Verbesserte renale Denervierung milderte Hypertonie durch Angiotensin-II-Infusion
Summary
Hier stellen wir ein Protokoll für die renale sympathische Denervierung (RDN) bei Mäusen mit Bluthochdruck vor, die durch Angiotensin-II-Infusion induziert wurde. Das Verfahren ist wiederholbar, bequem und ermöglicht es, die Regulationsmechanismen von RDN bei Bluthochdruck und Herzhypertrophie zu untersuchen.
Abstract
Die Vorteile der renalen sympathischen Denervierung (RDN) auf den Blutdruck wurden in einer Vielzahl von klinischen Studien in den letzten Jahren nachgewiesen. Der Regulierungsmechanismus von RDN bei Bluthochdruck bleibt jedoch schwer fassbar. Daher ist es wichtig, ein einfacheres RDN-Modell in Mäusen zu etablieren. In dieser Studie wurden osmotische Minipumpen, die mit Angiotensin II gefüllt waren, in 14 Wochen alte C57BL/6-Mäuse implantiert. Eine Woche nach der Implantation der Mini-osmotischen Pumpe wurde ein modifiziertes RDN-Verfahren an bilateralen Nierenarterien der Mäuse mit Phenol durchgeführt. Altersgeschlechtliche Mäuse erhielten Kochsalzlösung und dienten als Scheingruppe. Der Blutdruck wurde zu Studienbeginn und danach jede Woche für 21 Tage gemessen. Dann wurden Nierenarterie, Bauchaorta und Herz zur histologischen Untersuchung mit H & E- und Masson-Färbung gesammelt. In dieser Studie präsentieren wir ein einfaches, praktisches, wiederholbares und standardisiertes RDN-Modell, das Bluthochdruck kontrollieren und Herzhypertrophie lindern kann. Die Technik kann periphere renale Sympathikusnerven ohne Nierenarterienschädigung denervieren. Im Vergleich zu früheren Modellen erleichtert das modifizierte RDN die Untersuchung der Pathobiologie und Pathophysiologie der Hypertonie.
Introduction
Bluthochdruck ist eine schwere chronische Herz-Kreislauf-Erkrankung auf der ganzen Welt. Unkontrollierte Hypertonie könnte Zielorgane schädigen und zu Herzinsuffizienz, Schlaganfall und chronischen Nierenerkrankungen beitragen 1,2,3. Die Prävalenz von Bluthochdruck ist zwischen 1991 und 2007 in China von 20% auf 31% gestiegen. Die Zahl der Erwachsenen mit Bluthochdruck in China könnte sich nach einer kürzlich erfolgten Überarbeitung der diagnostischen Kriterien für Bluthochdruck (130/80 mmHg)4 verdoppeln. Hypertonie kann durch Medikamente kontrolliert werden, jedoch sind etwa 20% der Patienten nicht in der Lage, ihre Hypertonie zu kontrollieren, selbst wenn sie mindestens drei blutdrucksenkende Medikamente (einschließlich eines Diuretikums) in maximal verträglicher Dosis erhalten, was zur Entwicklung einer arzneimittelresistenten Hypertonie führen kann5.
Die renale sympathische Denervierung (RDN) hat sich als mögliche Behandlung von Bluthochdruck erwiesen. Im Jahr 2009 berichteten Krum und Kollegen erstmals über eine resistente Hypertoniebehandlung mit RDN. Es wurde festgestellt, dass eine perkutane Nierenarterienablation bei Patienten eine anhaltende Blutdrucksenkung bewirken kann6. Das Scheitern der Symplicity Hypertension 3 (HTN-3) -Studie behinderte jedoch die Anwendung von RDN7 und machte RDN zu einer umstrittenen Therapie. Dennoch ist die Aussicht auf RDN noch nicht ausgeschlossen. Jüngste klinische Studien, darunter RADIANCE-HTN SOLO, SPYRAL HTN-OFF MED/ON MED und SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal, haben die Wirksamkeit von RDN bei Bluthochdruck 8,9,10,11,12 bestätigt. Daher müssen detailliertere mechanistische Untersuchungen durchgeführt werden, um die Auswirkungen von RDN zu untersuchen.
