Waiting
Elaborazione accesso...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

फील्ड संग्रह और प्रयोगशाला नियमित Rhodiola crenulata की पहचान

Published: October 27, 2023 doi: 10.3791/65947
Automatic Translation
*1, *2,3, 1, 4, 3, 1,2,3, 2
1School of Ethnic Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Meishan Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 4Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
* These authors contributed equally

Summary

यहाँ, हम निवास स्थान से Rhodiola Crenulata की पहचान का वर्णन, संयंत्र आकृति विज्ञान, औषधीय गुणों, सूक्ष्म सुविधाओं, और पतली परत क्रोमैटोग्राफी .

Abstract

औषधीय सामग्रियों की पहचान दवा सुरक्षा का आधार और गारंटी है। अधिकांश वैज्ञानिक शोधकर्ता जड़ी-बूटियों की सरल, तेज, प्रभावी और सस्ती पहचान प्रक्रिया के पक्ष में हैं। Rhodiola crenulata एक पारंपरिक तिब्बती दवा है जो उच्च ऊंचाई पर उगाई जाती है, मुख्य रूप से तिब्बत, युन्नान और चीन के सिचुआन क्षेत्रों में वितरित की जाती है। Rhodiola crenulate कई bioactivity के पास, विरोधी भड़काऊ, विरोधी हाइपोक्सिया और एंटीऑक्सीडेंट गुण के रूप में, और विकास के लिए काफी क्षमता है. बढ़ती बाजार की मांग और संसाधन सामग्री में तेजी से कमी के साथ, Rhodiola crenulata के भ्रमित उत्पादों की एक बड़ी संख्या लोगों को परेशान किया गया है. इसलिए, यह प्रोटोकॉल नियमित प्रयोगशाला परीक्षण के साथ संयुक्त क्षेत्र में रोडियोला क्रेनुलाटा की पहचान के लिए एक मानक प्रक्रिया का परिचय देता है। निवास स्थान, सूक्ष्म विशेषताओं और पतली परत क्रोमैटोग्राफी का संयोजन निस्संदेह रोडियोला क्रेनुलता को जल्दी, कुशलतापूर्वक और आर्थिक रूप से पहचान लेगा, तिब्बती चिकित्सा के निरंतर विकास और औषधीय सामग्रियों के गुणवत्ता नियंत्रण में योगदान देगा।

Introduction

हर्बल दवा का चीन में एक लंबा इतिहास और समृद्ध अनुप्रयोग अनुभव है, और यह शेनॉन्ग के हर्बल क्लासिक1 में पहली व्यवस्थित रिकॉर्डिंग थी। मलेरिया पर लागू आर्टेमिसिनिन की खोज ने हर्बल दवा के विकास को एक नए चरण1 में बढ़ावा दिया। हर्बल दवा के सटीक तंत्र को उजागर करने के लिए आधुनिक वैज्ञानिक प्रौद्योगिकी का उपयोग हर्बल दवा के लिए उपयोग दर और मांग बढ़ जाती है, इसके लिए एक नया अंतरराष्ट्रीय बाजार खोलने 2,3,4. हालांकि, इससे नकारात्मक प्रभावों की एक श्रृंखला हुई है। गैर-पेशेवरों को हर्बल दवा की विशेषताओं की अस्पष्ट समझ है, जो हर्बल दवा के उपयोग को एक बड़ा सुरक्षा जोखिम का सामना करतीहै 5.

Rhodiola crenulata, Rhodiola प्रजातियों के पौधों में से एक, मुख्य रूप से तिब्बत, उत्तर पश्चिम युन्नान और चीन के पश्चिमी सिचुआन (चित्रा 1)6,7में वितरित किया जाता है. Rhodiola crenulata में "स्फूर्तिदायक क्यूई और रक्त परिसंचरण को बढ़ावा देने, नाड़ी को साफ करने और अस्थमा को शांत करने"8,9,10,11के कार्य के माध्यम से हाइपोक्सिक से संबंधित बीमारियों के उपचार के लिए सैलिड्रोसाइड, टायरोसोल, गैलिक एसिड और अन्य यौगिक शामिल हैं। फील्ड जांच से पता चलता है कि रोडियोला क्रेनुलाटा अल्पाइन ताल क्षेत्रों, गली ढलानों और रॉक दरारों में 4,000-5,600 मीटर की ऊंचाई पर पाया जा सकता है। इसका बढ़ता वातावरण ठंडा है, धूप और तीव्र विकिरण से भरा है, और यह अल्पाइन घास के मैदान के पारिस्थितिकी तंत्र से संबंधित है। Rhodiola crenulata विकास इलाके के अनुसार lamellar और बिंदु की तरह आबादी में वितरित किया जा सकता है, और जीन प्रवाह पार परागण के माध्यम से बाहर किया जा सकता है.

