Presentiamo un modello di emorragia intraventricolare neonatale utilizzando cuccioli di ratto che imita la patologia osservata negli esseri umani.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Presentiamo un modello di emorragia intraventricolare neonatale utilizzando cuccioli di ratto che imita la patologia osservata negli esseri umani.
L'emorragia intraventricolare neonatale (IVH) è una conseguenza comune della nascita prematura e porta a lesioni cerebrali, idrocefalo postemorragico (PHH) e deficit neurologici per tutta la vita. Mentre la PHH può essere trattata con procedure di diversione temporanea e permanente del liquido cerebrospinale (CSF) (serbatoio ventricolare e shunt ventricolo-peritoneale, rispettivamente), non ci sono strategie farmacologiche per prevenire o trattare la lesione cerebrale indotta da IVH e l'idrocefalo. Sono necessari modelli animali per comprendere meglio la fisiopatologia della fecondazione in vitro e testare i trattamenti farmacologici. Mentre esistono modelli di IVH neonatale, quelli che provocano in modo affidabile l'idrocefalo sono spesso limitati dalla necessità di iniezioni di grandi volumi, che possono complicare la modellazione della patologia o introdurre variabilità nel fenotipo clinico osservato.
Recenti studi clinici hanno implicato l'emoglobina e la ferritina nel causare l'allargamento ventricolare dopo IVH. Qui, sviluppiamo un modello animale semplice che imita il fenotipo clinico di PHH utilizzando iniezioni intraventricolari di piccolo volume del prodotto di rottura del sangue emoglobina. Oltre a indurre in modo affidabile l'allargamento ventricolare e l'idrocefalo, questo modello provoca lesioni della sostanza bianca, infiammazione e infiltrazione delle cellule immunitarie nelle regioni periventricolari e della sostanza bianca. Questo articolo descrive questo metodo semplice e clinicamente rilevante per modellare IVH-PHH in ratti neonatali utilizzando l'iniezione intraventricolare e presenta metodi per quantificare le dimensioni del ventricolo dopo l'iniezione.
L'IVH neonatale ha origine dalla matrice germinale, un sito di rapida divisione cellulare adiacente ai ventricoli laterali del cervello in via di sviluppo. Questa struttura altamente vascolare è vulnerabile all'instabilità emodinamica correlata alla nascita prematura. Il sangue viene rilasciato nei ventricoli laterali nell'emorragia della matrice germinale (GMH)-IVH quando i vasi sanguigni fragili all'interno della matrice germinale si rompono. Nel caso di IVH di grado IV, l'infarto emorragico periventricolare può anche contribuire al rilascio di prodotti ematici all'interno del cervello. 1 La combinazione di GMH-IVH può causare PHH, in partico....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
NOTA: Tutti i protocolli sugli animali sono stati approvati dal Comitato per la cura e l'uso degli animali delle istituzioni. Vedere la tabella dei materiali per i dettagli su tutti i materiali, i reagenti, le apparecchiature e il software utilizzati in questo protocollo.
1. Preparazione di soluzioni di emoglobina e liquor
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Il successo dell'iniezione è stato confermato con mezzi radiologici e immunoistochimici. Gli animali sottoposti a iniezione di emoglobina hanno sviluppato ventricolomegalia acuta moderata quando valutati tramite risonanza magnetica (Figura 2A), con ventricoli laterali significativamente più grandi a 24 ore e 72 ore dopo l'iniezione di emoglobina rispetto agli animali iniettati con aCSF (Figura 2B, C). Sebbene non vi sia stata alcuna differenza s.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Questo modello IVH che utilizza l'iniezione di emoglobina consente lo studio della patologia dell'IVH specificamente mediata dall'emoglobina. Per gli studi complementari, l'emoglobina può anche essere facilmente somministrata in vitro e non confonde i saggi biochimici per le proteine prodotte da microglia / macrofagi che sono presenti nel sangue intero.
Le principali teorie di IVH-PHH includono l'ostruzione meccanica della circolazione del liquido cerebrospinale, la rottura delle cigl.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.
JMS ha ricevuto finanziamenti da NIH / NINDS R01 NS110793 e K12 (Neurosurgeon Research Career Development Program). BAM ha ricevuto finanziamenti da NIH / NINDS K08 NS112580-01A1, University of Kentucky Neuroscience Research Priority Area Award e un Hydrocephalus Association Innovator Award.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Siringa da insulina da 0,3 mL | BD Microfine + Siringa da insulina | 230-4533 | 0,3-0,5 mL Le sinringhe funzioneranno |
| Microprovetta da 1,5 mL | USA Scientific | 1615-5500 | Lotto n. K194642H -3 511 |
| 4,7T MRI | Agilent/Varian | 4,7T/33 cm | Agilent/Varian DirectDrive 4,7-T (200 MHz) Sistema di risonanza magnetica |
| 6-0 sutura monofilamento | ETHICON | 667G | |
| 9,4T Risonanza magnetica | Bruker | BioSpec 94/20 | Utilizzato in questo protocollo senza criosonda |
| Bilancia analitica | CCURIS Instruments | W3200-320 | |
| CSF artificiale (aCSF) | Tocris Bioscience | 3525 | Numero di lotto: 72A |
| Betadine | Purdue Products L.P. | 301005-00 | NDC 67618-150-09 |
| Carprofene (iniettabile) | Zoetis Inc. | PI 4019448 | Rimadyl |
| Ethanol | Decon Laboratories | 2701 | |
| Pad riscaldante | Sunbeam | E12107-819 | UL 612A, Z-1228-001 |
| Emoglobina | MP Biomedicals | 100714 | LOTTO N. SR02321 |
| Isoflurano | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
| Vaporizzatore di isoflurano | VETEQUIP | 911103 | |
| Luce per l'inturment stereotassico | Dolan-Jenner industries | Fiber-Lite MI-150 | |
| Pompa a siringa per microiniezione | World Precision Instruments | MICRO21 | Serial 184034 T08K |
| Software per risonanza magnetica | Bruker BioSpin | Paravision 360 3.2 | |
| Oxygen | Airgas Healthcare | UN1072 | NUMERO DI LOTTO S1432080XA02 |
| ratti | Sprague DawleyCharles River Laboratories | Codice ceppo: 001 | |
| Strumento stereotassico | Strumenti | KOPF Modello 900LS Lazy Susan | |
| Applicatore sterile con punta in cotone | Fischerbrand | 23-400-118 | |
| Lama chirurgica | covetrus | #10 | |
| Triplo antibiotico topico | Unguento antibiotico | triplo NDC 51672-2120-1 | |
| Software di quantificazione del volume del ventricolo | ITK-SNAP | ITK-SNAP 4.0.0 beta |
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.