本文描述了使用脊髓针定制钩在3天雏鸡胚胎中的缺血再灌注(I / R)建模,以更好地了解I / R发展和治疗。该模型简单,快速且价格低廉。
缺血和再灌注 (I/R) 疾病(如心肌梗死、卒中和外周血管疾病)是疾病和死亡的一些主要原因。目前有许多 体外 和 体内 模型可用于研究疾病或受损组织中的I / R机制。然而,迄今为止,还没有报告 任何蛋内 I / R模型,这将允许更好地了解I / R机制和更快的药物筛选。本文描述了在3天雏鸡胚胎中使用脊柱针定制钩进行I / R建模,以了解I / R发育和治疗机制。我们的模型可用于研究DNA,RNA和蛋白质水平的异常。此方法简单,快速且价格低廉。当前模型可以独立使用,也可以与现有的 体外 和 体内 I / R模型结合使用。
缺血再灌注组织损伤与许多病理有关,包括心脏病发作、缺血性卒中、创伤和外周血管疾病1,2,3,4,5。这主要是由于缺乏对疾病进展的全面了解以及缺乏有效的研究模型。缺血性损伤发生在组织特定区域的血液供应被切断时。结果,缺血组织最终坏死,尽管速率因组织而异。因此,恢复血液供应可能有助于减轻损害。然而,已经观察到,在某些情况下,再灌注比单独的缺血造成的组织损伤更多6,7,8。因此,需要了解缺血再灌注的分子和细胞机制,以开发有效的治疗干预措施。目前,尚无针对 I/R 损伤的有效治疗方法。这种差异促使创建了新的实验模型,从体外到体内模型,以解决现有问题9,10,11,12,13。
雏鸡胚胎(Gallus gallus domesticus)因其易于获取,道德可接受性,相对较大的尺寸(与其他胚胎相比),低成本和快速生长而被广泛用于研究14。我们使用雏鸡胚胎在发育72小时时通过在脊髓针的帮助下闭塞和释放右维特林动脉来创建 卵内 I / R。我们将其命名为 Hook-I/R 缺血再灌注模型(图 1)。本研究中使用的模型能够准确模拟所有下游过程,包括氧化和炎症途径,这些途径通常与I / R损伤相关15,16,17。
缺血再灌注研究的目标是制定预防细胞死亡和促进恢复的治疗策略29,30。为了克服当前I/R研究的限制,我们设计了一个Hook I/R雏鸡胚胎模型,以产生可靠且可重复的I/R模型。据我们所知,除了研究应激信号(例如,氧化和炎症应激)之外,我们还是在3天雏鸡胚胎中创建的第一个I / R模型,用于常规I / R实验。鉴于发育第3天的大小和可及性的好处<sup class=…
The authors have nothing to disclose.
我们要感谢Hari Shankar先生在摄像和编辑期间提供的重要投入,Baqer Hussain先生提供画外音,Asghar Rizvi先生负责视频编辑,Mohammad Haider先生负责录像,Mohammad Danish Siddiqui先生在实验期间提供协助。
(-80°C) freezer | Haier, China | – | |
1.5mL Centrifuge tube | TARSONS, India | 500010X | |
100mm Petri dish (sterile) | Tarsons, India | 460050 | |
18G Needle (18G×1.5 (1.25×38mm) | Ramsons, India | 13990 | |
1mL Syringe | DISPO VAN | – | |
26G Needle (26G×1/2 (10.45x13mm) | DISPO VAN, india | 30722D | |
37°C egg incubator with adjustable percentage humidity | Gentek, India | GL-100 | |
37°C laboratory incubator | SCIENCE TECH, India | CB 101-14 | |
3-Methyladenine (3-MA) | Sigma Aldrich, USA | M9281 | |
3mL Pasture Pipette | TARSONS, India | 940050 | |
50mL Beaker | TARSONS, India | – | |
5mL Syringe | DISPO VAN, India | IP53 | |
70% ethanol | Merck Millipore, United States | 64-17-5 | |
Adhesive tape/Cello tape | Sunrise, India | – | |
Ambra1 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00387943_m1 | |
Anti-mouse IgG | Cell Signaling Technology, USA | 7076S | |
Anti-Rabbit IgG | Jackson Immuno Research Laboratories, USA | 711-035-152 | |
Atg7 | R&D Systems, USA | MAB6608 | |
Atg7 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00893766_m1 | |
Autoclave Bag | Tarsons, India | 550022 | |
Autoclave Machine | Local made, Lucknow, India | – | |
Beclin-1 | Proteintech, USA | 66665-1-Ig | |
Beta Actin | ImmunoTag, USA | ITT07018 | |
Bovine Serum Albumin | Himedia, Mumbai, India | TC194 | |
Calcium Chloride | Himedia, Mumbai, India | GRM534 | |
Catalase | ImmunoTag, USA | ITT5155 | |
Cleaning wipes | Kimberly-Clark, India | 370080 | |
Cleaved Caspase3 | ImmunoTag, USA | ITT07022 | |
di-Sodium hydrogen phosphate heptahydrate | Himedia, Mumbai, India | GRM39611 | |
Doppler blood flowmeter | Moors instrument, United Kingdom | moorVMS-LDF1 | |
Egg rack | – | – | |
Egg rack | – | – | |
GAPDH | ImmunoTag, USA | M1000110 | |
GAPDH primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs02758991_g1 | |
Glycine | Himedia, Mumbai, India | MB013 | |
Kidney tray | HOSPITO | – | |
LC3A/B | Cell Signaling Technology, USA | 4108S | |
Methanol | Rankem laboratories, Mumbai, India | M0252 | |
Micromanipulator | Narishige, Japan | M-152 | |
N-acetyl-L-cysteine (NAC) | Sigma Aldrich, USA | A7250 | |
Naringenin | Sigma Aldrich, USA | 67604-48-2 | |
NF-kβ | Thermo Fisher Scientific, USA | 51-0500 | |
NLRP3 | ImmunoTag, USA | ITT07438 | |
Nose plier | Local made, Lucknow, India | – | |
Ocular forceps | Stoelting, Germany | 52106-40 | |
Ocular iris | Tufft Surgical Instruments, Jaipur, India | Hard Age Vannas Micro Scissors Angled 8CM / 3 1/8" | |
OHP marker pen | Camlin, India | – | |
ORP-150 | ImmunoTag, USA | ITT08329 | |
Pointed sharp edge scissor | Stoelting, Germany | 52132-11 | |
Potassium Chloride | Himedia, Mumbai, India | MB043 | |
Potassium phosphate monobasic anhydrous | Himedia, Mumbai, India | MB050 | |
Protease Inhibitor | Abcam, United States | Ab65621 | |
SOD-1 | ImmunoTag, USA | ITT4364 | |
Sodium Chloride | Fisher Scientific, Mumbai, India | 27605 | |
Sodium dodecyl sulphate | Himedia, Mumbai, India | GRM886 | |
Spinal needle 25GA; 3.50 IN (90.51 X 90mm) | Ramson, India | GS-2029 | |
Stereo Zoom surgical microscope | Olympus, Japan | SZ2-STU3 | |
Syringe discarder | BIOHAZARD | 882210 | |
Toothed forceps | Stoelting, Germany | 52102-30 | |
Tris Base | G Biosciences, United States | RC1217 | |
Tris Hydrochloric Acid | Himedia, Mumbai, India | MB030 | |
Tween 20 | G Biosciences, United States | RC1227 | |
White Leghorn Chicken 0-day eggs | – | – | |
Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK | MP Biomedicals, LLC, USA | FK009 |