Dinamik ışık saçılması (DLS), intravenöz olarak uygulanan demir-karbonhidrat komplekslerinin partikül boyutunu ve dağılımını değerlendirmek için uygun bir test olarak ortaya çıkmıştır. Bununla birlikte, protokoller standardizasyondan yoksundur ve analiz edilen her demir-karbonhidrat kompleksi için değiştirilmesi gerekir. Bu protokol, demir sakarozun analizi için uygulamayı ve özel hususları açıklamaktadır.
İntravenöz olarak uygulanan demir-karbonhidrat nanopartikül kompleksleri, demir eksikliğini tedavi etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu sınıf, bu ajanları fizikokimyasal olarak karakterize etmek için mevcut metodolojiler için gerekli koşullara değişen duyarlılık sergileyen yapısal olarak heterojen birkaç nanopartikül kompleksi içerir. Şu anda, demir-karbonhidrat komplekslerinin kritik kalite özellikleri tam olarak belirlenmemiştir. Dinamik ışık saçılması (DLS), bozulmamış parçacık boyutunu ve dağılımını belirlemek için temel bir yöntem olarak ortaya çıkmıştır. Bununla birlikte, laboratuvarlar arasında metodolojilerin standardizasyonu, bireysel demir-karbonhidrat ürünleri için gerekli spesifik modifikasyonlar ve boyut dağılımının en iyi şekilde nasıl tanımlanabileceği konusunda zorluklar hala devam etmektedir. Önemli olarak, kullanılan seyreltici ve seri seyreltmeler standartlaştırılmalıdır. Numune hazırlama ve veri raporlama yaklaşımlarındaki geniş farklılıklar, demir-karbonhidrat ajanlarının karşılaştırılmasında DLS kullanımını sınırlandırmaktadır. Burada, Z-ortalaması ve polidispersite indeksini kullanarak demir-karbonhidrat kompleksi, demir sakarozun boyut ve boyut dağılımını ölçmek için sağlam ve kolayca tekrarlanabilir bir protokolü detaylandırıyoruz.
Demir sakkaroz (IS), bir polinükleer demir-oksihidroksit çekirdeği ve sakkaroz kompleksinden oluşan nanopartiküllerden oluşan kolloidal bir çözeltidir. İD, oral demir takviyesini tolere etmeyen veya oral demirin etkili olmadığı çok çeşitli altta yatan hastalık durumları olan hastalar arasında demir eksikliğini tedavi etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır1. IS, biyolojiklerle orantılı karmaşık kimyaya sahip bir ilaç sınıfı olan Gıda ve İlaç İdaresi (FDA) tarafından tanımlanan karmaşık ilaçların ilaç sınıfına aittir2. Kompleks ilaç ürünlerinin düzenleyici değerlendirmesi, takip eden kompleks ilaçları doğru bir şekilde karşılaştırmak için ek ortogonal fizikokimyasal yöntemler ve / veya klinik öncesi veya klinik çalışmalar gerektirebilir 3,4. Bu önemlidir, çünkü birkaç çalışma, takip eden bir IS ürününe karşı IS’nin kullanımının aynı klinik sonuçları üretmediğini bildirmiştir. Bu, IS ürünleri arasındaki fizikokimyasal özelliklerdeki farklılıkları tespit etmek için uygun olan yeni ve ortogonal karakterizasyon tekniklerinin kullanımının kritikliğini vurgulamaktadır 5,6.
IS’nin boyut ve boyut dağılımının doğru bir şekilde aydınlatılması klinik öneme sahiptir, çünkü partikül büyüklüğü opsonizasyonun hızında ve derecesinde önemli bir etkili faktördür – bu karmaşık ilaçların biyodağılımında ilk kritik adım 7,8. Partikül boyutundaki ve partikül boyutu dağılımındaki küçük değişiklikler bile, demir-oksit nanopartikül komplekslerinin farmakokinetik profilindeki değişikliklerle ilişkilendirilmiştir 9,10. Brandis ve ark. tarafından yapılan yeni bir çalışma, DLS tarafından ölçülen partikül boyutunun, referans olarak listelenen bir ilacı ve jenerik bir sodyum ferrik glukonat ürününü karşılaştırırken sırasıyla 14.9 nm ± 0.1 nm ve10.1 nm ± 0.1 nm, p < 0.001) anlamlı derecede farklı olduğunu göstermiştir. Demir-karbonhidrat ürünlerinin tutarlı partiden partiye kalitesi, güvenliği ve etkinliği tamamen üretim sürecinin ölçeklendirilmesine bağlıdır ve potansiyel üretim sapması dikkatlice düşünülmelidir9. Üretim süreci artık sakkaroz ile sonuçlanabilir ve bu, üreticiye bağlı olarak değişecektir12. Üretim süreci değişkenlerindeki herhangi bir değişiklik, nihai karmaşık ilaç ürününde yapı, karmaşık stabilite ve in vivo eğilim9 açısından önemli değişikliklere yol açabilir.
