세포 추적기 주입을 사용하여 쥐 saccular 측벽 모델에서 Neointima-Forming Cells의 기원을 조사합니다.
Summary
우리는 내피 세포를 추적하기 위해 원 포인트, 친유성 세포 추적기 주사를 수행 한 다음 복부 쥐 대동맥에 동맥 절제술과 측벽 동맥류의 봉합을 수행했습니다. Neointima 형성은 탈세포화 된 동맥류의 부모 동맥에 의존하는 것처럼 보였고 중요한 세포가 풍부한 벽에있는 동맥류 벽 세포로부터의 모집에 의해 촉진되었습니다.
Abstract
미세 외과 적 클리핑은 두개내 동맥류로의 혈류 장벽을 만드는 반면, 혈관 내 치료는 신생내막과 혈전 형성에 의존합니다. 신생내막의 내막 층을 덮고있는 내피 세포의 근원은 불분명하다. 따라서, 본 연구의 목적은 이미 잘 확립된 헬싱키 래트 미세외과 측벽 동맥류 모델에서 세포-트레이서 주사 후 신생내막 형성 세포의 기원을 조사하는 것이었다.
측벽 동맥류는 수컷 루이스 래트에서 대동맥에 탈세포화 또는 중요한 동맥 파우치를 종단 대우로 봉합하여 생성되었다. 동맥류 봉합사로 동맥 절제술 전에, CM-Dil 염료를 함유하는 세포-트레이서 주사를 인접한 혈관의 내피 세포를 표지하고 후속 조치 (FU) 동안 그들의 증식을 추적하기 위해 클램핑된 대동맥 내로 수행하였다. 치료 후 코일링 (n = 16) 또는 스텐트 (n = 15)가 뒤 따른다. FU (7 일 또는 21 일)에서 모든 래트는 형광 혈관 조영술을 받았고 동맥류 수확 및 특정 관심 영역에 대한 면역 조직 학적 세포 수를 통한 거시적 및 조직학적 평가를 받았다.
31 개의 동맥류 중 어느 것도 후속 조치로 파열되지 않았습니다. 네 마리의 동물이 조기에 사망했습니다. 거시적 잔류 관류는 75.0% 코일링된 래트와 7.0%의 스텐트 래트에서 관찰되었다. 세포-추적자-양성 세포의 양은 7일째의 혈전(p=0.01) 및 21일째의 네오인티마(p=0.04)에 대하여 코일링된 동맥류에 비해 탈세포화된 스텐트에서 유의하게 상승하였다. 중요한 동맥류에서 혈전 또는 신생 내막에서 유의미한 차이는 발견되지 않았습니다.
이러한 발견은 스텐트 동맥류에 비해 코일에서 더 나쁜 치유 패턴을 확인합니다. Neointima 형성은 탈세포화 된 동맥류의 부모 동맥에 특히 의존하는 것처럼 보이지만, 중요한 세포가 풍부한 벽에있는 동맥류 벽 세포로부터의 모집에 의해 뒷받침됩니다. 번역 측면에서 스텐트 치료는 고도로 퇴화 된 동맥류에 더 적합 할 수 있지만 코일 만으로는 대부분 건강한 혈관벽을 가진 동맥류에 적합 할 수 있습니다.
Introduction
두개내 동맥류(IA)의 파열로 인한 Subarachnoid 출혈은 높은 이환률 및 사망률 1,2,3,4와 관련된 파괴적인 신경외과적 상태이다. 내피와 내피 간의 직접적인 접촉을 제공하는 미세 외과 적 클리핑 외에도 혈관 내 장치는 파열되고 우연히 발견 된 IA를 치료하기 위해 지난 수십 년 동안 중요성이 커지고 있습니다. 혈관 내 치료 IAs의 치유 반응은 주로 신생내막 형성 및 혈전 조직에 달려 있습니다. 둘 다 인접한 혈관과 동맥류 벽으로부터의 세포 이동에 따라 시너지 효과가있는 과정입니다. 5 현재까지 혈관 내 처리된 동맥류의 신생내막 형성에서 내피 세포의 기원은 불분명하다. 신인티마 형성 세포가 모집되는 출처에 관한 문헌에서 지속적인 논쟁이 있습니다.