जीनस Rhodiola के पराग गर्भपात, अवैध खुदाई, और पतित पारिस्थितिक पर्यावरण Rhodiola crenulata एक लुप्तप्राय प्रजाति 6,12 बनाने. Rhodiola crenulata के उच्च औषधीय मूल्य को देखते हुए, नकली उत्पादों बाजार में प्रवाह की उम्मीद कर रहे हैं. यह लेख Rhodiola crenulata के निवास स्थान और कुछ सुविधाजनक प्रयोगशाला पहचान विधियों प्रस्तुत करता है. सबसे पहले, हम Rhodiola crenulata और इसके औषधीय गुणों के विकास पर्यावरण मनाया. दूसरे, औषधीय पाउडर की माइक्रोस्ट्रक्चर माइक्रोस्कोप द्वारा देखी गई थी। अंतिम चरण मुख्य बिंदु है। Rhodiola crenulata के प्रतिनिधि घटकों को अलग किया गया और एक निश्चित पदार्थ में इन घटकों के विभिन्न सोखना या विघटन गुणों के अनुसार पहचाना गया. औषधीय पौधों के डीएनए आधारित प्रमाणीकरण या चयापचय विश्लेषण विधियों जटिल और महंगा13 कर रहे हैं. ये बुनियादी, सुविधाजनक, और किफायती तरीके जल्दी से Rhodiola crenulata की पहचान कर सकते हैं.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Rhodiola crenulata Zhuoda हिमपात पर्वत, Ganzi काउंटी, Ganzi तिब्बती स्वायत्त प्रान्त, सिचुआन प्रांत, चीन (N 31.44570 °, ई 99.96086 °, 4892 मीटर) से एकत्र किया जाता है। चेंगदू यूनिवर्सिटी ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन के स्कूल ऑफ एथनिक मेडिसिन में प्रोफेसर यी झांग ने इन पौधों को असली पौधों के रूप में प्रमाणित किया है।

1. Rhodiola crenulata का संग्रह

  1. Rhodiola crenulata के निवास स्थान के नक्शे तस्वीर.
  2. पूरे पौधे की तस्वीर, पत्तियों, calyx, और Rhodiola crenulata के प्रकंद.
  3. के भीतर मातम और टूटे हुए पत्थरों को साफ करने के लिए एक कुदाल का प्रयोग करें 1 Rhodiola crenulata के मीटर बाद चिकनी खनन सुनिश्चित करने के लिए.
  4. एक कुदाल के साथ मिट्टी को खोदें जब तक कि पूरे राइजोस्फीयर को देखा न जाए और टैपरोट को इकट्ठा करें।
    नोट:औषधीय भागों में उपयोग किए जाने वाले रोडियोला क्रेनुलाटा की जड़ों और प्रकंदों को शरद ऋतु में एकत्र किया जाना चाहिए, जब फूल मुरझा जाता है।

2. विशेषता पहचान

  1. बिना सहायता प्राप्त आंख के साथ Rhodiola crenulata की उपस्थिति लक्षण का निरीक्षण करें: बेलनाकार और छोटे taproots और rhizomes, भूरे रंग की सतह, एक गुलाबी पैटर्न के साथ झिल्लीदार पीले एपिडर्मिस, और नारंगी-लाल या बरगंडी स्लाइस.
  2. गंध से इसे पहचानें: यह नाक के पास एक सुगंधित गंध देता है।
  3. इसे स्वाद से पहचानें: जड़ का एक छोटा टुकड़ा मुंह में लें, पहले घूंट लें और फिर चबाएं, थोड़ा कड़वा स्वाद लें, फिर मीठा।

3. औषधीय पाउडर में स्टार्च कणिकाओं की सूक्ष्म पहचान

  1. एक ब्रश के साथ Rhodiola crenulata की सतह पर मिट्टी निकालें, 40 डिग्री सेल्सियस पर ओवन में डाल दिया, और जड़ी बूटियों हर बारी 24 घंटे.
    नोट: औषधीय सामग्री के टूटने में आसानी को नमी सुखाने के लिए मानक माना जाता है।
  2. पाउडर मशीन का उपयोग करके सूखे औषधीय पदार्थों को पाउडर करें और औषधीय नंबर 3 छलनी का उपयोग करके औषधीय पाउडर को छान लें ( सामग्री की तालिकादेखें)।
  3. एक साफ स्लाइड ( सामग्री की तालिकादेखें) ले लो, एक विदारक सुई ( सामग्री की तालिकादेखें) के साथ पाउडर खुदाई, और यह 2 मिमी के भीतर स्लाइड के एक तिहाई पर समान रूप से जगह है.
  4. पाउडर में विआयनीकृत पानी की एक बूंद जोड़ने के लिए एक ग्लास ड्रॉपर (सामग्री की तालिकादेखें) का उपयोग करें। तरल स्तर को जल्दी से छूने और पाउडर को कवर करने के लिए कवर ग्लास के एक छोर को पकड़ने के लिए एक चिमटी (सामग्री की तालिकादेखें) का उपयोग करें।
    नोट: एक समान नमूना मिश्रण सुनिश्चित करने के लिए धीरे से पानी और औषधीय पाउडर मिश्रण करने के लिए एक शारीरिक सुई का उपयोग करें। स्लाइड, पाउडर और कवर ग्लास के बीच कोई हवाई बुलबुले नहीं होना चाहिए।
  5. माइक्रोस्कोप खोलें ( सामग्री की तालिकादेखें) और इसे सुरक्षित करने के लिए मंच पर चरण 3.4 में स्लाइड रखें। पाउडर देखने के लिए प्रकाश स्रोत और मोटे फोकस सर्पिल को समायोजित करें। ठीक पैराफोकल सर्पिल को समायोजित करें जब तक कि ऊतकों को स्पष्ट रूप से देखा न जाए। 40x उद्देश्य पर स्विच करें और स्टार्च दानों का निरीक्षण करें।
    नोट: एकल या एकाधिक अनाज के रूप में पेश अनाज स्टार्च, और गर्भनाल बिंदु हेरिंगबोन या दरार के आकार का दिखाई देता है।

