים מאפשרים גישה קלה יחסית לכמויות גדולות של דם לאוספים סדרתיים. ניתן לאסוף מגוון דגימות ריר לתגובת נוגדנים ספציפית לאנטיגן, כולל חלב אם13 (בעת הנקה), הפרשות ריר או שטיפות (למשל, אוראלי14,15,16, שטיפת ברונכולבולר13,17,18,19,נרתיק 20,21,22), וצואה20,23,24,25. דגימות חלב ניתן לאסוף בקלות במהלך ההנקה כדי להעריך את נוכחותם של תגובות נוגדנים ספציפיות לאנטיגן. אמנם לא בשפע כמו עבור בני אדם ועכברים, מגוון רחב של ריאגנטים ניסיוניים זמינים עבור מחקרים ספציפיים ארנב מבחנים. במאמר זה נתאר ונדגים חיסון תוך-אפי ואוסף חלב בארנבים לבנים בניו זילנד(Oryctolagus cuniculus).
למרות שלא תואר בפרוטוקול לעיל, רבייה מוצלחת של הארנבים נחוצה למודל אימהי זה ולאפשר איסוף חלב. ארנבים גדלים בקלות על ידי כיסוי חי במסגרת מחקר. מומלץ כי אכן יועבר לכלוב של הדולר לרבייה, כמו גם יכול להיות טריטוריאלי ואגרסיבי אם נשמר בכלוב שלהם עם הכסף. אם הנקבות אינן פתוחות לאחר 15 דקות (כפי שצו?…
The authors have nothing to disclose.
המחברים מבקשים להכיר באגף משאבי בעלי חיים במעבדה באוניברסיטת דיוק ובצוות הבעלות שלהם על עזרתם וטיפול רב בבעלי החיים. בנוסף, המחברים רוצים להכיר את צוות PhotoPath בתוך המחלקה לפתולוגיה על עזרתם בחלקי השמע והווידאו של כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי קרנות מחקר לפי שיקול דעת ממעבדת Staats.
Intranasal Immunization | |||
Anesthesia Machine/Vaporizer | Vet Equip | 901807 | |
Hypodermic Needle (25 g) | Terumo | 07-806-7584 | |
Isoflurane (250 mL Bottle) | Patterson Veterinary | 07-893-1389 | 2-4% |
Luer Lock Syringe (1 mL) | Air-Tite | 07-892-7410 | |
Mucosal Vaccine | N/A | N/A | Experimental Vaccine |
Nose Cone | McCulloch Medical | 07891-1097 | |
Pipette Tips | VWR | 53503-290 | |
Pipettor | VWR | 89079-962 | |
PromAce (Acepromazine maleate) | Boehringer Ingelheim | 07-893-5734 | 1mg/kg IM |
Puralube Sterile Ophthalmic Ointment | Dechra | 07-888-2572 | |
Milk Collection | |||
Alcohol Prep 2-ply | Covidien | 07-839-8871 | |
Anesthesia Machine/Vaporizer | Vet Equip | 901807 | |
Hypodermic Needles (25 g) | Terumo | 07-806-7584 | |
Isoflurane (250 mL Bottle) | Patterson Veterinary | 07-893-1389 | 2-4% |
Luer Lock Syringe (1 mL) | Air-Tite | 07-892-7410 | |
Non-Woven Sponge (4×4) | Covidien | 07-891-5815 | |
Nose Cone | McCulloch Medical | 07891-1097 | |
PromAce (Acepromazine Maleate) | Boehringer Ingelheim | 07-893-5734 | 1mg/kg IM |
Puralube Sterile Ophthalmic Ointment | Dechra | 07-888-2572 | |
Sterile Conical Vial (15 mL) | Falcon | 14-959-49B |