İlaç tutarlılığını değerlendirmek ve ilacın in vivo davranışını tahmin etmek için, karmaşık nanoilaçların fizikokimyasal özelliklerini belirlemek için çağdaş ortogonal analitik metodolojilere ihtiyaç vardır. Bununla birlikte, metodolojilerin standardizasyonunda bir eksiklik vardır, bu da sonuç raporlamasında yüksek derecede laboratuvarlar arası çeşitliliğe neden olabilir13. Bu zorlukların küresel düzenleyici otoriteler ve bilimsel topluluk tarafından tanınmasınarağmen14, İD’nin fizikokimyasal özelliklerinin çoğu yeterince tanımlanmamıştır ve mevcut düzenleyici rehberlik belgeleri bağlamında kritik kalite özelliklerinin tam olarak tamamlanması tanımlanmamıştır15. FDA tarafından demir-karbonhidrat kompleksleri için yayınlanan ürüne özgü kılavuz belgeler taslağı, DLS’yi takip eden ürünlerin boyut ve boyut dağılımını değerlendirmek için bir prosedür olarak önermektedir16,17.
Birçok yayın, IS nanopartikül boyutlarını belirlemek için DLS protokollerini ayrıntılı olarak belirlemiştir13,18. Bununla birlikte, numune hazırlama, prosedür koşulları, enstrümantasyon ve enstrümantasyon ayar parametreleri yayınlanan yöntemler arasında farklı olduğundan, sonuçları yorumlamak için standartlaştırılmış bir yöntemin yokluğunda DLS sonuçları doğrudan karşılaştırılamaz13,18. Metodolojilerdeki ve veri raporlama yaklaşımlarındaki çeşitlilik, bu özelliklerin karşılaştırmalı amaçlar için uygun şekilde değerlendirilmesini sınırlamaktadır19. Önemli olarak, IS’yi değerlendirmek için daha önce yayınlanan DLS protokollerinin çoğu, kolloidal çözeltilerdeki nanopartiküllerin Z-ortalaması hesaplanmış hidrodinamik yarıçapını13,18 oranında yükselttiği gösterilen serbest sakarozun varlığından dolayı süspansiyondaki sakkarozun difüzyonunun etkisini hesaba katmamaktadır. Bu protokol, IS’nin partikül boyutunun ve dağılımının ölçülmesi için metodolojiyi standartlaştırmayı amaçlamaktadır. Yöntem bu amaçla geliştirilmiş ve doğrulanmıştır.
DLS, ilaç geliştirme ve düzenleyici değerlendirmedeki uygulamalar için nanopartiküllerin boyut ve boyut dağılımının belirlenmesinde temel bir tahlil haline gelmiştir. DLS tekniklerindeki ilerlemelere rağmen, özellikle kolloidal çözeltilerdeki demir-karbonhidrat kompleksleri için geçerli olan seyreltici seçimi ve numune hazırlama ile ilgili metodolojik zorluklar hala mevcuttur. Daha da önemlisi, demir-karbonhidrat nanoilaçları için DLS yöntemleri biyolojik ortamda (örneğin, plazma<sup class="xre…
The authors have nothing to disclose.
Hiç kimse
Equipment | |||
Zetasizer Nano ZS | Malvern | NA | equipped with Zetasizer software 7.12, Helium Neon laser (633 nm, max. 4 mW) and 173° backscattering geometry |
Materials | |||
Disposable plastic cuvettes | |||
LLG-Disposable plastic cells | LLG labware | LLG-Küvetten, Makro, PS; Order number 9.406011 | |
low-particle water | (The use of freshly deionized and filtered (pore size 0.2 μm) water is recommended). | ||
Microlitre pipette | |||
Venofer 100 mg/5 mL | Vifor Pharma | ||
Volumetric flask 25 mL | |||
Nanosphere | Thermo | 3020A | Particle Standard |
Software | |||
Origin Pro v.8.5 | Origin Lab Corporation |