4. औषधीय पाउडर में कैथेटर, कॉर्क कोशिकाओं, फाइबर, लकड़ी पैरेन्काइमा कोशिकाओं और वर्णक द्रव्यमान की सूक्ष्म पहचान

  1. एक साफ स्लाइड ( सामग्री की तालिकादेखें) ले लो, एक विदारक सुई ( सामग्री की तालिकादेखें) के साथ पाउडर खुदाई, और स्लाइड के एक तिहाई पर जगह है.
  2. पाउडर में क्लोरल हाइड्रेट की एक बूंद (सामग्री की तालिकादेखें) जोड़ने के लिए एक ग्लास ड्रॉपर (सामग्री की तालिकादेखें) का उपयोग करें। एक चिमटी के साथ स्लाइड लें (सामग्री की तालिकादेखें) और इसे अल्कोहल लैंप में तीन बार गर्म करें, हर बार 1 एस के लिए।
    नोट: हीटिंग के दौरान बुलबुले से बचा जाना चाहिए। तरल गैर-बहने वाला रहता है, यह दर्शाता है कि प्रवेश पूरा हो गया है।
  3. ग्लिसरीन की एक बूंद जोड़ने के लिए एक ग्लास ड्रॉपर का उपयोग करें ( सामग्री की तालिकादेखें)। तरल स्तर को जल्दी से छूने के लिए कवर ग्लास के एक छोर को पकड़ने के लिए चिमटी का उपयोग करें।
  4. माइक्रोस्कोप खोलें और इसे सुरक्षित करने के लिए प्लेटफॉर्म पर स्लाइड रखें। पाउडर देखने के लिए प्रकाश स्रोत और मोटे फोकस सर्पिल को समायोजित करें। ठीक पैराफोकल सर्पिल को समायोजित करें जब तक कि ऊतकों को स्पष्ट रूप से देखा न जाए। कैथेटर, कॉर्क कोशिकाओं, फाइबर, लकड़ी पैरेन्काइमा कोशिकाओं, और वर्णक ब्लॉक एक 40x उद्देश्य लेंस पर स्विच करके निरीक्षण करें.
    नोट: कॉर्क कोशिकाओं के बहुभुज या लंबे बहुभुज, स्पष्ट पेचदार संरचना के साथ सर्पिल पोत, कैल्शियम ऑक्सालेट रेत क्रिस्टल युक्त जाइलम पैरेन्काइमा, और लाल या भूरा-लाल वर्णक ब्लॉक।

5. पतली परत क्रोमैटोग्राफिक की तैयारी (टीएलसी) Rhodiola crenulata के नमूने और इसके संदर्भ

  1. संतुलन पर वजन कागज रखें ( सामग्री की तालिकादेखें) और वजन 3 ग्राम Rhodiola crenulata के पाउडर.
  2. पाउडर को 100 एमएल शंक्वाकार बोतल ( सामग्री की तालिकादेखें) में लें, और एक बड़े पेट विंदुक के साथ मेथनॉल के 25 एमएल जोड़ें ( सामग्री की तालिकादेखें)। अल्ट्रासोनिक उपकरण में शंक्वाकार बोतल रखो। पावर को 250 W, फ्रीक्वेंसी को 40 kHz, और समय को 30 मिनट ( सामग्री की तालिकादेखें) पर सेट करें, और इंस्ट्रूमेंट चालू करें।
    नोट: अल्ट्रासाउंड उपकरण का उद्देश्य यह सुनिश्चित करना है कि Rhodiola crenulata का पाउडर बाद में पतली परत क्रोमैटोग्राफिक प्रयोगों के परिणामों को प्रभावित किए बिना पूरी तरह से भंग हो गया है।
  3. शंक्वाकार बोतल निकालें और बाहरी बोतल को कमरे के तापमान (आरटी) तक बहते पानी से धो लें।
  4. 1 एमएल सिरिंज के साथ चरण 5.3 में तैयार तरल के 800 माइक्रोन को एस्पिरेट करें। 0.22 माइक्रोन माइक्रोप्रोसेस फिल्टर झिल्ली ( सामग्री की तालिकादेखें) के साथ फ़िल्टर करें और क्रोमैटोग्राफिक नमूना बोतल में रोडियोला क्रेनुलाटा के मिडस्ट्रीम नमूना समाधान के 400 माइक्रोन एकत्र करें।
  5. वजन और सैलिड्रोसाइड, टायरोसोल, और गैलिक एसिड के 2 मिलीग्राम जोड़ें ( सामग्री की तालिकादेखें) क्रमशः 3 अलग 100 एमएल शंक्वाकार बोतलों में। हर शंक्वाकार बोतल में एक बड़ा पेट विंदुक के साथ मेथनॉल के 25 एमएल जोड़ें.
  6. अल्ट्रासोनिक उपकरण में शंक्वाकार बोतल रखो, 250 डब्ल्यू, आवृत्ति 40 किलोहर्ट्ज, और 30 मिनट के लिए समय के लिए बिजली सेट, और 5.3 कदम दोहराएँ ( सामग्री की तालिकादेखें).
  7. 1 एमएल सिरिंज के साथ चरण 5.6 में तैयार तरल के 800 माइक्रोन को एस्पिरेट करें। 0.22 माइक्रोन माइक्रोप्रोसेसर फिल्टर झिल्ली ( सामग्री की तालिकादेखें) के साथ फ़िल्टर करें और इसी क्रोमैटोग्राफिक नमूना बोतलों में मिडस्ट्रीम सैलिड्रोसाइड, टायरोसोल और गैलिक एसिड मानक समाधान के 400 माइक्रोन एकत्र करें।

