Aplysia californica nöronların büyüme konisinin motilite ve rehberlik yüksek çözünürlüklü görüntüleme için mükemmel bir büyük kültür büyüme konileri gelişir. Burada, diseksiyon ve Aplysia çanta hücresi nöronların kaplama gibi canlı hücre görüntüleme için bir oda kurmak için bir protokol mevcut.
Abstract
Nöronal büyüme konileri, ortamda, rehberlik ipuçları tespit ve uygun hedef hücre doğru yönlü hareket içine bu bilgileri transduce akson ucunda son derece hareketli yapılardır. Rehberlik bilgileri tam olarak hücre yüzeyi altında yatan dinamik sitoskeletal ağlara iletilir anlamak için, bir canlı hücre protein dinamiği yüksek zamansal ve mekansal çözünürlükte görüntüleme için uygun bir model sistem gerekiyor. Tipik omurgalı büyüme konileri kantitatif F-aktin ve mikrotübül dinamiklerini analiz etmek için çok küçük. Deniz tavşan Aplysia californica Nöronlar, omurgalı nöronlar 5-10 kat daha büyük oda sıcaklığında kolayca saklanabilir ve mikromanipülasyon ve biyofiziksel ölçümler için çok sağlam hücreler. Onların büyüme konileri çok sitoplazmik bölge ve iyi tanımlanmış bir iskelet sistemi tanımlamıştır. Nöronal hücre gövdeleri büyüme konisinin motilite ve rehberlik eğitimi için probların çeşitli microinjected olabilir. Mevcut protokolde, karın ganglion, çanta hücresi nöronların kültür ve büyüme konileri canlı hücre görüntüleme için bir görüntüleme odası kurma diseksiyonu için bir prosedür ortaya koymaktadır.
Protocol
Çözümler L15-ASW hücre kültür ortamı (1l) 1 torba toz L15 800 ml H 2 O ultra saf eklemek NaCl 400 mm MgSO 4 27 mM MgCl 2 28 mM 4 mM L-Glutamine Gentamisin 50 mg / ml Hepes 5 mm PH 7.9 'a ayarlayın Damla damla CaCl 2 9.3 mM ekle (çökeltileri eğer stop) 1 lt H 2 O ultra saf ekle Ozmometre (buhar basıncı, Wescor # 5520) ozmo…
Discussion
Aplysia çanta hücre nöronlar olmayan çok az sayıda nöron hücreleri ile bir serum serbest nöronal hücre kültürü sistemi sağlar. Bu nöronlar, bir dizi önemli hücre biyolojik soruları çözmek için uygun çok geniş bir büyüme konileri oluşturur. Çanta hücre nöronlar birkaç saat içinde kolayca manipüle ve oda sıcaklığında az görüntülü olabilir. Floresan kullanarak bir F-aktin ve mikrotübül polimerizasyon ve translokasyon dinamiklerinin kantitatif çeşitli parametreler analiz edebilir speckle Mikroskobu (FS…
Acknowledgements
Biz Ryan Maneri (Oystercatcher Productions, LLC), diseksiyon video düzenleme ile ilgili yardım için prosedür ve Rodney McPhail (Biyolojik Bilimler Bölümü, Purdue University) çekim için teşekkür etmek istiyorum. Suter laboratuarında Araştırma Purdue Üniversitesi'nde NIH (R01 NS049233) ve Bindley Bioscience Merkezi hibe DMS tarafından desteklenmektedir
Lee, A. C., Decourt, B., Suter, D. M. Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones. J. Vis. Exp. (12), e662, doi:10.3791/662 (2008).