Qui, presentiamo metodi dettagliati per la preparazione e la valutazione del vaccino tumorale nanoemulsione autoassemblato nasale in vitro e in vivo.
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Articolo metodologico
Preparazione, caratteristiche, tossicità e valutazione dell'efficacia del vaccino tumorale nanoemulsione autoassemblato nasale in vitro e in vivo
In questo articolo
Sommario
Abstract
I peptidi epitopici hanno attirato l'attenzione diffusa nel campo dei vaccini tumorali a causa della loro sicurezza, alta specificità e produzione conveniente; in particolare, alcuni epitopi MHC I-limitati possono indurre un'efficace attività citotossica dei linfociti T per eliminare le cellule tumorali. Inoltre, la somministrazione nasale è una tecnica di consegna efficace e sicura per i vaccini tumorali grazie alla sua praticità e alla migliore compliance del paziente. Tuttavia, i peptidi epitopici non sono adatti per la consegna nasale a causa della loro scarsa immunogenicità e mancanza di efficienza di consegna. Le nanoemulsioni (NE) sono sistemi termodinamicamente stabili che possono essere caricati con antigeni e consegnati direttamente alla superficie della mucosa nasale. Ile-Lys-Val-Ala-Val (IKVAV) è il pentapeptide principale della laminina, un peptide legante l'integrina espresso dalle cellule epiteliali respiratorie umane. In questo studio, un vaccino antitumorale epitopo autoassemblato intranasale contenente il peptide sintetico IKVAV-OVA257-264 (I-OVA ) è stato preparato con un metodo di emulsificazione a bassa energia. La combinazione di IKVAV e OVA257-264 può migliorare l'assorbimento dell'antigene da parte delle cellule epiteliali della mucosa nasale. Qui, stabiliamo un protocollo per studiare le caratteristiche fisico-chimiche mediante microscopia elettronica a trasmissione (TEM), microscopia a forza atomica (AFM) e diffusione dinamica della luce (DLS); stabilità in presenza di proteine mucina; tossicità esaminando la vitalità cellulare delle cellule BEAS-2B e dei tessuti nasali e polmonari dei topi C57BL/6; assorbimento cellulare mediante microscopia a scansione laser confocale (CLSM); rilasciare profili mediante imaging di piccoli animali in vivo; e l'effetto protettivo e terapeutico del vaccino utilizzando un modello portatore di tumore E.G7. Prevediamo che il protocollo fornirà indizi tecnici e teorici per lo sviluppo futuro di nuovi vaccini per mucosa peptidica epitopo delle cellule T.
Introduzione
Come una delle innovazioni più importanti per la salute pubblica, i vaccini svolgono un ruolo chiave nella lotta contro l'onere globale delle malattie umane1. Ad esempio, attualmente sono in fase di sperimentazione oltre 120 vaccini candidati per le malattie COVID-19, alcuni dei quali sono stati approvati in molti paesi2. Rapporti recenti affermano che i vaccini contro il cancro hanno effettivamente migliorato i progressi dei trattamenti clinici contro il cancro perché dirigono il sistema immunitario dei malati di cancro a riconoscere gli antigeni come estranei al corpo3. Inoltre, epitopi multipli....
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Protocollo
Gli esperimenti sugli animali sono stati condotti in conformità con la linea guida sugli animali da laboratorio per la revisione etica del benessere degli animali (GB / T 35892-2018) e sono stati approvati dal Comitato etico e benessere degli animali da laboratorio della Terza Università medica militare. I topi sono stati sottoposti a eutanasia mediante iniezione intraperitoneale di 100 mg/kg di pentobarbital di sodio all'1%.
1. Preparazione dell'I-OAV NE
- Mescolare 1 mg di monofosforil lipide A (MPLA) con 100 μL di DMSO, vortice per 5 minuti e lasciare riposare per 4 ore a temperatura ambiente (RT) per sciogliersi....
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Risultati
Secondo il protocollo, abbiamo completato la preparazione e la valutazione sperimentale in vitro e in vivo della somministrazione del nanovaccino del tumore nasale. TEM, AFM e DLS sono mezzi efficaci per la valutazione delle caratteristiche di base del potenziale zeta superficiale e della dimensione delle particelle del nanovaccino (Figura 1). Le cellule epiteliali BEAS-2B sono un utile modello di screening per i test di tossicità in vitro dei vaccini nasali (
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Discussione
I nanovaccini funzionalizzati con membrane di immunociti hanno grandi vantaggi nella terapia mirata alla malattia e gli effetti collaterali sono ridotti al minimo da proprietà come il tropismo tumorale unico, l'identificazione di bersagli specifici, circolazione prolungata, interazioni intercellulari migliorate e bassa tossicità sistemica. Possono anche essere facilmente integrati con altri moduli di trattamento per trattare i tumori in modo cooperativo16,20. Gli.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti noti o relazioni personali che potrebbero aver influenzato il lavoro riportato in questo articolo.
Ringraziamenti
Questo studio è stato supportato dal n. 31670938, 32070924, 32000651 del National Natural Science Foundation Program of China, n. 2014jcyjA0107 e n. 2019jcyjA-msxmx0159 del Natural Science Foundation Project Program di Chongqing, n. 2020XBK24 e n. 2020XBK26 dei progetti speciali dell'Università medica dell'esercito e n. 202090031021 e n. 202090031035 del programma nazionale di innovazione e imprenditorialità per studenti universitari.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Piastre a 96 pozzetti | Corning Incorporated, USA | CLS3922 | |
| Lettore di micropiastre Bio-Rad 6.0 | Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, USA& | nbsp; Kit Bio-Rad 6.0 | |
| CCK-8 | Dojindo, Giappone | Centrifuga CK04 | |
| 5810 R | Eppendorf, Germania | ||
| DAPI | Sigma-Aldrich, St. Louis, USA | D9542 | |
| siero fetale bovino (FBS) | Hyclone (Life Technology, USA) | SH30088.03 | |
| Certificato FITC I-OVA | Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd. | ||
| HF 90/240 Incubatrice Heal | Force, Svizzera | NA | |
| HPLC | Fornitore verificato - Shanghai Botai Biotechology Co., Ltd. | E2695 | |
| Microscopio invertito | Nikon, Giappone | DSZ5000X | |
| IPC-208 | Chong Qing University, Cina | NA | |
| IVIS system | Calibro Life Science Società a responsabilità limitata | NA | |
| JEM-1230 TEM | JEOL Società a responsabilità limitata del Giappone | 1230 TEM | |
| Malvern NANO ZS | Malvern Instruments Ltd., Regno Unito | NA | |
| MPLA& | nbsp; Invivogen Lit. Co. | tlrl-mpla | |
| Unguento al solfato di neomicina | Shanghai CP General Pharmaceutical Co., Ltd. | ||
| OVA257– 264 | Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd. | ||
| RPMI 1640 medium | Hyclone (Life Technology, USA) | SH30809.01 | |
| Coniugazione di peptidi sintetici (I-OVA) di IKVAV-PA | Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd. | ||
| Zeiss LSM800 microscopio a fluorescenza confocale a scansione laser | Zeiss, Germania | Zeiss LSM800 |
Riferimenti
- Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).
- Mohammed, I., et al.
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Ristampe e permessi