6. टीएलसी पहचान

  1. पिपेट ट्राइक्लोरोमीथेन (5 एमएल), एथिल एसीटेट (4 एमएल), मेथनॉल (2 एमएल), और फॉर्मिक एसिड (0.5 एमएल) ( सामग्री की तालिकादेखें)। डबल-टैंक क्रोमैटोग्राफी सिलेंडर के एक तरफ जोड़ें ( सामग्री की तालिकादेखें), हिलाएं, और समान रूप से मिलाएं। ऊपरी सिलेंडर सिर को कवर करें।
  2. गैलिक एसिड, सैलिड्रोसाइड, टायरोसोल मानक समाधान, और रोडियोला क्रेनुलाटा समाधान को नमूना रैक पर A1-A4 की स्थिति में रखें।
  3. नमूना तालिका पर 5 सेमी x 10 सेमी सिलिकॉन शीट ( सामग्री की तालिकादेखें) रखें। स्वचालित सैंपलिंग मशीन शुरू करें ( सामग्री की तालिकादेखें), और वायु नियंत्रण वाल्व खोलें।
  4. विज़नकैट्स सॉफ़्टवेयर खोलें (सामग्री की तालिकादेखें)। क्लिक करें नया > नया फ़ोल्डर (नाम Rhodiola crenulata नमूना परीक्षण) > ठीक है. क्लिक करें,नई विधि (नाम Rhodiola crenulata नमूना परीक्षण) > ठीक > एटीएस 4.
  5. चरण परिभाषा समाप्त करें पर क्लिक करें. विवरण संपादित करने के लिए ट्रैक असाइनमेंट पर क्लिक करें (गैलिक एसिड, सैलिड्रोसाइड, टायरोसोल, और रोडियोला क्रेनुलाटा नमूना)।
  6. HPTLC चरण पर क्लिक करें. पतली परत पैरामीटर (5 सेमी x 10 सेमी) सेट करें। एप्लिकेशन प्रकार (बैंड) का चयन करें, पैरामीटर सेट करें (तालिका 1), और ओके बटन पर क्लिक करें।
  7. ओपन फिलिंग/रिंसिंग क्वालिटी। चेक केवल क्रमादेशित वॉल्यूम भरें। शीशी नीचे स्तर (मिमी) 0.5 करने के लिए सेट करें, और ठीक बटन क्लिक करें.
  8. निष्पादित विधि पर क्लिक करें।
  9. ट्रैक असाइनमेंट बटन पर क्लिक करें, केंद्र की जांच करें, और पैरामीटर (तालिका 2) सेट करें।
  10. स्वचालित नमूनाकरण के लिए जारी रखें बटन पर क्लिक करें।
  11. स्वचालित सैंपलिंग मशीन और एयर वाल्व बंद करें। स्वचालित नमूना मशीन से सिलिकॉन शीट निकालें।
  12. चरण 6.1 में डबल टैंक क्रोमैटोग्राफी सिलेंडर के दूसरी तरफ सिलिकॉन शीट रखो, ऊपरी सिलेंडर सिर को कवर करें, और 20 मिनट के लिए पूर्व-संतृप्त करें।
  13. धीरे एक चिमटी के साथ पतली परत प्लेट के ऊपरी छोर दबाना, जल्दी से विकास एजेंट में सिलिकॉन शीट डालना, और ऊपरी सिलेंडर सिर को कवर.
    नोट: सिलिकॉन शीट को बाहर निकालें जब सामने का किनारा पतली परत प्लेट के ऊपरी छोर से 0.5-1.0 सेमी दूर हो।
  14. कार्बनिक विलायक वाष्पित होने के बाद, क्रोमोजेनिक परिणाम प्राप्त करने के लिए कमरे के तापमान पर सिलिकॉन शीट की सतह पर क्रोमोजेनिक समाधान स्प्रे करें।
    नोट: क्रोमोजेनिक घोल एक जलीय घोल है जिसमें 2% FeCl3 और 1% K3[Fe(CN)6] होता है।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

