Qui, presentiamo un protocollo per l'iniezione intra-cardiaca di cellule tumorali della prostata umane per generare un modello murino con lesioni da metastasi ossee.
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Articolo metodologico
Iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata umane per creare un modello murino di xenotrapianto di metastasi ossee
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Come la neoplasia maschile più comune, il cancro alla prostata (PC) è al secondo posto nella mortalità, principalmente a causa di un tasso di metastasi ossee del 65% -75%. Pertanto, è essenziale comprendere il processo e i relativi meccanismi delle metastasi ossee del cancro alla prostata per lo sviluppo di nuove terapie. Per questo, un modello animale di metastasi ossee è uno strumento essenziale. Qui, riportiamo procedure dettagliate per generare un modello murino di metastasi ossee tramite iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata. Un sistema di imaging a bioluminescenza può determinare se le cellule tumorali della prostata sono state accuratamente iniettate nel cuore e monitorare le metastasi delle cellule tumorali poiché ha grandi vantaggi nel monitoraggio dello sviluppo della lesione metastatica. Questo modello replica lo sviluppo naturale delle cellule tumorali disseminate per formare micro-metastasi nell'osso e imita il processo patologico delle metastasi ossee del cancro alla prostata. Fornisce uno strumento efficace per ulteriori esplorazioni dei meccanismi molecolari e degli effetti terapeutici in vivo di questa malattia.
Introduzione
Il cancro alla prostata è il tumore più frequente negli uomini in 112 paesi e si colloca al secondo posto per mortalità nei paesi con un indice di sviluppo umano più elevato 1,2. La maggior parte dei decessi nei pazienti con cancro alla prostata sono causati da metastasi e circa il 65% -75% dei casi svilupperà metastasi ossee 3,4. Pertanto, la prevenzione e il trattamento delle metastasi ossee del cancro alla prostata sono urgentemente necessari per migliorare l'esito clinico dei pazienti con cancro alla prostata. Il modello animale di metastasi ossee ....
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Protocollo
Topi atimici maschi BALB/c di sei-otto settimane (n = 10) sono stati alloggiati in gabbie di topi ventilate individualmente (5 topi/gabbia) in una stanza per animali priva di agenti patogeni specifici (SPF) nelle condizioni di 12 ore di ciclo luce/buio, con libero accesso al mangime SPF e all'acqua sterile. I topi sono stati nutriti in modo adattivo per una settimana prima degli esperimenti. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal comitato per il benessere degli animali dell'Università di Shanghai di medicina tradizionale cinese.
1. Preparazione delle cellule
- Il giorno dell'iniezione di cellul....
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Risultati
L'imaging a bioluminescenza offre enormi vantaggi nel monitoraggio dello sviluppo della lesione metastatica per un modello di iniezione intracardiaca. Subito dopo l'iniezione di cellule tumorali (entro 24 ore), è stata utilizzata la bioluminescenza per visualizzare le cellule tumorali che entrano nella circolazione generale (Figura 3A). L'evidente segnalazione di bioluminescenza su tutto il corpo sarà visibile quando le cellule tumorali vengono iniettate correttamente nella circolazione arte.......
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Discussione
L'iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata umane per generare metastasi ossee è un modello murino ideale per esplorare le funzioni e i meccanismi delle metastasi ossee del cancro alla prostata e valutare l'efficacia terapeutica. Gli studi hanno dimostrato che il danno osseo si verifica molto probabilmente nella tibia prossimale e nel femore distale17, che può essere dovuto alla loro elevata vascolarizzazione e attività metabolica.
Poiché la metastasi o.......
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Dichiarazioni
Tutti gli autori non dichiarano interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Questo lavoro è supportato da sovvenzioni del National Key R&D Program of China (2018YFC1704300 e 2020YFE0201600), della National Nature Science Foundation (81973877 e 82174408), dei progetti di ricerca all'interno del budget della Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (2021LK047) e dello Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Siringhe e aghi da 1 ml | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd | 20200411 | Le cellule sono state iniettate nei ventricoli dei topi |
| Macchina per anestesia | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | R500IP | Attrezzatura per l'anestesia dei topi |
| Contatore cellulare automatico | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Per il conteggio delle cellule |
| BALB/c topi atimici | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Maschio | di 6-8 settimane, topi maschi |
| Sistema di imaging a bioluminescenza | Shanghai Baitai Technology Co., Ltd | Vieworks | Per monitorare la crescita del tumore e le metastasi polmonari se le cellule iniettate sono etichettate con luciferasi |
| Provetta da centrifuga (15 mL, 50 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, soluzione EDTA Corning | |
| Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd | G1105 | Per la decalcificazione del tessuto osseo | |
| F-12 medium | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 21700075, GIBCO | Terreno di coltura cellulare |
| Soluzione di formalina | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | BL539A | Per il fissaggio del campione di ciascun topo |
| Isoflurano | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Per anestesia |
| Lipofectamina 2000 | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 11668027, Thermo fisher | Reagente di trasfezione plasmidico |
| Linea cellulare PC-3 | Banca cellulare dell'Accademia cinese delle scienze | TCHu 158 | Linea cellulare per cancro alla prostata |
| Soluzione salina tamponata con fosfato | Beyotime Biotechnology | ST447 | Lavare le cellule dell'osteosarcoma umano |
| Tripsina (0,25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co. , Ltd | 25200056, Gibco | Per il distacco delle cellule |
| Vettore (pLV-luciferasi) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | VL3613 | Plasmide per il |
| sistema di imaging a raggi X | Brook (Beijing) Technology Co., Ltd | FX PRO | Per ottenere immagini a raggi X per rilevare la crescita del tumore |
| μ CT80 | Shenzhen Fraun Technology Service Co., Ltd | Scanco Medical AG, Svizzera | Per il rilevamento della distruzione ossea. Il mico-CT è dotato di 3DCalc, ricostruzione del cono, e μ Software di visualizzazione del modello CT Ray V3.4A. |
Riferimenti
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Fuchs, H. E., Jemal, A. Cancer Cancerstatistics, 2021. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (1), 7-33 (2021).
- Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimat....
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Ristampe e permessi