쥐의 복부 대동맥에 CM-Dil 염료 ( 물질의 표 참조)를 주사 한 세포 추적기를 사용하여, 우리는 두 개의 다른 FU 시점 (7 일과 21 일째)에서 신생 내막 형성에서 부모 동맥에서 기원되는 내피 세포의 역할을 분석하는 것을 목표로했습니다 (그림 1). 이 모델의 장점은 동맥류 봉합 전에 부모 동맥 에서 생체 내에서 직접 국소 세포 추적기 인큐베이션하여 나중 시점에서 FU를 허용하는 것입니다. 생체내 주입 기술, 예컨대 세포-트레이서 인큐베이션은 문헌에 기재되어 있지 않다. 이 기술의 장점은 직접, 원 포인트, 수술 내, 생체 내 주사로 모델을 강력하고 재현 가능하게 만듭니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 연구는 신생내막 형성이 동맥류 복합체의 모 동맥에서 기원 한 내피 세포를 통해 매개되지만 중요한 동맥류의 동맥류 벽에서 유래 된 세포의 모집에 의해 뒷받침된다는 것을 보여줍니다. 그럼에도 불구하고, 동맥류 치유에서 순환 전구 세포의 역할은 논란의 여지가있는12,13 가지로 남아 있습니다. 전반적으로, 31마리의 수컷 루이스 래트가 이 조사에…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 Alessandra Bergadano, DVM, PhD에게 장기적인 동물 건강에 대한 헌신적 인 감독에 감사드립니다. 이 연구는 연구위원회, Kantonsspital Aarau, Aarau, Switzerland 및 Swiss National Science Foundation SNF (310030_182450)의 연구 기금에 의해 지원되었습니다.
Materials
| 3-0 resorbable suture | Ethicon Inc., USA | VCP428G | |
| 4-0 non-absorbable suture | B. Braun, Germany | G0762563 | |
| 6-0 non-absorbable suture | B. Braun, Germany | C0766070 | |
| 9-0 non-absorbable suture | B. Braun, Germany | G1111140 | |
| Atipamezol | Arovet AG, Switzerland | ||
| Bandpass filter blue | Thorlabs | FD1B | any other |
| Bandpass filter green | Thorlabs | FGV9 | any other |
| Bipolar forceps | any other | ||
| Bicycle spotlight | any other | ||
| Board (20 x 10 cm) | any other | ||
| Buprenorphine | Indivior, Switzerland | 1014197 | |
| Camera | Sony NEX-5R, Sony, Tokyo, Japan | ||
| Cannula (27-1/2 G) | any other | ||
| Cell count software | Image-J version 1.52n, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, https://imagej.nih.gov/ij/ | ||
| CellTracker CM-Dil dye | ThermoFisher SCIENTIFIC, USA | C7000 | |
| Coil-Device | Styker, Kalamazoo, MI, USA | 2 cm of Target 360 TM Ultra, 2-mm diameter | |
| Desinfection | any other | ||
| Eye-lubricant | any other | ||
| Fentanyl | Sintetica, S.A., Switzerland | 98683 | any generic |
| Flumazenil | Labatec-Pharma, Switerzland | ||
| Fluoresceine | Curatis AG | 5030376 | any generic |
| Fluorescence microscope | Olympus BX51, Hamburg, Germany; Cell Sens Dimension Imaging software v1.8 | ||
| Foil mask | any other | ||
| Glucose (5%) | any other | ||
| Heating pad | Homeothermic Control Unit, Harvard, Edenbridge, England | any other | |
| Isotonic sodium chloride solution (0.9%) | Fresenius KABI | 336769 | any generic |
| Isoflurane | any generic | ||
| Longuettes | any other | ||
| Meloxicam | Boehringer Ingelheim | P7626406 | any generic |
| Medetomidine | Virbac, Switzerland | QN05CM91 | |
| Micro needle holder | any other | ||
| Midazolam | Roche, Switzerland | ||
| Monitoring-system | Starr Life Sciences Corp., 333 Allegheny Ave, Oakmont, PA 15139, United States | ||
| Needle holder | any other | ||
| O2-Face mask | any other | ||
| Operation microscope | OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany | any other | |
| Oxygen | any other | ||
| Rectal temperature probe | any other | ||
| Scalpell | Swann-Morton | 210 | any other |
| Small animal shaver | any other | ||
| Smartphone | any other | ||
| Sodium dodecyl sulfate (0.1%) | Sigma-Aldrich | 11667289001 | |
| Soft feed | Emeraid Omnivore | any generic | |
| Soft tissue forceps | any other | ||
| Soft tissue spreader | any other | ||
| Stainless steel sponge bowls | any other | ||
| Stent-Device | Biotroni, Bülach, Switzerland | modified magmaris device, AMS with polymer coating, 6-mm length, 2-mm diameter | |
| Sterile micro swabs | any other | ||
| Straight and curved microforceps | any other | ||
| Straight and curved microscissors | any other | ||
| Straight and curved forceps | any other | ||
| Surgery drape | any other | ||
| Surgical scissors | any other | ||
| Syringes 1 mL, 2 mL, and 5 mL | any other | ||
| Tape | any other | ||
| Vascular clip applicator | B. Braun, Germany | FT495T | |
| Yasargil titan standard clip (2x) | B. Braun Medical AG, Aesculap, Switzerland | FT242T | temporary |
Riferimenti
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