इस प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल की पहचान और क्षेत्र में Rhodiola crenulate एकत्र करने का वर्णन करता है. Rhodiola crenulate अल्पाइन ताल क्षेत्रों में रहने के लिए जाता है, गली ढलानों, और उच्च ऊंचाई पर रॉक दरारें. निवास स्थान, पूरे पौधे, फूल, और Rhodiola crenulate की पत्तियों चित्रा 2 में दिखाया जा सकता है. Rhodiola crenulate एक लाल-भूरे रंग के प्रकंद (चित्रा 3A) है. औषधीय पाउडर की एक प्रतिनिधि छवि चित्रा 3 बी में दिखाया गया है। उपरोक्त प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल के अनुसार, सूक्ष्म परिणामों को निम्नानुसार सूचीबद्ध किया जा सकता है: 1) भूरे पीले या रंगहीन कॉर्क कोशिकाओं, बड़ी उपस्थिति, बहुभुज या लंबे बहुभुज, थोड़ी मोटी दीवारों (चित्रा 3सी)के साथ; 2) स्टार्च अनाज एकल या एकाधिक अनाज के रूप में पेश करते हैं, और गर्भनाल बिंदु हेरिंगबोन या दरार के आकार का दिखाई देता है (चित्रा 3 डी); 3) मुख्य रूप से सर्पिल जहाजों कि बारीकी से व्यवस्थित कर रहे हैं (चित्रा 3E); 4) चादरों में पेश करने वाले अक्रोमेटस और अंडाकार जाइलम पैरेन्काइमा (चित्रा 3एफ); 5) अनियमित आकार, भूरा-लाल वर्णक ब्लॉक (चित्रा 3 जी)। पतली परत जुदाई के परिणामों से पता चला है कि Rhodiola crenulata नमूना (A4) गैलिक एसिड (A1), salidroside (A2), tyrosol मानक समाधान (A3) (चित्रा 3H) के क्रोमैटोग्राम के अनुरूप स्थिति में एक ही रंग के धब्बे के रूप में दिखाई दिया। गैलिक एसिड, salidroside, और tyrosol Rhodiola crenulate के प्रमुख और प्रतिनिधि घटक हैं. इन परिणामों से पता चलता है कि Rhodiola crenulata की एक प्रारंभिक पहचान प्रोटोकॉल में चर्चा की गई परीक्षणों के साथ संभव है.

Figure 1
चित्रा 1: रोडियोला क्रेनुलता का वितरण मानचित्र। (ए) रोडियोला क्रेनुलाटा मुख्य रूप से चीन, भारत, नेपाल और भूटान14 में वितरित किया जाता है। (बी) रोडियोला क्रेनुलाटा मुख्य रूप से तिब्बत, किंघाई, सिचुआन, युन्नान और चीन के गुइझोउ (सॉफ्ट आर्कगिस 10.6 द्वारा उत्पादित) में वितरित किया जाता है। सांख्यिकीय डेटा वनस्पति विज्ञान संस्थान15,16 की वेबसाइटों से आता है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2: Rhodiola crenulata संयंत्र की तस्वीर. (ए) Rhodiola crenulate के बायोटोप. (बी) Rhodiola crenulate के बंद शॉट. (सी) रोडियोला क्रिनुलेट का पूरा पौधा। (डी) रोडियोला क्रेनुलता का फूल। (ई) रोडियोला क्रिनुलेट की पत्तियां। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: सूक्ष्म विशेषताओं और Rhodiola crenulata की पतली परत क्रोमैटोग्राम. (ए) Rhodiola crenulata की औषधीय जड़. (बी) रोडियोला क्रेनुलता की औषधीय सामग्री शक्ति। (C) कॉर्क सेल। (डी) स्टार्च अनाज। (E) सर्पिल पोत। (एफ) जाइलम पैरेन्काइमा (कैल्शियम ऑक्सालेट क्रिस्टल)। (छ) वर्णक। (एच) सैलिड्रोसाइड (ए 1), गैलिक एसिड (ए 2), टायरोसोल (ए 3), और रोडियोला क्रेनुलाटा (ए 4) की पतली परत क्रोमैटोग्राफी पृथक्करण। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पैरामीटर विकल्प
आवेदन की स्थिति वाई (मिमी) 10
पहला ट्रैक स्थिति (मिमी) 10
ट्रैक दूरी (मिमी) 10
आवेदन की लंबाई (मिमी) 5
आवेदन चौड़ाई (मिमी) 0.5

तालिका 1: स्वचालित नमूना स्थिति की पैरामीटर सेटिंग्स।

शीशी आईडी या क़िस्‍म वॉल्यूम (μL) पद प्रकार
1 सैलिड्रोसाइड 3 ए 1 हवाला
11 गैलिक एसिड 1 ए 2 हवाला
12 टायरोसोल 2 ए 3 हवाला
13 Rhodiola crenulate नमूना 2 ए 4 नमूना

तालिका 2: स्वचालित नमूना क्रम की पैरामीटर सेटिंग्स।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