Der Hauptzweck dieser Studie ist es, zu zeigen, wie RDN in Mäusen modifiziert werden kann, um eine einfachere und stabilere Operation zu erzeugen. Eine große Anzahl von Experimenten hat verschiedene Ansätze der RDN untersucht, wie intravaskuläre Kryoablation, extrakorporalen Ultraschall und lokale Anwendung einer Chemikalie oder eines Neurotoxins in verschiedenen Tiermodellen 13,14,15,16,17. Das RDN-Modell, das durch chemische Ablation mit Phenol erzeugt wird, ist ein etabliertes experimentelles Modell zur Untersuchung der Pathogenese der sympathischen Aktivierung bei Bluthochdruck. Dieses Modell wird durch chemische Korrosion der Nierensympathikusnerven mit 10% Phenol/Ethanol-Lösung unter Verwendung eines Wattestäbchens18 erzeugt. Auf der einen Seite hemmt das konventionelle RDN möglicherweise die renale sympathische Aktivität, was dann die Reninsekretion und die Natriumresorption verringert und den renalen Blutfluss erhöht. Auf der anderen Seite unterdrückt es das Renin-Angiotensin-Aldosteron-System19. Dadurch wirkt sich RDN positiv auf Bluthochdruck aus. Dem durch chemische Ablation erzeugten RDN-Modell fehlen jedoch Ablationskriterien und Ablationszeit, und die Details des experimentellen Verfahrens sind noch unklar. Es liegen auch keine technischen Berichte vor. In diesem Bericht beschreiben wir ein chirurgisches Protokoll für die Erzeugung eines RDN-Modells mit Phenol unter Verwendung von Wiegepapier bei Angiotensin II (Ang II) induzierter Hypertonie bei C57BL/6-Mäusen. Wir wickeln die Nierenarterie mit phenolhaltigem Wiegepapier ein und vereinheitlichen die Ablationszeit, was dazu beiträgt, ein reproduzierbareres, zuverlässigeres RDN-Modell zu erstellen. Dieses experimentelle Modell zielt darauf ab, die Wirkung von RDN auf Bluthochdruck zu bewerten.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ob RDN den Blutdruck senken könnte, ist seit der Veröffentlichung des negativen Ergebnisses der Symplizitätsstudie HTN-3 umstritten 7,25. Die verschiedenen klinischen Studien und Tierversuche haben jedoch positive und wirksame Ergebnisse von RDN bei hypertensiven Menschen und Tieren gezeigt 9,10,11,12,13,14,15,16,17.<sup c…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (81770420), der Science and Technology Commission of Shanghai Municipality (20140900600), dem Shanghai Key Laboratory of Clinical Geriatric Medicine (13dz2260700), dem Shanghai Municipal Key Clinical Specialty (shslczdzk02801) und dem Center of geriatric coronary artery disease, Huadong Hospital Affiliated to Fudan University unterstützt.
Materials
| Angiotensin II | Sangon Biotech | CAS:4474-91-3 | To make a hypertensive animol model |
| Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody | Abcam | ab137869 | To evaluate the expression of TH of renal nerves |
| Blood Pressure Analysis | Visitech Systems | BP-2000 | Measure the blood pressure of mice |
| Mini-osmotic pump | DURECT Corporation | CA 95014 | To fill with Angiotensin II |
| Norepinephrine ELISA Kit | Abcam | ab287789 | to measure renal norepinephrine levels |
| Phenol | Sangon Biotech | CAS:108-95-2 | Damage the renal sympathetic nerve |
| Weighing paper | Sangon Biotech | F512112 | To destroy renal nerve with weighing paper immersed with phenol; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112. |
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