दुनिया में रोडियोला पौधों की 90 से अधिक प्रजातियां हैं, और चीन में सभी प्रजातियों की 60% से अधिक पाई जाती हैं, रोडियोला क्रेनुलाटा, रोडियोला रसिया, रोडियोलस अचलिनेंसिस और रोडियोला एल्गिडा17 सहित आम हैं। रोडियोला क्रेनुलाटा, चीनी फार्माकोपिया (2020) के पहले भाग में दर्ज किया गया, एक पारंपरिक तिब्बती दवा है जो उच्च ऊंचाई पर उगाई जाती है। Rhodiola crenulata के लिए बाजार की मांग वार्षिक बढ़ रही है, इसलिए स्रोत का सही उपयोग सुनिश्चित करना सुरक्षित उपयोग सुनिश्चित करने की कुंजी है. विशेष रूप से, क्षेत्र चुनने से सरल और तेजी से प्रयोगशाला नियमित पहचान के मानकीकरण को नजरअंदाज नहीं किया जा सकता है। यह उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी, मास स्पेक्ट्रोमेट्री, और अंतर सरल अनुक्रम दोहराता है कि सही समय लेने वाली है, जटिल और महंगा 18,19,20 है जो अन्य Rhodiola प्रजातियों से Rhodiola crenulate की पहचान कर सकते हैं. इस बीच, हम संवेदी मान्यता की एक बहुआयामी मूल्यांकन विधि की स्थापना की है (ई नाक और रंग विश्लेषण) और एचपीएलसी विधि Rhodiola crenulate21,22 भेद करने के लिए.

प्रत्येक औषधीय सामग्री का अपना अनूठा बढ़ता वातावरण, सूक्ष्म संरचना विशेषताओं और सूचकांक घटक होते हैं। यह प्रोटोकॉल Rhodiola crenulata की पहचान के लिए एक व्यापक विधि प्रदान करता है, क्षेत्र की पहचान से प्रयोगशाला माइक्रोस्कोपी और पतली परत क्रोमैटोग्राफी का उपयोग कर सत्यापन. Rhodiola crenulata मुख्य रूप से 3000 मीटर से अधिक ऊंचाई पर बढ़ता है, कम तापमान, कम ऑक्सीजन, और उच्च पराबैंगनी विकिरण क्षेत्रों23. Rhodiola crenulata एक रसीला जड़ी बूटी है, जो इसकी सहज दृश्य विशेषता है. इसका पाउडर सुगंधित गंध के साथ लाल भूरे रंग का दिखाई देता है। अपनी आदतों के आधार पर, संयंत्र आकृति विज्ञान, फूल, और पत्तियों, Rhodiola crenulata क्षेत्र में अन्य Rhodiola प्रजातियों से अलग है. औषधीय सामग्रियों के सूक्ष्म परिणामों ने स्टार्च कणिकाओं, लकड़ी के पैरेन्काइमा कोशिकाओं (कैल्शियम ऑक्सालेट रेत क्रिस्टल सहित), कॉर्क कोशिकाओं, नाली (मुख्य रूप से थ्रेडेड नाली), और बड़ी मात्रा में लाल वर्णक के अस्तित्व को दिखाया। टीएलसी मल्टीकंपोनेंट नमूनों को अलग करने के लिए एक क्रोमैटोग्राफिक पृथक्करण तकनीक है, जिसका उपयोग आमतौर पर चीनी औषधीय सामग्रियों की पहचान में किया जाता है। गैलिक एसिड, tyrosol, और salidroside अक्सर Rhodiola crenulate के सूचकांक घटकों के रूप में पहचाना जाता है 24. पतली परत क्रोमैटोग्राफी के परिणामों से पता चला है कि Rhodiola crenulata के समाधान नियंत्रण के रूप में इसी स्थिति में एक ही रंग धब्बे से पता चला (गैलिक एसिड, tyrosol, और salidroside). यह दर्शाता है कि Rhodiola crenulata गैलिक एसिड शामिल, tyrosol, और salidroside. बढ़ते पर्यावरण और सूक्ष्म परिणामों के ज्ञान के साथ संयुक्त, Rhodiola crenulata प्रारंभिक रूप से पहचाना जा सकता है.

यह ध्यान देने योग्य है कि अद्वितीय बढ़ते वातावरण यह निर्धारित करता है कि 3000 मीटर की ऊंचाई से नीचे जंगली रोडियोला क्रेनुलाटा होना लगभग असंभव है। इसके अलावा, फूलों की अवधि के दौरान Rhodiola crenulata की जड़ों और प्रकंद की कटाई करने की अनुशंसा नहीं की जाती है। प्रयोगशाला सूक्ष्म पहचान के लिए, जड़ों को सुखाने और पाउडर sifting सूक्ष्म नमूनों की सफल तैयारी के लिए आवश्यक शर्तें हैं. यह सुनिश्चित करना कि स्लाइड, औषधीय पाउडर और कवर ग्लास के बीच कोई हवाई बुलबुला नहीं है, माइक्रोस्कोप के तहत विशेषता संरचना को देखने के लिए भी महत्वपूर्ण है। पतली परत क्रोमैटोग्राफी के लिए, सिलिका जेल प्लेट की पूर्व-संतृप्ति, उचित विकास एजेंट, और नमूना एकाग्रता परीक्षण नमूने में विभिन्न घटकों को सफलतापूर्वक अलग करने के लिए महत्वपूर्ण कारक हैं। पारंपरिक मैनुअल नमूनाकरण की तुलना में, इस प्रोटोकॉल की स्वचालित नमूना प्रक्रिया निस्संदेह परिणामों की सटीकता और प्रयोग की पुनरावृत्ति को बढ़ाती है। सुगंध और स्वाद की पहचान की व्यक्तिपरकता बहुत मजबूत है और इससे गलत निर्णय हो सकते हैं। उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी, एच-परमाणु चुंबकीय अनुनाद, और मास स्पेक्ट्रोमेट्री की तुलना में, पतली परत क्रोमैटोग्राफी मात्रात्मक औषधीय सामग्री25 में यौगिकों की सामग्री का विश्लेषण नहीं कर सकते हैं. हालांकि डीएनए बारकोडिंग हर्बल पहचान में बेहतर सटीकता है, इसकी उच्च कीमत निर्धारित करता है कि यह औषधीय सामग्री26 की पहचान में सार्वभौमिक नहीं है. इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल में प्रदान की पतली परत क्रोमैटोग्राफी तकनीक के साथ संयुक्त क्षेत्र से प्रयोगशाला पहचान और माइक्रोस्कोपी लगभग सभी औषधीय सामग्री के लिए लागू होता है. यह किसी भी औषधीय हर्बल सामग्री की पहचान के लिए एक सस्ता, सरल और तेज़ प्रक्रिया है।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81973569, 82274207 और 82104533), टीसीएम (XKTD2022013) के चेंगदू विश्वविद्यालय के ज़िंगलिन स्कॉलर रिसर्च प्रमोशन प्रोजेक्ट और निंग्ज़िया के प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (2023BEG02012) द्वारा समर्थित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
0.22 μm millipore filter Millipore SLGP033RB
Automatic sampling machine CAMAG ATS 4
Chloral hydrate Fuzhou Brunei Technology Co., Ltd ST1002
Chromatographic sample bottles Zhejiang ALWSCI Technology Co., Ltd C0000008
Conical flask Sichuan Shubo Co., Ltd 1121
Cover glass Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd 10211818c
Dissecting needle Shanghai Bingyu Fluid Technology Co., Ltd BY-5026
Electronic balance SHIMADZU ATX124
Ethyl acetate Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd 2022120901
Formic acid Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd 2021110801
Gallic acid Chengdu Herbpurify Co., Ltd M-017
Glycerol Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd 10010618
High speed  crusher Beijing Zhongxingweiye Instrument Co., Ltd FW-100
Methanol Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd 20230108
Microscope Chongqing Oprec Nistrument Co.,  Ltd B203
Microscope slide Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd 7105P-G
Oven Shanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd DHG-8145
Pharmacopoeia sieve Hangzhou Xingrun sieve factory 572423281330
Pipette Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd 120302008
Salidroside Chengdu Herbpurify Co., Ltd H-040
Saturate tank  Yancheng Liegu Technology Co., Ltd 10*20 P-1
Silica gel plate Yantai Jiangyou Silica Gel Development  Co., Ltd HSG20211227
Trichloromethane Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd 20221013-1
Tweezer  Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd 130302027
Tyrosol Chengdu Herbpurify Co., Ltd L-042
Ultrasound equipment Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd SB-8200DTS
Volumetric pipet Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd 120301006

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Zhang, J., et al. Traditional herbal medicine and nanomedicine: Converging disciplines to improve therapeutic efficacy and human health. Advanced Drug Delivery Reviews. 178, 113964 (2021).
  2. Yin, R., et al. The positive role and mechanism of herbal medicine in Parkinson's Disease. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 9923331 (2021).
  3. Li, F. S., Weng, J. K. Demystifying traditional herbal medicine with modern approach. Nature Plants. 3, 17109 (2017).
  4. da Fonseca, L. R., et al. Herbal medicinal products from Passiflora for anxiety: An unexploited potential. The Scientific World Journal. 2020, 6598434 (2020).
  5. Aziato, L., Antwi, H. O. Facilitators and barriers of herbal medicine use in Accra, Ghana: an inductive exploratory study. BMC Complementary and Alternative Medicine. 16, 142 (2016).
  6. Tao, H., et al. Rhodiola species: A comprehensive review of traditional use, phytochemistry, pharmacology, toxicity, and clinical study. Medicinal Research Reviews. 39 (5), 1779-1850 (2019).
  7. Wang, Y., et al. The dietary supplement Rhodiola crenulata extract alleviates dextran sulfate sodium-induced colitis in mice through anti-inflammation, mediating gut barrier integrity and reshaping the gut microbiome. Food & Function. 12 (7), 3142-3158 (2021).
  8. Xie, N. Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-κB/NLRP3-mediated inflammation. Phytomedicine. 103, 154240 (2022).
  9. Wang, X., et al. Salidroside, a phenyl ethanol glycoside from Rhodiola crenulata, orchestrates hypoxic mitochondrial dynamics homeostasis by stimulating Sirt1/p53/Drp1 signaling. Journal of Ethnopharmacology. 293, 115278 (2022).
  10. Ma, D., et al. Chemical characteristics of Rhodiola Crenulata and its mechanism in acute mountain sickness using UHPLC-Q-TOF-MS/MS combined with network pharmacology analysis. Journal of Ethnopharmacology. 294, 115345 (2022).
  11. Wang, X., et al. Rhodiola crenulata attenuates apoptosis and mitochondrial energy metabolism disorder in rats with hypobaric hypoxia-induced brain injury by regulating the HIF-1α/microRNA 210/ISCU1/2(COX10) signaling pathway. Journal of Ethnopharmacology. 241, 111801 (2019).
  12. d'Avigdor, E., Wohlmuth, H., Asfaw, Z., Awas, T. The current status of knowledge of herbal medicine and medicinal plants in Fiche, Ethiopia. Journal of Ethnobiology and Ethnomedicine. 10, 38 (2014).
  13. Sánchez, M., González-Burgos, E., Divakar, P. K., Gómez-Serranillos, M. P. DNA-based authentication and metabolomics analysis of medicinal plants samples by DNA barcoding and ultra-high-performance liquid chromatography/triple quadrupole mass spectrometry (UHPLC-MS). Plants (Basel, Switzerland). 9 (11), 1601 (2020).
  14. Rhodiola renulata (Hook.fil & Thomson) H.Ohba. , Available from: https://www.gbif.org/species/4200529 (2023).
  15. Plant + data center. , Available from: https://www.iplant.cn/ (2023).
  16. Chinese virtual herbarium. , Available from: https://www.cvh.ac.cn/ (2023).
  17. Cunningham, A. B. There "ain't no mountain high enough"?: The drivers, diversity and sustainability of China's Rhodiola trade. Journal of Ethnopharmacology. 252, 112379 (2020).
  18. Wang, Q., Ruan, X., Jin, Z. H., Yan, Q. C., Tu, S. Identification of Rhodiola species by using RP-HPLC. Journal of Zhejiang University. Science. B. 6 (6), 477-482 (2005).
  19. Dong, X., Guo, Y., Xiong, C., Sun, L. Evaluation of two major Rhodiola species and the systemic changing characteristics of metabolites of Rhodiola crenulata in different altitudes by chemical methods combined with UPLC-QqQ-MS-based metabolomics. Molecules. 25 (18), 4062 (2020).
  20. Zhao, W., et al. HPLC fingerprint differentiation between natural and ex situ populations of Rhodiola sachalinensis from Changbai Mountain, China. PloS One. 9 (11), 112869 (2014).
  21. Yu, Y. Y. Quality evaluation of Tibetan medicine Rhodiolae crenulatae radix et rhizome based on sensory recognition and near infrared spectrum analysis. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. , Chinese Master's Thesis (2020).
  22. Lv, X. M. Simultaneous determination of 5 chemical components in 3 kinds of Rhodiola rosea by HPLC. China Pharmacy. 29 (18), 2515-2519 (2018).
  23. Dong, T., Sha, Y., Liu, H., Sun, L. Altitudinal variation of metabolites, mineral elements and antioxidant activities of Rhodiola crenulata (Hook.f. & Thomson) H.Ohba. Molecules. 26 (23), 7383 (2021).
  24. Ma, D., et al. Application of UHPLC fingerprints combined with chemical pattern recognition analysis in the differentiation of six Rhodiola species. Molecules. 26 (22), 6855 (2021).
  25. Li, X. H., et al. Metabolic discrimination of different Rhodiola species using 1H-NMR and GEP combinational chemometrics. Chemical & Pharmaceutical Bulletin. 67 (2), 81-87 (2019).
  26. Liu, Y., et al. Identification of Hippophae species (Shaji) through DNA barcodes. Chinese Medicine. 10, 28 (2015).

Tags

JoVE में इस महीने अंक 200 पहचान Rhodiola Crenulata औषधीय सामग्री दवा सुरक्षा सरल तेज प्रभावी सस्ती जड़ी-बूटी पारंपरिक तिब्बती चिकित्सा उच्च ऊंचाई तिब्बत युन्नान सिचुआन क्षेत्र जैव गतिविधियों विरोधी भड़काऊ विरोधी हाइपोक्सिया एंटीऑक्सीडेंट गुण बाजार की मांग संसाधन सामग्री भ्रमित उत्पाद मानक प्रक्रिया क्षेत्र की पहचान नियमित प्रयोगशाला परीक्षण निवास स्थान सूक्ष्म विशेषताएं पतली परत क्रोमैटोग्राफी तिब्बती का विकास चिकित्सा गुणवत्ता नियंत्रण
फील्ड संग्रह और प्रयोगशाला नियमित <em>Rhodiola crenulata</em> की पहचान
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Wang, J., Xie, N., Li, M., Su, J.,… More

Wang, J., Xie, N., Li, M., Su, J., Hou, Y., Zhang, Y., Wang, X. Field Collection and Laboratory Routine Identification of Rhodiola crenulata. J. Vis. Exp. (200), e65947, doi:10.3791/65947 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter